流式细胞仪培训
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633nm空冷激光： APC、APC-CY7 、CY5
90-4水冷激光：UV（333-364nm） HOECHST 33342、DAPI …
流式细胞仪培训
三、流式细胞仪应用
流式细胞仪培训
流式细胞仪应用
Ø 淋巴细胞免疫功能测定
Ø 干细胞研究
Ø 细胞增殖与凋亡检测
Ø 细胞周期及倍体分析
Ø 细胞活性分析
Ø 细胞分选
Ø ……
流式细胞仪培训
细胞免疫功能测定
• 淋巴细胞亚群 • 活化的T淋巴细胞 • 抗原特异性免疫细胞 • 调控性T细胞 • 树突状细胞 • 先天免疫细胞
流式细胞仪培训
CD抗原及其相关细胞群
• 细胞群
CD抗原
• T细胞 CD2 CD3 CD4 CD5 CD7 CD8 CD28 CD38
• B细胞 CD10 CD19 CD20-CD24 CD37 CD72-CD75
• 髓系细胞 CD13 CD14 CD15-CD17 CD33 CD34 CD35
• NK细胞 CD16 CD56 CD57 CD94
• 血小板 CD31 CD41 CD42a CD42b CD61 CD62p CD63
流式细胞仪培训
仪器基本组成
流路
➢ 流动室
➢ 鞘液SHEATH
➢ 样本流SAMPLE 单细胞悬液5105-1106个/ml
光路
➢ 光源
➢ 滤片
➢ 光电倍增管PMT HV
电路
➢ 放大电路HV及GAIN 增益
➢ A/D转换
统计
➢ 计算机
流式细胞仪培训
流路
Injector Tip
Sheath fluid
流式细胞仪培训
光路 - 滤片特性
长通滤片 – 允许长于设定波长的光通过 短通滤片 – 允许短于设定波长的光通过 带通滤片 – 允许一定带宽的波长通过 当以 45o 角放置滤片时,该滤片可以通过一定波长的光,同
时也可以阻断并折射该波长以下的光 ，这种方式的滤片 称为二向色性滤片( dichroic filter)
数Βιβλιοθήκη Baidu处理
电信号
对数 线性 线性 线性 对数
脉冲处理，模数转换 （面积，峰高，宽度）
记录数据，显示结果
流式细胞仪培训
流式细胞仪产生的信号 非荧光信号
颗粒度
细胞大小
流式细胞仪培训
荧光信号
FL1 – FITC,GFP…(PMT2) FL2 – PE (PMT3) FL3 – ECD,PI… (PMT4) FL4 – PC5,APC… (PMT5)
疾病
CD3 CD4 CD8
自身免疫病
降低 增高
CD4/ NK CD8
降低 降低
AIDS SARS
降低 降低
严重降 增高 低
630 nm BandPass Filter
White Light Source
流式细胞仪培训
光信号分离，导向，各探测通道PMT 接收并转化为电信号。
激光束
侧向散射光， 荧光
二色镜
1
2
细胞
前 向 散 射 光
收集透镜
光信号收集
3
带通滤波片 光电倍增管
流式细胞仪培训
光信号
FSC SSC FL1 FL2 FL3
Fluorescence signals
Focused laser beam
室流 动
流式细胞仪培训
流式细胞仪光路图
620BP FL3 (ECD)
575BP FL2 (PE)
525BP FL1 (FITC)
Air-cooled Argon Ion Laser
Side Scatter Detector
675BP FL4 (PC5)
Beam Shaping Lenses
645DL
600DL 550DL
488BK 488DL
流动室
High Sensitivity Quartz Flow Cell
Forward Scatter Detector
流式细胞仪培训
激光配置
488nm氩离子激光器 633nm氦氖激光器 大功率水冷紫外激光器
流式细胞仪培训
原 理
u细胞表面的抗原(或细胞膜受体)与相关的 荧光抗体结合，形成带有荧光的抗原抗体 复合物。 u通过流式细胞仪测定其荧光量，即可得到 细胞群的不同抗原位点表达情况。
流式细胞仪培训
488nm空冷激光 ： FITC、PE、ECD、PC5、PI、7AAD、 PerCP 、EGFP 、EYFP 、AO 、TO 、Fluo3
主要内容
➢ 流式细胞仪概述 ➢ 流式细胞仪的工作原理 ➢ 流式细胞仪的应用 ➢ 检测的一般步骤
流式细胞仪培训
一、流式细胞仪概述
流式细胞仪培训
流式细胞仪种类
BD-Calibur
BD FACSVantage
流式细胞仪培训
Epics Altra
Epics Altra 流式B细胞e仪培c训kman Coulter
流式细胞仪培训
二、流式细胞仪工作原理
流式细胞仪培训
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪通常以激光作为激发光源，经过 聚焦整形后的光束垂直照射在样品流上，被 荧光染色的细胞在激光束的照射下产生散射 光和激发荧光。这两种信号被光电二极管和 光电倍增管接收，之后转换为电信号，再通 过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被 计算机识别的数字信号，最后由计算机进行 计算处理。
流式细胞仪培训
流式细胞仪的基本结构
流式细胞仪培训
特殊的显微镜
流式细胞仪
显微镜
流动的细胞
静止的细胞样本
数量大
数量少
高速分选
样本难以再利用
细胞群体特征量分布 可以揭示细胞内部结构信息
流式细胞仪培训
流式细胞仪的主要特点
Ø 高速测定细胞，大样本计数 Ø 检测稀有细胞 Ø 多参数分析 Ø 自动化 Ø 细胞分选
• 激活抗原 CD26 CD30 CD69 CD95-CD97
• 粘附分子 CD11a-c CD18 CD29 CD44 CD49a-f
• 内皮细胞 CD105 CD106 CD109
• 细胞因子受体 CD25 CD115 CD117 CD122 CD126
流式细胞仪培训
淋巴细胞亚群数量检查项目和意义
流式细胞仪的定义
流式细胞仪是指，使细胞（或其 他粒子）以单个方式依次高速通过激 发光束，采集细胞被光照时产生的各 种信号，对信号进行处理，并对各参 数进行关联分析的一种仪器。
流式细胞仪培训
流式细胞术
（FLOW CYTOMETRY）
利用流式细胞仪通过检测荧光信号来检 测细胞或其它颗粒性物质（表面或胞浆或胞 核）的物理、化学特性并通过这些特性对细 胞或颗粒进行定量。 u 检测表面标记物 u 检测胞浆标记物 u 检测胞核内标记物 u 检测可溶性蛋白
90-4水冷激光：UV（333-364nm） HOECHST 33342、DAPI …
流式细胞仪培训
三、流式细胞仪应用
流式细胞仪培训
流式细胞仪应用
Ø 淋巴细胞免疫功能测定
Ø 干细胞研究
Ø 细胞增殖与凋亡检测
Ø 细胞周期及倍体分析
Ø 细胞活性分析
Ø 细胞分选
Ø ……
流式细胞仪培训
细胞免疫功能测定
• 淋巴细胞亚群 • 活化的T淋巴细胞 • 抗原特异性免疫细胞 • 调控性T细胞 • 树突状细胞 • 先天免疫细胞
流式细胞仪培训
CD抗原及其相关细胞群
• 细胞群
CD抗原
• T细胞 CD2 CD3 CD4 CD5 CD7 CD8 CD28 CD38
• B细胞 CD10 CD19 CD20-CD24 CD37 CD72-CD75
• 髓系细胞 CD13 CD14 CD15-CD17 CD33 CD34 CD35
• NK细胞 CD16 CD56 CD57 CD94
• 血小板 CD31 CD41 CD42a CD42b CD61 CD62p CD63
流式细胞仪培训
仪器基本组成
流路
➢ 流动室
➢ 鞘液SHEATH
➢ 样本流SAMPLE 单细胞悬液5105-1106个/ml
光路
➢ 光源
➢ 滤片
➢ 光电倍增管PMT HV
电路
➢ 放大电路HV及GAIN 增益
➢ A/D转换
统计
➢ 计算机
流式细胞仪培训
流路
Injector Tip
Sheath fluid
流式细胞仪培训
光路 - 滤片特性
长通滤片 – 允许长于设定波长的光通过 短通滤片 – 允许短于设定波长的光通过 带通滤片 – 允许一定带宽的波长通过 当以 45o 角放置滤片时,该滤片可以通过一定波长的光,同
时也可以阻断并折射该波长以下的光 ，这种方式的滤片 称为二向色性滤片( dichroic filter)
数Βιβλιοθήκη Baidu处理
电信号
对数 线性 线性 线性 对数
脉冲处理，模数转换 （面积，峰高，宽度）
记录数据，显示结果
流式细胞仪培训
流式细胞仪产生的信号 非荧光信号
颗粒度
细胞大小
流式细胞仪培训
荧光信号
FL1 – FITC,GFP…(PMT2) FL2 – PE (PMT3) FL3 – ECD,PI… (PMT4) FL4 – PC5,APC… (PMT5)
疾病
CD3 CD4 CD8
自身免疫病
降低 增高
CD4/ NK CD8
降低 降低
AIDS SARS
降低 降低
严重降 增高 低
630 nm BandPass Filter
White Light Source
流式细胞仪培训
光信号分离，导向，各探测通道PMT 接收并转化为电信号。
激光束
侧向散射光， 荧光
二色镜
1
2
细胞
前 向 散 射 光
收集透镜
光信号收集
3
带通滤波片 光电倍增管
流式细胞仪培训
光信号
FSC SSC FL1 FL2 FL3
Fluorescence signals
Focused laser beam
室流 动
流式细胞仪培训
流式细胞仪光路图
620BP FL3 (ECD)
575BP FL2 (PE)
525BP FL1 (FITC)
Air-cooled Argon Ion Laser
Side Scatter Detector
675BP FL4 (PC5)
Beam Shaping Lenses
645DL
600DL 550DL
488BK 488DL
流动室
High Sensitivity Quartz Flow Cell
Forward Scatter Detector
流式细胞仪培训
激光配置
488nm氩离子激光器 633nm氦氖激光器 大功率水冷紫外激光器
流式细胞仪培训
原 理
u细胞表面的抗原(或细胞膜受体)与相关的 荧光抗体结合，形成带有荧光的抗原抗体 复合物。 u通过流式细胞仪测定其荧光量，即可得到 细胞群的不同抗原位点表达情况。
流式细胞仪培训
488nm空冷激光 ： FITC、PE、ECD、PC5、PI、7AAD、 PerCP 、EGFP 、EYFP 、AO 、TO 、Fluo3
主要内容
➢ 流式细胞仪概述 ➢ 流式细胞仪的工作原理 ➢ 流式细胞仪的应用 ➢ 检测的一般步骤
流式细胞仪培训
一、流式细胞仪概述
流式细胞仪培训
流式细胞仪种类
BD-Calibur
BD FACSVantage
流式细胞仪培训
Epics Altra
Epics Altra 流式B细胞e仪培c训kman Coulter
流式细胞仪培训
二、流式细胞仪工作原理
流式细胞仪培训
流式细胞仪工作原理
流式细胞仪通常以激光作为激发光源，经过 聚焦整形后的光束垂直照射在样品流上，被 荧光染色的细胞在激光束的照射下产生散射 光和激发荧光。这两种信号被光电二极管和 光电倍增管接收，之后转换为电信号，再通 过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被 计算机识别的数字信号，最后由计算机进行 计算处理。
流式细胞仪培训
流式细胞仪的基本结构
流式细胞仪培训
特殊的显微镜
流式细胞仪
显微镜
流动的细胞
静止的细胞样本
数量大
数量少
高速分选
样本难以再利用
细胞群体特征量分布 可以揭示细胞内部结构信息
流式细胞仪培训
流式细胞仪的主要特点
Ø 高速测定细胞，大样本计数 Ø 检测稀有细胞 Ø 多参数分析 Ø 自动化 Ø 细胞分选
• 激活抗原 CD26 CD30 CD69 CD95-CD97
• 粘附分子 CD11a-c CD18 CD29 CD44 CD49a-f
• 内皮细胞 CD105 CD106 CD109
• 细胞因子受体 CD25 CD115 CD117 CD122 CD126
流式细胞仪培训
淋巴细胞亚群数量检查项目和意义
流式细胞仪的定义
流式细胞仪是指，使细胞（或其 他粒子）以单个方式依次高速通过激 发光束，采集细胞被光照时产生的各 种信号，对信号进行处理，并对各参 数进行关联分析的一种仪器。
流式细胞仪培训
流式细胞术
（FLOW CYTOMETRY）
利用流式细胞仪通过检测荧光信号来检 测细胞或其它颗粒性物质（表面或胞浆或胞 核）的物理、化学特性并通过这些特性对细 胞或颗粒进行定量。 u 检测表面标记物 u 检测胞浆标记物 u 检测胞核内标记物 u 检测可溶性蛋白