革兰氏阴性球菌

甲型链球菌 肺炎链球菌
菊糖发酵试验 胆汁溶菌试验
-（紫色） -（混浊）
+（黄色） +（澄清）
喉拭子标本 找出两种菌落
Gram 染色
微生物检验
痰培养肺炎链球菌检验全程报道
姚军
1.痰涂片（肺炎链球菌镜下）:
1.痰涂片（肺炎链球菌镜下）:
2.原始培养物18h后菌落（肺炎链球菌菌落）:
2.原始培养物18h后菌落（肺炎链球菌菌落）:
? 除葡萄糖外，不分解其它糖类
Taizhou University
与脑膜炎奈瑟菌相似，营养要求更高，只能在巧 克力平板及专用培养基上生长，形成灰白色细小S 型呈滴露样菌落
主要菌体表面抗原构造
? 菌毛
? 与粘附有关，免疫原性不强
? 脂多糖抗原
? 经常变异，相应抗体不能防止再感染
? 外膜蛋白
? PI：主要外膜蛋白，将淋病奈瑟菌分为18个血清型 ? PII：吸附易感细菌的蛋白
5.生化反应 :
用的就是普通微量管,在接种前滴加小牛血清1 滴.5%CO2,35 ℃培养18~24h后读取并记录结果.
6.肺炎链球菌乳胶凝集试验：左边是测试，右边是 阴性对照：
7.药敏试验（K-B法）：
7.药敏试验（K-B法）：
思考题
一、填空题：
一、填空题：
二、是非题：
三、选择题：
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致病物质
? 菌毛 ? 脂多糖（内毒素） ? IgA1蛋白酶
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所致疾病
? 淋病
? 人类是淋球菌唯一的天然宿主 ? 成人淋病绝大多数通过性接触感染，是重要的
性传播疾病 （sexually transmitted disease ， STD）
? 分离培养与鉴定
? 巧克力色血琼脂平板
? 快速诊断法
对流免疫电泳 SPA协同凝集试验
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脑膜炎奈瑟菌（N.meningit生idis物) 学性状
形态染色： G- ，呈肾型，成双排列（凹面相对，凸面相 背），有荚膜及菌毛
培养特性 ? 营养要求较高，血平板或巧克力平板或卵黄双抗平板， 形成光滑透明“露滴样”菌落 ?专性需氧，5~10%CO2，35-37℃（＞40 ℃ ＜ 30℃均不生 长）pH7.4~7.6 ?易产生自溶酶
葡萄球菌鉴别
金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌
色素
金黄色 白色
α-溶血素
+
-
血浆凝固酶试验
+
-
耐热DNA酶试验 +
-
甘露醇发酵试验
+
-
致病力
强
弱或无
脓汁标本
找出两种菌落
Gram 染色 甘露醇发酵试验
n菌落小、半透明 、 表面光滑、边缘整齐
nG+ 、链状
完全溶血 乙型链球菌
不溶血
丙型链球菌
草绿色不完全溶血环
?人类为奈瑟氏菌属的自然宿主，对人致病的只有脑膜炎奈瑟菌和淋病奈 瑟菌，两种细菌DNA序列有70％的同源性
?主要区别点为，淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜，引起泌尿生殖系统疾病；
而脑膜炎奈瑟菌和其他奈瑟菌和其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜。脑膜炎
奈瑟菌有多糖成分
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形态与染色
? G- ，0.6-0.8μm ? 肾形或豆形，成双排
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氧化酶试验 阳性：紫红色
阴性：无色
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脑膜炎奈瑟菌的鉴定
生化鉴定（光滑露珠样菌落）
氧化酶：
+
DNA酶：
-
营养琼脂生长： -
葡萄糖：
+
麦芽糖：
+
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防治原则
? 综合性预防措施
? 隔离病人、检查带菌者、预防性投药，室内通风 ? 流脑疫苗：
第七章 革兰阴性球菌
奈瑟菌属
Neisseria
医学检验系
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脑膜炎奈瑟菌
N. meningitis meningococcus
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奈瑟菌属 （Neisseria）
脑 膜 炎 双 球 菌
?奈瑟氏菌属是一群革兰阴性球菌，常成双排列，无鞭毛，无芽胞，有菌 毛
培养特性
高营养、5%CO2露滴状、自溶酶
学 生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖
高营养、5%CO2 只分解葡萄糖
性 状
抗原 与
荚膜多糖群特异 Ag外膜蛋白型特异 Ag 菌毛蛋白Ag
脂多糖Ag
脂多糖Ag
分类 核蛋白Ag
外膜蛋白Ag (PⅠ、PⅡ、PⅢ)
抵抗力 冷、热、干燥、消毒剂均敏感
同左
致 致病物质 荚膜、菌毛、内毒素
养及菌落特点？ n 5、如何从脓液中检出乙型溶血性链球菌？ n 6、简述下列细菌的形态特征、首选培养基及主要菌落特
点？肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、铜绿假单胞菌。
3.传代后的纯培养物:
3.传代后的纯培养物:
传代后的菌落直径较首代有些缩小了,菌落湿润程度也有些降低,但
4.Optochin 抑制试验 :
抑菌环中也微弱的生长了些菌落,但经过涂片发现是口腔球菌.可 能是做该试验的同事挑菌落的时候,没把握好.把杂菌带进去了.尽 管如此,抑菌环还是非常明显而宽大(22mm).
? 新生儿淋球菌性结膜炎
? “脓漏眼”
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微生物学检查法
? 标本
? 保暖（运送时 35oC保温）、保湿、立即送检
? 直接涂片镜检 ? 分离培养与鉴定
? 巧克力色培养基快速诊断法 ? ELISA法、核酸杂交、 PCR技术
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男性慢性淋病患者尿道分泌物涂片（革兰染色）
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女性急性淋病患者阴道分泌物涂片（革兰染色）
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培养特性 生化反应
? 培养特性
? 需氧，营养要求高。常用的培养基为 巧克力色 血液琼脂平板
? 生化反应
系统疾病（ 淋）。 ? 感染部位不同，标本取材部位不同
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形态与染色
? 革兰染色阴性，0.6-0.8μm ? 肾形、成双排列 ? 有菌毛，无芽胞和鞭毛，新分离株有荚膜
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男性急性淋病患者尿道分泌物涂片（革兰染色）
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抗原构造、抵抗力
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致病性与免疫性
? 致病物质
? 荚膜 ? 菌毛 ? 内毒素
? 所致疾病
? 流行性脑膜炎（简称流脑）
? 人类是唯一的易感宿主
? 免疫性
? 6月～2岁年龄组婴儿免疫力最低，是易感人群
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淋病奈瑟菌
n 生物学特性
u 形态染色：与脑膜炎奈瑟菌相似， G—，双球菌，咖啡豆 状，有荚膜和菌毛，无芽胞，无鞭毛 脓汁标本中 急性病人：细菌位于中性粒细胞内 慢性病人：细菌位于细胞外
u 培养特性：与脑膜炎奈瑟菌相似，营养要求更高，只能在 巧克力平板及专用培养基上生长，形成灰白色细小 S型菌 落
u 生化反应：氧化酶（+），只分解葡萄糖，不分解麦芽糖 （脑膜炎奈瑟菌分解麦芽糖）等其它糖类
脑膜炎奈瑟菌
鼻咽腔繁殖 繁殖入血
菌/败血症
中枢神经系统
主要侵犯蛛网膜
暴发型脑膜炎
微循环衰竭、内毒素休克、DIC
儿童和成人的脑膜炎症状
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脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis)
微生物学检查法
? 标本 ? 直接涂片镜检
? 如镜下见到中性粒细胞内、外有革兰阴性双球菌，即 可作出初步诊断
三、选择题：
三、选择题：
三、选择题：
四、名词解释：
n 1、血浆凝固酶 n 2、葡萄球菌A蛋白
问答题
n 1、如何从脓汁标本中检出金黄色葡萄球菌，请写出检验 程序，鉴定依据？
n 2、肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的主要区别有那些？ n 3、简述下列细菌的形态特征、首选培养基及主要菌落特
点？金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、霍乱弧菌。 n 4、流脑患者脑脊液革兰氏染色的镜下特征，如何分离培
列，凹面相对； ? 病人脑脊液（ CSF）
中典型，多位于中性 粒细胞内； ? 无鞭毛和芽胞；新分 离株具有荚膜和菌毛
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培养特性与生化反应
? 培养特性
? 专性需氧。营养要求高。最常用的培养基是巧 克力色培养基
? 生化反应
? 可产生自溶酶，人工培养时若不及时移种，数 日后菌体自溶
革兰阴性双球菌,肾形或豆形
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脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis)
生物学性状
? 生化反应： 氧化酶及触酶（ +），分解葡萄糖 和麦芽糖
? 抗原和分类： 根据荚膜多糖群特异性抗原的不 同可分为 13个血清群，根据膜蛋白不同，各血 清群又可分为若干血清型
? 抵抗力：很弱，对热、冷、干燥和消毒剂极度 敏感
? 预防淋病应取缔娼妓、防止不正当的两性 关系
? 新生儿1%硝酸银滴眼，或红霉素、四环素 眼药膏
? 药物首选青霉素，但多有耐药性，应用新 型青霉素族抗生素
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脑膜炎奈瑟菌与淋病奈瑟菌比较
比较内容
脑膜炎奈瑟菌
淋病奈瑟菌
形态结构 G－双球菌；有荚膜、菌毛(新)
同左
生 物
? 6个月-2岁接种两次，间隔1月 ? A群脑膜炎球菌多糖抗原。制备疫苗
? 青霉素、磺胺大剂量治疗
脑膜炎接种
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淋病奈瑟菌，淋球菌
Gonococcus
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脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌
两者关系
? 相似点：
? 生物学性状
? 差异：
? 荚膜：有荚膜（ 脑），分离初期有荚膜（ 淋） ? 质粒：很少有质粒（ 脑），有质粒（ 淋）； ? 所致疾病：引起脑膜炎（ 脑），引起泌尿生殖
病 性 所致疾病 流行性脑脊膜炎
荚膜、菌毛、外膜蛋白、 IgA1
淋病
防治原则 荚膜多糖疫苗
洁身自好
小结
化脓性球菌
n 革兰阳性菌：葡萄球菌，链球菌，肺炎链 球菌
n 革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌， 淋病奈瑟菌
staphylococcus
Streptococcus
S. pneum gonorrhoeae
病原性球菌的鉴别
n 由脑脊液标本中发现中性粒细胞内外有G-双球菌，可初步诊 断为脑膜炎球菌
n 由泌尿、生殖系统来源的标本中分离出的G-双球菌，可初步 诊断为淋球菌
脓汁或 喉拭子
血琼脂平板
涂片、革兰染色、镜检
37℃ 24h 观察菌落特征
及溶血情况
生化反应、致病力试验及药敏试验
u 抗原及分类：以外膜蛋白抗原分16个血清型 u 抵抗力：极弱（与脑膜炎奈瑟菌相似）
淋病奈瑟菌鉴定依据 ：
? 1. 涂片染色为革兰阴 性双球菌；
? 2. 巧克力平板上为半 透明、灰白色、凸 起滴露状菌落；
?3. 氧化酶及触酶均阳 性；
? 4. 只分解葡萄糖，产 酸不产气；
?5. 血清学试验阳性。
防治原则