线粒体蛋白-胞浆蛋白提取方法

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线粒体蛋白/胞浆蛋白提取试剂盒

产品组成：

产品组成 BB-3176-1 BB-3176-2

规格 50 assays 100 assays

线粒体试剂A 10ml 20ml

线粒体试剂B 10ml 20ml

试剂C 10ml 20ml

试剂D 10ml 20ml

蛋白酶抑制剂混合物 200ul 400ul

储存条件：

线粒体试剂A和B于2-8℃保存，长期存放于-20℃保存；

试剂C和D室温保存；

蛋白酶抑制剂-20℃保存。

有效期：

一年。

产品简介：

贝博线粒体蛋白/胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取线粒体蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。

本试剂盒提取的蛋白不可用于2D电泳。如下游实验需要用于2D电泳，请使用货号BB-3191的试剂盒。

使用方法：

1.取2×107个细胞①，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，

尽可能吸干，收集细胞。

2.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

3.加入200μl冷的试剂A，置冰上10分钟。

4.Dounce匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。

5.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。

6.在4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。

7.取步骤6的上清于另一干净离心管中，加入200ul试剂C混匀，在4℃，11000

×g以上条件下离心5分钟，取上清，即得胞浆蛋白。

8.在步骤6的沉淀中加入200μl冷的试剂B，混匀。

9.在4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。

10.弃上清。

11.在沉淀中加入80ul-150ul试剂D，置冰上20分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡

15秒。

12.即得线粒体蛋白。

13.将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。