凝聚胺法交叉配血
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全输血检查的推荐方法,该法具有:①检测 项目全②灵敏度高③特异性强④重复性好⑤ 客观性好⑥节省样品、试剂,结果易保存⑦ 可自动化操作。不足之处是成本昂贵。
5.抗球蛋白介质配血法是检查不完全抗体
最敏感、可靠的方法;但试剂价格较贵,操 作复杂、费时。
谢谢大家! 谢谢大家!
试验分步原理
血清 加入LIM
Polybrene 受体
混合液
IgG 抗 体 迅速致敏
红细胞悬液
血型抗原
试验分步原理
Polybrene 分 子 连 接到红细胞上
加入 Polybrene
试验分步原理
Polybrene 拉 近 红 细胞间 的距 离并造成凝集
1 个 IgG 分 子 同时连接两 个红细胞
离心
试验分步原理
加 入重悬 液减 弱 了 Polybrene 的作用
加重悬液
试验分步原理
已被血型抗体 致敏的红细胞 不会散开
阳性结果
试验分步原理
未被血型抗体致敏 的红细胞很快散开
阴性结果
试剂: 试剂 凝聚胺试剂盒;生理盐水 器材:小试管、滴管、试管架、记 器材 号笔、显微镜、离心机。 标本:静脉血。 标本
【注意事项】 注意事项】
1.可以用含EDTA抗凝血浆代替血清使用。 2.若受血者血清(血浆)含肝素,如洗肾患 者,须多加4~6滴Po1ybrene溶液以中和肝 素。 3.试剂使用前请放置至室温平衡后再行操 作。
4.在冬天室温极低的情况下进行交叉配血试 验操作,由于某些受血者血清中可能含有寒 冷凝集素等因素,而导致假阳性的结果出现, 建议进行交叉配血试验操作时室温保持在 22℃左右,最后滴加Resuspending时,将试 管立即置入37℃水浴中,轻轻转动试管混合, 并在30秒内观察结果。 5.不同的凝聚胺试剂盒操作方法各不相同, 实验时请严格按照说明书操作。
实验三 凝聚胺法交叉配血 凝聚胺法交叉配血
医学检验系 张晨光
目的:掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。 原理:聚凝胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐,溶
解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷, 有利于红细胞凝聚,低离子强度溶液也能降低红 细胞的Zeta电位 ,可进一步增加抗原抗体间的吸 引力。
当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时,与红细胞发生 紧密结合,此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胺的正电 荷,使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开; 如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体,加入解聚液可使 非特异性凝集消失。
4.轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝集,如 无凝集,则必须重作。 5.最后加入Resuspending2滴,轻轻转动试管混 匀并同时观察结果。 6. 结果判定:如果在30秒内(或按说明书) 凝集散开,代表是由Polybrene引起的非特异性 聚集,配血结果相合;如凝集不散开,则为 红细胞抗原抗体结合的特异性反应,配血结 果不相合。如反应可疑,可进一步倒在玻片 上用显微镜观察。
【方法学评价】 方法学评价】 1. 凝聚胺介质配血法反应较盐水法灵敏度高,
能检测几乎所有规则与不规则血型抗体,适用 于各类输血患者的配血。
2. 盐水介质配血法操作简单、反应快速,但
只能发现完全抗体。
源自文库3. 酶介质配血法操作较为简便,试剂便宜,
灵敏度高;但费时,准确性和稳定性差。
4.卡式配血(微柱凝胶法)已成为国际安
操作
1. 取试管两支,标明主侧次侧,主侧管加受 血者血清(血浆)1滴,和供血者3~5%红细胞 悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴,次侧管受血者 3~5%红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)l滴, 加供血者血清(血浆)1滴。 2. 各加LIM溶液3滴,混合均匀后,再各加 Polybrene溶液1滴,并混合均匀,置室温1分钟或 参照说明书。 3.普通离心机1000g离心15秒,然后把上清液 倒掉,不要沥干,让管底残留约0.1ml液体。
5.抗球蛋白介质配血法是检查不完全抗体
最敏感、可靠的方法;但试剂价格较贵,操 作复杂、费时。
谢谢大家! 谢谢大家!
试验分步原理
血清 加入LIM
Polybrene 受体
混合液
IgG 抗 体 迅速致敏
红细胞悬液
血型抗原
试验分步原理
Polybrene 分 子 连 接到红细胞上
加入 Polybrene
试验分步原理
Polybrene 拉 近 红 细胞间 的距 离并造成凝集
1 个 IgG 分 子 同时连接两 个红细胞
离心
试验分步原理
加 入重悬 液减 弱 了 Polybrene 的作用
加重悬液
试验分步原理
已被血型抗体 致敏的红细胞 不会散开
阳性结果
试验分步原理
未被血型抗体致敏 的红细胞很快散开
阴性结果
试剂: 试剂 凝聚胺试剂盒;生理盐水 器材:小试管、滴管、试管架、记 器材 号笔、显微镜、离心机。 标本:静脉血。 标本
【注意事项】 注意事项】
1.可以用含EDTA抗凝血浆代替血清使用。 2.若受血者血清(血浆)含肝素,如洗肾患 者,须多加4~6滴Po1ybrene溶液以中和肝 素。 3.试剂使用前请放置至室温平衡后再行操 作。
4.在冬天室温极低的情况下进行交叉配血试 验操作,由于某些受血者血清中可能含有寒 冷凝集素等因素,而导致假阳性的结果出现, 建议进行交叉配血试验操作时室温保持在 22℃左右,最后滴加Resuspending时,将试 管立即置入37℃水浴中,轻轻转动试管混合, 并在30秒内观察结果。 5.不同的凝聚胺试剂盒操作方法各不相同, 实验时请严格按照说明书操作。
实验三 凝聚胺法交叉配血 凝聚胺法交叉配血
医学检验系 张晨光
目的:掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。 原理:聚凝胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐,溶
解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷, 有利于红细胞凝聚,低离子强度溶液也能降低红 细胞的Zeta电位 ,可进一步增加抗原抗体间的吸 引力。
当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时,与红细胞发生 紧密结合,此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胺的正电 荷,使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开; 如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体,加入解聚液可使 非特异性凝集消失。
4.轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝集,如 无凝集,则必须重作。 5.最后加入Resuspending2滴,轻轻转动试管混 匀并同时观察结果。 6. 结果判定:如果在30秒内(或按说明书) 凝集散开,代表是由Polybrene引起的非特异性 聚集,配血结果相合;如凝集不散开,则为 红细胞抗原抗体结合的特异性反应,配血结 果不相合。如反应可疑,可进一步倒在玻片 上用显微镜观察。
【方法学评价】 方法学评价】 1. 凝聚胺介质配血法反应较盐水法灵敏度高,
能检测几乎所有规则与不规则血型抗体,适用 于各类输血患者的配血。
2. 盐水介质配血法操作简单、反应快速,但
只能发现完全抗体。
源自文库3. 酶介质配血法操作较为简便,试剂便宜,
灵敏度高;但费时,准确性和稳定性差。
4.卡式配血(微柱凝胶法)已成为国际安
操作
1. 取试管两支,标明主侧次侧,主侧管加受 血者血清(血浆)1滴,和供血者3~5%红细胞 悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴,次侧管受血者 3~5%红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)l滴, 加供血者血清(血浆)1滴。 2. 各加LIM溶液3滴,混合均匀后,再各加 Polybrene溶液1滴,并混合均匀,置室温1分钟或 参照说明书。 3.普通离心机1000g离心15秒,然后把上清液 倒掉,不要沥干,让管底残留约0.1ml液体。