硝酸还原酶(NR)活性测定

实验三：硝酸还原酶（NR）活性测定

一、实验目的

了解硝酸还原酶的活性测定的原理，掌握活体测定硝酸还原酶地方法

二、实验原理

硝酸还原酶是植物氮元素代谢过程中的关键酶，于作物的吸收和利用氮元素有关，他们作用于硝酸根，使之还原为亚硝酸根根：NO3-+NADH++H+ NR NO2-+NAD++H2O产生的亚硝酸根可以从组织内渗入到外界溶液中，从而测定溶液中亚硝酸根的含量的增加即为NR活性大小测定时间磺胺与亚硝酸钠形成重氮盐，再与α-奈氨偶联形成紫色物质。反应液的酸度和温度都会对反应产生影响。

三、试剂与器材

1、材料：小白菜叶片

2、试剂：0.1mol/L ph7.5磷酸缓冲液，磺胺试剂、α-奈氨、0.2mol/LKNO

3、

NaNO2标准溶液

3、器材：分光光度计、注射器、试管、天平、烧杯、移液管、恒温箱

四、实验步骤

1、按下列表格配置不同浓度的NaNO2溶液

2、另取7支试管编号，取上述配置好的溶液各1ml，分别加入磺胺2ml、α-

奈氨2ml摇匀静置30min，在520nm处比色以NaNO2终浓度为横坐标绘制标准曲线

3、将小白菜叶片剪成0.5cm2大小称取两分，每份各0.5g放入另个烧杯中，

一个烧杯中加入0.1ml/L磷酸缓冲液5ml再加入蒸馏水5ml，作为对照组。

林一个烧杯中加入0.1mol/L磷酸缓冲液5ml和0.2mol/LKNO3溶液5ml作为实验组。将材料与溶液混合置于射器中抽气至材料沉入溶液。

4、将含材料的烧杯置于30℃恒温箱中30min，之后分别取1ml溶液按第二

步进行NO2-含量测定

5、结果分析：酶活性（NO2- μg g-1h-1）=（实验组NO2-含量-对照组NO2-含量）

/材料重量（g）/时间（h）

五、实验结果

实验分析及感悟:

由于实验过程中，移液管的混用可能会导致部分溶液污染导致实验产生误差。叶片剪切的由于抽气不够是结果偏小。

本次试验经历了很长时间，我们从上午10点一直做到下午一点才做完。当然经过努力的数据分析我们最终得到了我们所渴求的实验结果。值得一提的是本次试验是我第一次完全用计算机完成的，以为我希望通过这样的方式提高我对计算机作业的能力，虽然现在效率很低，用了很长时间才将此报告完成，却让我收获更多。

赵旭