呼吸道九联检简要操作规程

呼吸道九联检简要操作规程

一采血要求

1. 静脉血，指尖血（儿童）

2. 拒收溶血标本。脂血标本不影响检测。

二所需实验仪器和设备

1. 荧光显微镜

2. 洗盒，湿盒

3. 摇床

4. 15微升和150微升量程的移液器

5. 1000毫升量筒，1000毫升玻璃容器

三准备工作：

提前30分钟取出试剂盒恢复至室温，同时将试剂②中的成分加入1L蒸馏水，摇匀直至完全融化。

四试验步骤：

25ul血清+25 ul PBS溶液

↓混匀

取混合后的液体30ul

↓

加150ul吸附剂[⑦]

↓混匀，静置1分钟

离心4000转10-15分钟

↓

在载玻片上每孔加15ul上清液

↓

放入湿盒37度温育60分钟

↓

用PBS洗液冲洗载玻片后，浸泡在PBS洗液中并

放在摇床上摇动10分钟，再用蒸馏水冲洗↓

自然晾干或吹干，每孔加入15ul结合物[⑤]

↓

放入湿盒37度温育30分钟

↓

用PBS洗液冲洗载玻片，浸泡在PBS洗液中并

放在摇床上摇动10分钟，再用蒸馏水冲洗自然晾干或吹干

↓

加封闭介质盖上盖玻片观察结果

注意事项：

1，加样时，移液器不要触碰离心管底部的沉淀和九联检包被孔

2，实验结束后，九联检片子最好在2-3小时内观察，第二天观察不影响结果判断。若需保存，需冷冻避光。

3，结果判断

第2,5,6,7,8,9包被孔的阳性细胞为荧光均匀分布在包被细胞上，并且为明显的绿色；阳性细胞数占3%以上时，报阳性，其余阴性。

4，PBS常温放置一星期不影响实验结果，但要保证在此期间不被污染

5.若实验室没有摇床，洗涤过程中中间换一次PBS，同样能达到洗涤效果，

而不需要震摇

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