酵母细胞计数及发芽率的测定(20101016)

酵母细胞计数及发芽率的测定

一、目的要求

1、掌握血细胞计数板的使用和计算方法。

2、利用血细胞计数板测定酵母细胞的发芽率。

二、概述

微生物的计数方法，有直接计数和间接计数两种。前者是利用血细胞计数板在显微镜下直接计数，能立即得到数值；但无论是死细胞还是活细胞，都计数在内。后者在平板上长成菌落后再计数，反映真实，但费时较长。

本检测方法是利用血细胞计数板，对酵母细胞直接计数，计数前需对样品作适当稀释，按照规定方法和计算公式运算后即可得出实际数值。

酵母菌一般营出芽繁殖，在计数时可统计其发芽率。

三、检测器材

1、仪器及其它：显微镜、血细胞计数板、盖玻片、吸水纸、计

数器。

2、菌液：酵母菌液

四、检测步骤

1、酵母细胞数的测定

1）血细胞计数板，是一块比普通载玻片厚的特制玻璃片。

玻片上有四条凹下生物槽构成三个平台，中间较宽的平台又

被一短槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，在这上面刻有九个大方格，而只有其中的一个大格为计数室供计数用。这一大格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，故其体积为0.1mm3。

计数板通常有两种规格：一种是1大格分16中格，而1中格又分25小格，总共是400小格；另一种是1大格分成25中格，而每一中格分成16小格，总共也是400小格。

2）样品的稀释：为了便于计数，稀释样品中酵母菌数，以每小格内含有4～5个为宜。斜面一般稀释10倍。

3）将血细胞计数板用檫镜纸檫净，在中央的计数室上加盖专用的厚盖玻片。

4）将稀释后的酵母菌液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，菌液自行渗入，多余的菌液用吸水纸吸去，稍待片刻，酵母细胞全部沉降到计数板表面。

5）计数时，如利用16×25规格的计数板要按对角线方位，取左上、右上、左下、右下四个中格（即100小格）的酵母菌数。如用25×16规格的计数板，则除了取左上、右上、左下、右下四格外，还需加取中央的一个中格，中央为80个小格。

6）计数时当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数此大格的上方及右方线上的细胞（或只计数下方及左方线上的细胞）

7）对每个样品重复计数2～3次，取其平均值，按下列公

式计算每毫升菌液中所含的酵母菌细胞数：

（1）16×25的计数板计算公式

酵母菌细胞数（mL）=100小格内酵母菌细胞数/100×400×10000×稀释倍数

（2）25×16的计数板计算公式

酵母菌细胞数（mL）=80小格内酵母菌细胞数/80×400×10000×稀释倍数8）计数板用完后，用水冲洗，决不能用硬物洗刷，洗后待

自行晾干或用电吹风吹干，或用95%乙醇、无水乙醇、丙酮

等有机溶剂脱水使干。

2、酵母菌发芽率测定

1）步骤、方法同上。

2）观察计数时，如遇到芽体大小超过细胞50%时，不作芽体计数而作酵母细胞计数。

3）计算：发芽率=芽体/总酵母细胞数×100%

五、检测记录与计算结果

1、检测记录每个中格数量

2、计算每毫升菌液的酵母细胞数（以25×16规格）

按下式计算

酵母菌细胞数（mL）=80小格内酵母菌细胞数/80×400×10000×稀释倍数=4na×106式中n——稀释倍数

A——平均每个中格细胞数

3、酵母菌发芽率

发芽率=芽体/总酵母细胞数×100%

4、检测结果

1）样品中每毫升含酵母细胞个。

2）样品中酵母细胞发芽率是%。