MTT法测细胞毒性

MTT法测细胞毒性

试剂

MTT溶液四甲基偶氮唑盐（MTT）溶于PH7.2的磷酸盐缓冲液中，浓度为5mg/ml，除菌后2ml分装，于4℃避光保存。

含10%SDS的0.01M HCl SDS 10g

浓HCl（36%）86.2 ul

定容至100ml，过滤除菌

方法

1.将SP2/0细胞计数，调节细胞数至105/ml，制备10ml细胞悬液，加入96孔

板，100ul/孔，即细胞数104/孔。空白孔不加细胞悬液。

,37℃条件下培养24小时。

2.5%CO

2

3.每孔加入用含5%血清的DMEM 10倍系列稀释的毒素100ul。阴性对照孔不

加毒素。

,37℃条件下培养72小时。

4.5%CO

2

5.吸除药液120 ul, 每孔加入新鲜配制的MTT溶液20ul,即终浓度为1mg/ml，

37℃条件下培养4小时。

6.吸去上清50 ul，每孔加入150 ul含10%SDS的0.01M HCl溶液，震荡30

分钟。

7.酶标仪上测定A570。

8.计算细胞死亡率：

细胞死亡率（%）=（1-实验组A570/对照组A570）×100%

注意

1．细胞数范围：（0.5~2）×104。

2．MTT终浓度为0.5~2.5mg/ml，但一般浓度在0.5~1mg/ml就可以获得满意的结果。

3．加入MTT后，37℃条件下培养4~6小时。

4．设置空白与对照

空白孔：——+——+MTT+有机溶剂

对照孔：细胞+——+MTT+有机溶剂

5．DMSO易结冰（其溶点为18~20℃），室温偏低的条件下影响甲肷的溶解，使检测的光吸收值降低，且有机溶剂溶解的时间不能过长，如10分钟就可以获得结果。用SDS作溶剂可使所测光吸收值数日不变。