最新过氧化氢酶活力的测定

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实验三过氧化氢酶活性的测定

一、实验目的:

了解过氧化氢酶的作用,掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原理和方法;

二、实验原理:

过氧化氢酶是一类色素蛋白,含有铁,它能催化过氧化氢分解为水和分子氧,在此过程中起传递电子的作用,过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。

R(Fe+2)2+H2O2---R(Fe+3OH)2

R(Fe+3OH)2+ H2O2 ----R(Fe+2)2+2H2O+O2

并合上式:H2O2 ----2H2O+O2

据此,可根据消耗H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量的过氧化氢溶液,经酶促反应后,加入过量的KI溶液生成的I2用标准的Na2S2O3滴定,根据N a2SO3消耗的体积计算H2O2的消耗量。

三、实验材料、仪器和试剂:

1、实验材料:小白菜

2、仪器:恒温水浴锅、研钵、容量瓶、刻度吸管、100mL三角瓶

3、试剂:

(1)0.05mol/L H2O2 (2)2mol/LH2SO4

(3)0.1mol/L Na2S2O3

(4)1%淀粉溶液(5)10%(NH4)6Mo7O24

(6)pH7.8的磷酸缓冲液(7)20% KI

(8)CaCO3

四、实验步骤:

(1)酶液提取:

称取2.5g白菜叶,加少量CaCO3,2mLpH7.8的缓冲液少量,研成匀浆,移入100ml容量瓶,用上述缓冲液冲洗研钵数次转入容量瓶中定容,静置10分钟,过滤。取滤液10mL于另一100mL的容量瓶中稀释定容待测(根据酶活高低而定)。

(2)酶促反应:

取锥形瓶4个,编好号各加入10ml酶液之后,立即向两个瓶中加入2mol/L H2SO45mL,终止酶活性,作空白对照。向另外两瓶各加H2O2 5mL,摇匀,在加入H2O2的那一刻起,记录时间,5分钟后迅速向实验瓶中加入2mol/LH2SO45mL,终止酶活性。向三角瓶中加1mL 20% KI和3滴(NH4)6Mo7O24,摇匀后迅速用标准Na2S2O3溶液进行滴定至淡黄色,加入1mL1%淀粉指试剂,蓝色恰好消失,

记录消耗的Na 2S 2O 3的体积V 0,V ;

五、结果记录与数据处理:

被分解的H 2O 2量(mg )=(空白滴定值-样品滴定值)×Na 2S 2O 3摩尔浓度×17 过氧化氢酶活性(mg.g -1.min -1)=

(min)

)()()(O H 22时间样品重测定取液量总体积量被分解的 g mg 六、 结果分析与问题讨论:

实验十还原型V C含量测定

一、实验目的

学会从生物样品中提取维生素C方法,了解蔬菜中维生素C的含量。

学会测定维生素C含量的原理和方法,进一步掌握滴定法的基本操作技术. 二、实验原理

Vc由于其结构中具有烯二醇的结构,所以它是一种强还原剂,易被弱氧化剂氧化脱氢而成氧化型抗坏血酸。Vc在酸性溶液中比中性溶液及碱性溶液中稳定,但易被热、光及某些金属离子破坏。

本实验是用碘液作氧化剂,淀粉为指示剂,当Vc全部被氧化后,过量一滴碘液与淀粉指示剂反应生成淡兰色络合物,即为终点。

三、实验材料、试剂及仪器

材料:西红柿。

试剂:

2%草酸溶液:称取20g草酸溶于蒸馏水中,溶解后稀释到1000mL,混匀;1%可溶性淀粉溶液:称取1g可溶性淀粉用少量蒸馏水调成匀浆,倾入80 mL 的沸水中继续煮沸至透明,冷却后稀释至100 mL;

0.1mol/L碘液(随用随配):称取6.5克碘和20克碘化钾于研钵中,加少量的蒸馏水研磨至完全溶解后稀释至500毫升混匀。贮存于棕色试剂瓶中;

1%草酸溶液:称取10g草酸溶于蒸馏水中,溶解后稀释到1000mL,混匀;

0.1mg/mLVc标准溶液:准确称取抗坏血酸10mg,溶于1%草酸溶液中稀释至100mL 贮存于棕色试剂瓶中冷藏(现用现配)。

仪器:万分之一电子天平;棕色酸式滴定管;三角瓶等。

四、实验操作步骤:

1、碘液的标定:吸取0.1mg/mLVc标准溶液10mL于100mL的锥形瓶中,加5滴可溶性淀粉,摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝色,且30秒内不退色,即为终点。滴二个平行样。

2、样品的提取:准确称取10g左右的样品1份,

用少许2%草酸溶液研磨成匀浆,转入100mL容量瓶中,用2%的草酸溶液洗研钵3-4次,一并转入容量瓶中,最后用2%草酸溶液定容至100mL摇匀,放置10

分钟后过滤,滤液备用。

3、滴定:

空白滴定: 准确吸取10mL2%草酸溶液于100mL 的锥形瓶中,加5滴1%淀粉指示剂,摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝色,且30秒内不退色,即为终点,滴二个平行样。

样品滴定: 准确吸取10mL 样品于100mL 的锥形瓶中,加5滴1%淀粉指示剂,摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝色,且30秒内不退色,即为终点,滴二个平行样。

六、数据记录及计算

1、样品的重量(g ):样品1:W 1 =

样品2:W 2 =

2、碘液的标定(mL ): V 1 = V 2= V =

3、样品的滴定(mL ):

4、空白的滴定(mL ):

5、计算:

每毫升碘液相当于Vc 的毫克数K (mgVc/mLI 2)= V

101.0⨯ Vc 的含量(mg/100g 样品)=

10010

W 100C )V V (⨯⨯⨯⨯-样品空白样品 六、结果分析与讨论

翻译练习

一: 主+谓+宾

1.谁知道答案?

2.他喜欢看书.

3.他们的学习习惯已经影响(affect)了我。

4:昨晚我写了一封信.

5: 每天早晨大声读英语能够提高你的口语。

6:你们必须在两周内完成这项工作。.

7:那位先生能流利的说三种语言.

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