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第六章 种子生活力测定的原理和方法
一、种子生活力的概念和测定意义 二、种子生活力四唑染色测定 三、种子生活力的其他测定方法
2020/11/1
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wenku.baidu.com
第六章 种子生活力测定的原理和方法
一、种子生活力的概念和测定意义
1、种子生活力（seed viability）的概念
种子生活力是指种子发芽的潜在能力和种胚所具有的生命 力。通常是指一批种子中具有生命力的种子数占种子总数的 百分率。
3、特点
➢ 原理可靠 ➢ 结果准确(与标准发芽率误差一般不超过3-5%) ➢ 不受休眠限制 ➢ 简便快速 6-24h Vitascope 20-30min ➢ 成本低廉
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
4、适应范围
✓ 测定休眠种子的发芽潜力 ✓ 测定收获后马上要播种的种子的发芽潜力 ✓ 测定发芽缓慢的种子的发芽潜力 ✓ 测定发芽末期未发芽种子的生活力 ✓ 测定种子收获或加工期间损伤种子的生活力 ✓ 解决发芽期间遇到的问题 ✓ 查明种子贮藏期间劣变衰老程度 ✓ 时间紧迫，调种时快速测定种子生活力
预湿
水浸快速预湿：适合于水稻、大豆和花生等作物种子
纸床缓慢预湿：适合于葱、玉米和小麦等作物种子
◎ 纸床预湿(小粒豆类种子)
◎ 纸卷预湿(大豆、菜豆、豌豆）
H2O2溶液浸种： （为了加快种子吸胀和促进酶的活化以及 缩短预湿时间） 0.3%, 20～30℃, 1 h
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
✓ 所以该试剂需用棕色瓶装盛，并用黑纸外面包装。 ✓ 已配好的四唑溶液应装入棕色玻璃瓶里，存放在暗处。 ✓ 在进行种子染色时，也许将其放在暗处和弱光处进行。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
△ 测定方法
建议使用 0.1%～1.0% 四唑盐的水溶液
➢ 切开的种子用 0.1%～0.5% 浓度的四唑溶液； ➢ 整个胚、整粒种子或斜切、横切或穿刺的种子需用 1.0% 浓度
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
① 四氮唑：2,3,5-氯（溴）化三苯基四氮唑
（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride or Bromide） 简
称：四唑或红四唑 缩写：TTC， TTB，TZ
△ 理化性质
白色或淡黄色的粉剂，熔点243℃； 当温度达到245℃时就会分解，易溶于水，具有微毒； 遇到直射光线时会被还原成粉红色，
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
2、原理
无色的的三苯基四氮唑被种子吸收后，在胚部活细胞 中脱氢酶的作用下，还原成为红色的、稳定、不扩散的 三苯基甲 ，这样，就可根据染色的部位和深浅来区分种 子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
（2）染色前的样品准备
目的：使四唑溶液快速和充分渗入种子全部活组织，加快染色反 应，采用适当方法使胚的主要构造和活的营养组织暴露出来。
a) 不需预湿和附加准备：如苜蓿种子
b) 采用缓慢预湿后不需样品准备：如大豆种子等
c) 穿刺或切开胚乳：小粒牧草等种子
d) 沿胚纵切：水稻、玉米、和麦类等 e) 近胚纵切：松柏和伞形科等植物种子 f) 上半粒纵切：莴苣和其他菊科等植物种子
1942年由德国H. Lakon发明 1950年ISTA成立四唑测定技术委员会 1953年ISTA世界大会第一次将四唑测定列入国际种子检验规程 《四唑测定手册》（Handbook on Tetrazolium Test），Moore，
1984年，650多个属和种 1995年我国将四唑测定列入农作物种子检验规程
6、测定程序
（1）预处理 预措：是指在种子预湿前除去种子外部的附属物和在种子
非要害部位弄破种皮。
预湿: 为加快种子充分吸湿，软化种皮，便于样品准备，以
提高染色的均匀度，通常种子在染色前要进行预湿。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
6、测定程序
（1）预处理
农作物种子四唑染色技术规定
能发芽的种子 暂时不能发芽而具有生命力的休眠种子
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
2、测定种子生活力的意义
（1）休眠的种子必须进行生活力测定 （2）快速预测种子发芽能力
第六章 种子生活力测定的原理和方法
二、种子生活力四唑染色测定（TTC test or TZ test）
1、发展简史
解于1000 ml 蒸馏水； ➢ 然后取 2 份母液Ⅰ和 3 份母液Ⅱ混合即成。
AOSA 规程法
➢ 在1000 ml 蒸馏水中加入 5.45 g NaH2PO4 和 3.79 g Na2HPO4 ，充分溶解即成。
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5、所需试剂
③ 乳酸苯酚透明液
称取 0.1 g 四唑粉剂溶解于 100 ml 磷酸缓冲溶液中，即配成 0.1% 四唑溶液；
可用 NaOH 或 NaHCO3 溶液调节 ph 值。
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5、所需试剂
② 磷酸缓冲液
ISTA TZ手册法
➢ 母液Ⅰ：称取 9.078 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）溶解于1000 ml 蒸馏水中； ➢ 母液Ⅱ：称取 9.472 g 磷酸氢二钠（Na2HPO4）或 11.876 g Na2HPO4 ·2H2O 溶
的四唑溶液； ➢ 种子染色时间与四唑溶液浓度有关。
浓度增加，染色反应所需时间也随之缩短，从染色效果看，以较低浓度为宜； 测定时，要求四唑溶液的 ph 值在 6 ～7 范围之内。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
△ 配制方法
称取 1 g 四唑粉剂溶解于 100 ml 磷酸缓冲溶液中，即配成 1.0% 四唑溶液；
用于小粒豆类种子或牧草种子,染色后种皮、稃壳或胚乳变为透明。
④ 过氧化氢溶液
用于某些牧草种子（黑麦草）的预湿浸种，加快酶的活化和吸胀。
⑤ 杀菌剂和抗生素
延缓衰弱种子的劣变进程。
⑥ 胶液硬化剂
有些种子浸种后，种皮表面出现胶液而变得非常光滑，难以拿牢进行 样品准备。
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一、种子生活力的概念和测定意义 二、种子生活力四唑染色测定 三、种子生活力的其他测定方法
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
一、种子生活力的概念和测定意义
1、种子生活力（seed viability）的概念
种子生活力是指种子发芽的潜在能力和种胚所具有的生命 力。通常是指一批种子中具有生命力的种子数占种子总数的 百分率。
3、特点
➢ 原理可靠 ➢ 结果准确(与标准发芽率误差一般不超过3-5%) ➢ 不受休眠限制 ➢ 简便快速 6-24h Vitascope 20-30min ➢ 成本低廉
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4、适应范围
✓ 测定休眠种子的发芽潜力 ✓ 测定收获后马上要播种的种子的发芽潜力 ✓ 测定发芽缓慢的种子的发芽潜力 ✓ 测定发芽末期未发芽种子的生活力 ✓ 测定种子收获或加工期间损伤种子的生活力 ✓ 解决发芽期间遇到的问题 ✓ 查明种子贮藏期间劣变衰老程度 ✓ 时间紧迫，调种时快速测定种子生活力
预湿
水浸快速预湿：适合于水稻、大豆和花生等作物种子
纸床缓慢预湿：适合于葱、玉米和小麦等作物种子
◎ 纸床预湿(小粒豆类种子)
◎ 纸卷预湿(大豆、菜豆、豌豆）
H2O2溶液浸种： （为了加快种子吸胀和促进酶的活化以及 缩短预湿时间） 0.3%, 20～30℃, 1 h
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
✓ 所以该试剂需用棕色瓶装盛，并用黑纸外面包装。 ✓ 已配好的四唑溶液应装入棕色玻璃瓶里，存放在暗处。 ✓ 在进行种子染色时，也许将其放在暗处和弱光处进行。
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5、所需试剂
△ 测定方法
建议使用 0.1%～1.0% 四唑盐的水溶液
➢ 切开的种子用 0.1%～0.5% 浓度的四唑溶液； ➢ 整个胚、整粒种子或斜切、横切或穿刺的种子需用 1.0% 浓度
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5、所需试剂
① 四氮唑：2,3,5-氯（溴）化三苯基四氮唑
（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride or Bromide） 简
称：四唑或红四唑 缩写：TTC， TTB，TZ
△ 理化性质
白色或淡黄色的粉剂，熔点243℃； 当温度达到245℃时就会分解，易溶于水，具有微毒； 遇到直射光线时会被还原成粉红色，
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2、原理
无色的的三苯基四氮唑被种子吸收后，在胚部活细胞 中脱氢酶的作用下，还原成为红色的、稳定、不扩散的 三苯基甲 ，这样，就可根据染色的部位和深浅来区分种 子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。
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（2）染色前的样品准备
目的：使四唑溶液快速和充分渗入种子全部活组织，加快染色反 应，采用适当方法使胚的主要构造和活的营养组织暴露出来。
a) 不需预湿和附加准备：如苜蓿种子
b) 采用缓慢预湿后不需样品准备：如大豆种子等
c) 穿刺或切开胚乳：小粒牧草等种子
d) 沿胚纵切：水稻、玉米、和麦类等 e) 近胚纵切：松柏和伞形科等植物种子 f) 上半粒纵切：莴苣和其他菊科等植物种子
1942年由德国H. Lakon发明 1950年ISTA成立四唑测定技术委员会 1953年ISTA世界大会第一次将四唑测定列入国际种子检验规程 《四唑测定手册》（Handbook on Tetrazolium Test），Moore，
1984年，650多个属和种 1995年我国将四唑测定列入农作物种子检验规程
6、测定程序
（1）预处理 预措：是指在种子预湿前除去种子外部的附属物和在种子
非要害部位弄破种皮。
预湿: 为加快种子充分吸湿，软化种皮，便于样品准备，以
提高染色的均匀度，通常种子在染色前要进行预湿。
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6、测定程序
（1）预处理
农作物种子四唑染色技术规定
能发芽的种子 暂时不能发芽而具有生命力的休眠种子
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
2、测定种子生活力的意义
（1）休眠的种子必须进行生活力测定 （2）快速预测种子发芽能力
第六章 种子生活力测定的原理和方法
二、种子生活力四唑染色测定（TTC test or TZ test）
1、发展简史
解于1000 ml 蒸馏水； ➢ 然后取 2 份母液Ⅰ和 3 份母液Ⅱ混合即成。
AOSA 规程法
➢ 在1000 ml 蒸馏水中加入 5.45 g NaH2PO4 和 3.79 g Na2HPO4 ，充分溶解即成。
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5、所需试剂
③ 乳酸苯酚透明液
称取 0.1 g 四唑粉剂溶解于 100 ml 磷酸缓冲溶液中，即配成 0.1% 四唑溶液；
可用 NaOH 或 NaHCO3 溶液调节 ph 值。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
② 磷酸缓冲液
ISTA TZ手册法
➢ 母液Ⅰ：称取 9.078 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）溶解于1000 ml 蒸馏水中； ➢ 母液Ⅱ：称取 9.472 g 磷酸氢二钠（Na2HPO4）或 11.876 g Na2HPO4 ·2H2O 溶
的四唑溶液； ➢ 种子染色时间与四唑溶液浓度有关。
浓度增加，染色反应所需时间也随之缩短，从染色效果看，以较低浓度为宜； 测定时，要求四唑溶液的 ph 值在 6 ～7 范围之内。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
△ 配制方法
称取 1 g 四唑粉剂溶解于 100 ml 磷酸缓冲溶液中，即配成 1.0% 四唑溶液；
用于小粒豆类种子或牧草种子,染色后种皮、稃壳或胚乳变为透明。
④ 过氧化氢溶液
用于某些牧草种子（黑麦草）的预湿浸种，加快酶的活化和吸胀。
⑤ 杀菌剂和抗生素
延缓衰弱种子的劣变进程。
⑥ 胶液硬化剂
有些种子浸种后，种皮表面出现胶液而变得非常光滑，难以拿牢进行 样品准备。
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