微生物-金黄色葡萄球菌
食品微生物学检验金黄色葡萄球菌
引用的作品
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血浆凝固酶实验
血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别接种到5 mLBHI和营养琼脂小斜面，36 ±1℃培养18 h～24 h 。 取新鲜配置兔血浆0.5 mL ，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2mL～0.3mL ，振荡摇匀，置 36 ±1℃温箱或水浴箱内。 每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置 时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。 同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为 对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36±1℃培 养18 h～48h ，重复试验。
第二法金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计 数
结果
列出完成实验所使用的所有步骤。 切记要为步骤加编号。 添加实验照片。
第三法 金黄色葡萄球菌MPN计数
最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释 培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优 势，但却具有特殊生理功能的类群 其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆 脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断 该类群微生物的存在和丰度。本法特别适合于测定土壤微生 物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫 化和反硫化细菌等。）的数量和检测污水、牛奶及其他食品 中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进 行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因 不能使用平板计数时才采用。 MPN法原理与局限C:\Users\华侃\Desktop\MPN法的原理与局 限性分析.pdf
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌1 简述金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为葡萄球菌属中的一种，广泛分布于自然界，空气、土壤、水及物品上，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。
本菌可产生多种毒素及酶，这些毒性物质引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血症和脓毒血症，是人类化脓性感染中重要的病原菌。
本菌抵抗力较强，干燥情况下能生存数月，80℃30min的条件下尚能存活，5%石炭酸或0.1%升汞溶液10～15min才会被杀死。
金黄色葡萄球菌检查按增菌、分离、纯培养、革兰染色、镜检和血浆凝固酶试验等步骤进行。
本法使用于外用药品及一般滴眼剂、眼膏剂的检查。
2 仪器、设备及用具（见大肠埃希菌2）。
3 试液、指示液3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2无菌磷酸盐缓冲液[附录3.1，3.5]。
3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液[附录3.2]。
3.3 革兰染色液[附录2.4，2.10，2.16]。
3.4 无菌枸橼酸纳氯化钠溶液[附录2.7]。
3.5 血浆的制备以无菌注射器吸取灭菌的5%枸橼酸纳的0.9%的氯化钠溶液1ml，用无菌操作采取家兔（或羊、人）血9ml，轻轻混匀数分钟。
待血液不凝固时，徐徐放入灭菌离心管中，及时离心（500r/min离心5min0，分离血浆，用灭菌吸管将血浆转移至灭菌试管中，置冰箱备用。
临用前必须用已知血浆凝固酶试验阳性的金黄色葡萄球菌（如金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]测试，证明血浆合格后，方可用于试验。
3.6 1%酚磺酞指示液[附录4.4]。
4 培养基4.1 营养肉汤培养基[附录5.1]。
4.2 营养琼脂培养基[附录5.2]。
4.3 亚碲酸盐肉汤培养基[附录5.15]。
4.4 卵黄氯化钠琼脂培养基[附录5.16]。
4.5 甘露醇氯化钠琼脂培养基[附录5.17]。
5 对照用菌液取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基中，36℃±1℃培养18～24h，用0.9%无菌氯化钠溶液，按10倍递增稀释至1:106，加入含10～100cfu的对照菌菌液（一般用量为1:1060.1ml），同时用营养琼脂平板计数。
实验十二金黄色葡萄球菌(共40张PPT)
公式二
A1B1/C1=155×3÷5=93 A2B2/C2=17×4÷5=14
T=(93+14)/1.1d=127÷1.1÷0.1=970
结果报告
单位:cfu/g或cfu/mL 如T值为0，报告 ＜1× d cfu/mL
（g）。
检样
检样25g(mL)+ 225ml灭菌生理盐水，均质。
取新鲜配置兔血浆 0.
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比 3 mL，振荡摇匀，置 36 ±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积
大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙 并干燥。
典型菌落计数和确认
品匀液接种到10%NaCl 胰蛋白胨大豆肉汤管，每个稀释度接种3管，将上述接种物36℃±1℃培养，45h～48h。
平板和血平板， 血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h A2B2/C2=17×4÷5=14
Baird-Parker平板
～24 h。Baird-Parker平板 36 ℃±1 ℃培养 18 Baird-Parker平板，血平板
B-P平板18h~24h或45h~48h 也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 用于做血浆凝固酶的菌落数
将上述培养物， 分别划线接种到 Baird-Parker 取新鲜配置兔血浆 0.
根据对样品污染状况的估计，选择3个适宜稀释度 的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样
3.9 革兰氏染色液：见附录 A中 。 3.10 无菌生理盐水：见附录 A中 。
四、实验内容及操作
金黄色葡萄球菌定性检验程序见图
医学金黄色葡萄球菌PPT
表皮剥落脱毒素B 1971
33000
7.0
染色体 质粒
烫伤样皮肤 综合症
剥落性皮炎
中毒性休克综合症 1981
24000
7.0
毒素 （TSST-1）
转座子
毒性休克综 合症
金黄色葡萄球菌肺炎（staph
ylococcus aureus pneumonia） 是由 金黄色葡萄球菌（一般为凝固酶阳性） 所致的肺炎。由于滥用抗生素的结果， 抗药性金黄色葡萄球菌的菌株明显增加， 金黄色葡萄球菌感染也见增多。本病大 多并发于葡萄球菌败血症，多见于幼婴 及新生儿，年长儿也可发生。
生物学特性
❖ 形态与染色
典型的金黄色葡萄球菌为球 型，直径0.8μm左右，显微 镜下排列成葡萄串状。
A蛋白已广泛应用于细菌、 病毒等病原诊断及分析等方 面。
其细胞壁含有3种主要成分： 核糖醇磷壁酸、肽聚糖和A 蛋白（SPA）。
金黄色葡萄球菌A蛋白
金黄色葡萄球菌无芽 孢、鞭毛，大多数无 荚膜。
革兰氏染色阳性。
❖ 为检测食品中的SAU, 国内外常用的微生物定量方法有平板 计数法、细菌磷酸酶活性定量法、MPN-PCR 法等, 这些方 法耗时费力、特异性不强、需要PCR后处理。
❖ 另一种定量方法是荧光定量PCR , 该方法能够定量测定DNA 的含量, 因此也具有对微生物进行计数的能力。但许多食品 基质、培养基等都可能对PCR 有抑制作用, 导致假阴性结果, 这是荧光定量PCR全面引入常规食品分析的一大障碍。
金
分类地位
黄 色
生物学特性
葡 萄
功能/危害
球
作用机理
菌
最新研究进展
球菌 金黄色葡萄球菌
细菌 杆菌
金黄色葡萄球菌检测ppt
• 3、生化特性：
• 可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲 基红反应阳性，VP反应弱阳性。
• 许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化 明胶。
• 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感 性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
四金黄色葡萄球菌的流行病学
• 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人 和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌， 其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康 人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染 的机会很多。
• 近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引 起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
二金黄色葡萄球菌的抗原构造和分型
• 对分型进行简单的了解 • １、血清学分型： • 金葡水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。 • 蛋白抗原是凝集抗原，无特异性。 • 多糖抗原有特异性。 • 绝大多数金葡含有A型抗原，B型抗原主要存在于凝固酶
阴性菌株，C型抗原在致病性和非致病性菌株中都存在。 • ２、噬菌体分型： • ３、根据肠毒素分型： • ４、根据血浆凝固酶分型：
•
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：
• 季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、 蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引 起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%， 所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
• 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：
• 食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染； 食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生 了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受 到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其 他部位的污染。
食品中微生物的检测-金黄色葡萄球菌检验
免疫学方法
抗原制备
从金黄色葡萄球菌中提取特异性抗原，制备 成免疫原。
抗体制备
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过凝集 反应、沉淀反应等方法检测样品中的金黄色
葡萄球菌。
抗原抗体反应
将免疫原注射到动物体内，刺激机体产生特 异性抗体。
结果判定
根据反应结果判断样品中是否含有金黄色葡 萄球菌。
分子生物学方法
食品中微生物的检测-金黄 色葡萄球菌检验
目录
• 引言 • 金黄色葡萄球菌概述 • 样品采集与处理 • 微生物学检测方法 • 理化检测方法 • 结果分析与报告 • 质量控制与实验室安全
01
引言
目的和背景
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是一种常见的食品污染源，可引起食物中毒，对公众健康构成威胁。因此，检测食品中的金黄 色葡萄球菌对于保障食品安全具有重要意义。
适量性
根据检测方法和目的，采 集适量样品，以满足检测 需求。
样品保存与运
低温保存
样品应尽快放入低温环境 （如4℃冰箱）中保存，以 减缓微生物的生长速度。
避免反复冻融
尽量避免样品在保存过程 中反复冻融，以免影响微 生物的存活和检测结果的 准确性。
快速运输
样品在运输过程中应保持 低温，并尽快送达实验室 进行检测。
04
微生物学检测方法
传统培养法
增菌培养
将液体样品接种到选择性增菌液 中，于适宜温度下培养一定时间 ，使金黄色葡萄球菌得以增殖。
鉴定
通过观察菌落形态、革兰氏染色 、血浆凝固酶试验等生化特征进 行鉴定。
01
02
样品处理
取适量食品样品，进行均质化处 理，得到均匀一致的液体样品。
03
04
金黄色葡萄球菌(牛肉膏蛋白胨培养基)
金黄色葡萄球菌（牛肉膏蛋白胨培养基）一、生物学特性典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 ^m左右，显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37。
C，最适生长pH7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15% NaCI肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素, 还原硝酸盐，液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
二•流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
因而，食品受其污染的机会很多。
近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占4 5% ,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。
上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83% ,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。
肠毒素形成条件：存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验的原理是通过培养和鉴定来确定细菌是否为金黄色葡萄球菌。
具体步骤如下：
1. 培养：将样本在含有富含营养物质的培养基上进行培养。
金黄色葡萄球菌在常见的琼脂培养基上能够快速生长并形成典型的黄色菌落。
2. 鉴定：通过一系列的生化反应和特征性实验来确认细菌的身份。
金黄色葡萄球菌一般具有以下特征：
- 革兰氏染色：呈阳性，即菌体呈紫色。
- 非运动性：无鞭毛或鞭毛不活跃。
- 产生黄色色素：金黄色葡萄球菌能够产生一种特殊的黄色色素，使得菌落呈现金黄色。
3. 确认：通过进一步的检测，如凝胶酶试验和DNA鉴定等，来进一步确认菌株是否为金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，可以引起多种感染，如皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等。
通过对其进行准确快速的检验可以帮助医生进行针对性治疗和控制传播。
金黄色葡萄球菌检验实验原理
金黄色葡萄球菌检验实验原理
金黄色葡萄球菌检验是一种常见的微生物检验方法，用于检测环境中是否存在金黄色葡萄球菌。
实验原理：
1.准备好检测环境样品。
2.将样品加入培养基中，培养基中含有可抑制其他细菌生长的
物质。
3.将培养基移植到培养皿中，利用平板法悬浮液平铺在培养皿
表面。
4.将培养皿置于孵箱中，设定适当的温度和时间，有利于金黄
色葡萄球菌的生长。
5.观察培养皿上是否有金黄色菌落的出现。
6.对金黄色菌落的特征进行仔细观察，如菌落的形状、颜色等。
7.进行进一步的鉴定确认，通过其他实验方法验证金黄色菌落
是否为金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌检验实验原理简单易懂，能够快速准确地检测金黄色葡萄球菌的存在与否。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界中，同时也是人体皮肤和黏膜的正常微生物。
金黄色葡萄球菌也是人体病原微生物中的一种，并且可以引起一系列的感染疾病，包括皮肤感染、肺炎、败血症等严重疾病。
及时、准确地检测金黄色葡萄球菌对于预防和控制与该菌相关的疾病具有重要意义。
金黄色葡萄球菌的检验技术主要包括细菌培养、生化鉴定、药敏试验等，下面将对这些技术进行介绍。
一、细菌培养1. 培养基金黄色葡萄球菌主要可在营养琼脂、大豆肉汤琼脂、牛肉心脏培养基等细菌培养基上生长。
营养琼脂是最常用的培养基，可用于对金黄色葡萄球菌的初步筛查。
2. 培养条件金黄色葡萄球菌在37°C下培养24-48小时，产生充分的菌落。
3. 形态特征金黄色葡萄球菌在琼脂培养基上可形成金黄色的圆形菌落，直径一般在1-2mm左右。
二、生化鉴定1. 皮肤试验皮肤试验是金黄色葡萄球菌的特异性鉴定方法之一，又称为凝集素试验。
通过皮肤试验，可以判断金黄色葡萄球菌是否具有产生凝集素的能力。
2. 协和试验协和试验又称凝集酶试验，是用于检测金黄色葡萄球菌产生凝集酶的一种生化试验。
该试验通过将金黄色葡萄球菌的培养液加入到含有凝集酶专一底物的试管中，观察底物被溶解的情况，用于判断金黄色葡萄球菌是否产生凝集酶。
3. 床旋试验床旋试验又称为巯基甲酸盐试验，是一种利用巯基甲酸盐来检测金黄色葡萄球菌的特异性试验。
通过观察琼脂培养基上金黄色葡萄球菌菌落周围出现的红色环的形成情况，判断金黄色葡萄球菌是否产生巯基甲酸盐酶。
4. 溶血酶试验溶血酶试验是一种通过检测金黄色葡萄球菌产生的溶血酶来鉴定其特性的生化试验。
溶血酶试验主要有两种方法：血凝素试验和牛血红蛋白试验。
这两种方法都是通过观察金黄色葡萄球菌对红细胞造成的溶血现象来判断其产生的溶血酶。
三、药敏试验药敏试验是检测金黄色葡萄球菌对抗生素的敏感性的一种方法。
金黄色葡萄球菌护理
患者康复情况
感染控制：金黄色 葡萄球菌感染的控 制情况
症状缓解：患者症 状的缓解程度
康复时间：患者康 复所需的时间
并发症发生率：患 者康复过程中并发 症的发生情况
1
2
3
4
护理质量评价
护理效果评估：评估护
01
理措施对金黄色葡萄球
菌感染的治疗效果
护理质量指标：包括感
04
加强营养支持： 保证患者摄入足 够的营养和水分， 增强抵抗力
03
合理使用抗生素： 根据病情和药敏 试验结果选择合
适的抗生素
护理效果评估
感染控制情况
感染率降低：金黄 色葡萄球菌感染的 发生率降低
患者康复速度加快： 患者康复速度加快， 缩短住院时间
抗生素使用减少： 抗生素使用量减少， 降低耐药性风险
金黄色葡萄球菌护理
刀客特万
目录
01. 金 黄 色 葡 萄 球 菌 简 介
02. 护 理 策 略 与 方 法
03. 护 理 效 果 评 估
金黄色葡萄球菌简介
微生物分类
属于革 兰氏阳
性菌
属于葡 萄球菌
属
常见于皮 肤、呼吸 道、消化 道等部位
具有较强 的耐药性， 容易引起
感染
生长环境
02
适宜生长温度： 37℃
治疗方案
抗生素治疗：选择敏感抗生 素，如青霉素、头孢类等
A
营养支持：补充营养，提高 免疫力
C
B
局部护理：保持伤口清洁， 避免感染扩散
D
观察病情：密切观察病情变 化，及时调整治疗方案
护理操作要点
保持清洁卫生： 勤洗手、勤换衣、 勤消毒
微生物检测技术-金黄色葡萄球菌检测
国内检测标准
GB 4789.10-2010
食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
GB/T 20944.32008
食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素的测定 第3部分：黄曲霉毒素 M1的测定
GB/T 23511.42008
食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定 第4部分：脱氢乙酸含量的 测定
样品中的快速检测。
纳米技术
纳米材料如纳米金、纳米孔等在 金黄色葡萄球菌检测中展现出巨 大潜力，具有高灵敏度、低检测
限和快速响应等优点。
未来研究方向
开发更高效、特异性的检测方法
01
针对金黄色葡萄球菌的不同表型和基因型，开发更高效、特异
性的检测方法，提高检测的准确性和可靠性。
集成化与自动化
02
将多种检测方法集成于一体，实现金黄色葡萄球菌的自动化检
治疗方案的选择。同时，对于流行病学调查和疾病监测也具有重要意义。
05
CATALOGUE
金黄色葡萄球菌检测技术展望
新技术发展与应用
基因组学技术
利用全基因组测序技术，能够快 速准确地检测金黄色葡萄球菌，
并识别其耐药性和毒力基因。
生物传感器技术
生物传感器能够实时、快速地检 测金黄色葡萄球菌，具有高灵敏 度和特异性，适用于食品和环境
测，提高检测效率，降低人工误差。
多重耐药性研究
03
深入研究金黄色葡萄球菌的多重耐药性机制，为遏制耐药性的
传播提供科学依据和技术支持。
对公共卫生的影响与意义
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，通过改进检测技 术，能够及时发现和控制食品中的污染，保障公众的食品 安全。
预防疾病传播
金黄色葡萄球菌实验报告doc
金黄色葡萄球菌实验报告篇一：微生物实验报告细菌微生物实验报告题目年级专业实验者学号小组成员指导老师一、实验目的脓汁和粪便标本中病原菌的检测 XX 级临床医学八年制1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。
2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。
3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。
4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。
5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。
6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。
7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。
二、实验器材1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯三、实验方法与步骤1.培养基的制备称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌2.空气与人体体表细菌学检查2.1空气的细菌学检查每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。
食品微生物检验：葡萄球菌
凝固酶较耐热，在l00℃
5、溶纤维蛋白酶
可使人、犬、豚鼠及家兔的已经凝固的纤维蛋白溶
解。溶纤维蛋白酶是一种激酶，可激活血浆蛋白酶原
成为血浆蛋白酶而使纤维蛋白溶解。
凝固酶及溶纤维蛋白酶可在含有血浆的琼脂平板内
同时测定。初次培养后，菌落周围若出现一个不透明 圈，表示产生凝固酶，继续培养时，不透明圈消失， 说明为溶纤维蛋白酶作用的结果。
（一）形态与染色
典型的葡萄球菌呈球形，直径0.4µm-1.2µm，致病性葡萄
球菌一般较非致病性菌小，且各个菌体的大小及排列也较整
齐。细菌繁殖时呈多个平面的不规则分裂，堆积成为葡萄串
状排列。
在液体培养基中生长，常呈双球或短链状排列，易误认为
链球菌。葡萄球菌无鞭毛及芽胞，一般不形成荚膜，易被碱 性染料着色，G+，当衰老、死亡或被白细胞吞噬后常转为革
食品中致病性球菌的检验
一、金黄色葡萄球菌的检验 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲 料、食品（剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动 物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病的腐物 寄生菌，也有一些致病的球菌。
食品中生长有金黄色葡萄球菌，是食品卫生的一种 潜在危险，因为金黄色葡萄球菌可以产生肠毒素，食 后能引起食物中毒。因此，检查食品中金黄色葡萄球 菌有实际意义。
葡萄球菌的致病力决定于细菌产生的毒素
溶血毒素、杀白血球毒素、肠毒素、 血浆凝固酶、溶纤维蛋白酶、透明质酸酶、脱
和酶的能力。
氧核糖核酸酶
1、溶血毒素
多数致病菌株能产生该毒素，使血琼脂平板菌落周 溶血毒素是一种外毒素，根据其对动物细胞的溶血
食品微生物检验金葡菌定性检验-Gavin
食品中金黄色葡萄球菌定性检验
3. 分离： 将增菌后的培养物,分别划线接种到 Baird-Parker平板和血平板,血平板36 ℃±1 ℃培养18h~24h。 Baird-Parker平板36 ℃±1 ℃培养24h~48h。 4. 初步鉴定： 金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker平板上呈圆形,表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为2mm~3mm,颜 色呈灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰带。 当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清晰带 外,其他外观基本相同。从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色常较典型菌落浅些,且外 观可能较粗糙,质地较干燥。
● BP平板是用于选择性分离金黄色解亚碲酸钾产 生黑色物质，与金黄色葡萄球菌融合，形成黑色菌落；另外，金黄色葡萄 球菌还可以分解卵黄中的卵磷脂，在菌落周围形成沉淀环。
食品中金黄色葡萄球菌定性检验
在血平板上,形成菌落较大,圆形、光滑凸起、湿润、金黄色(有时为白色或柠檬黄色),菌落周围可见 完全透明溶血圈。挑取上述可疑菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。
● 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：
● a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏 死；
● b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；
● c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面 或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关；
食品微生物之检验方法-金黄色葡萄球菌之检验
食品微生物之檢驗方法－金黃色葡萄球菌之檢驗1. 適用範圍：本方法適用於食品中金黃色葡萄球菌及其腸毒素（enterotoxins）之檢驗。
2. 檢驗方法2.1. 工作環境：工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。
每15分鐘落菌數不得超過15 CFU／培養皿。
2.2. 器具及材料2.2.1. 乾熱滅菌器。
2.2.2. 高壓滅菌釜。
2.2.3. 冰箱：能維持5 ±3℃者。
2.2.4. 培養箱：能維持內部溫度溫差±1.0℃以內者。
2.2.5. 水浴：能維持水溫溫差±0.2℃以內者。
2.2.6. 攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）：能適用於無菌操作者。
2.2.7. 天平：可稱量到2000 g，靈敏度為0.1 g；可稱量到120 g，靈敏度為5 mg。
2.2.8. 顯微鏡：能放大至1000倍之一般光學顯微鏡。
2.2.9. 旋渦混合器（Vortex mixer）。
2.2.10. 離心機：轉速可達3000 rpm以上。
2.2.11. pH測定儀。
2.2.12. 加熱器。
2.2.13. 吸管輔助器（Pipette aid）。
2.2.14. 微量吸管（Micropipette）：10 μL、20 μL、200 μL及1000 μL。
2.2.15. 吸管（Pipette）：已滅菌。
1 mL吸管應有0.01 mL之刻度、5及10 mL吸管應有0.1 mL刻度。
2.2.16. 吸管尖（Tip）：可滅菌。
10 µL、20 µL、200 µL及1000 µL。
2.2.17. 培養皿：已滅菌，內徑約90 mm，深度約15 mm，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮痕或其他缺點。
2.2.18. 稀釋用容器：無菌袋或有1000 mL、500 mL、99 m及90 mL標記附蓋（栓）之可滅菌廣口瓶。
食品中金黄色葡萄球菌检验
式（2）
案例
T A1B1/ C1 A2B2 / C2其中Leabharlann 1.1d样品稀释液
10-1
10-2
典型菌落数
183
21
T：样品中金黄色葡萄球菌菌落数；
用于做血浆凝固
A1：第一稀释度（低稀释倍数）典型菌落的总数；
5
5
酶菌落数
A2：第二稀释度（高稀释倍数）典型菌落的总数；
B1：第一稀释度（低稀释倍数）血浆凝固酶阳性的菌落数； 血浆凝固酶阳性
二、金黄色葡萄球菌定性检测
注意事项
Baird-Parker平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏:提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠:生长促进剂 亚碲酸盐:对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄菌株有毒性，并使菌落产生黑色 卵黄:提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂:对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。
36±1℃， 24~48h
圆形，光滑突起，湿润，直径23mm，颜色呈灰色到黑色，边缘 常为淡色（米黄色或灰白色略带 灰色或黄色的白色），周围为一 混浊带，在其外缘常有一透明圈。 用接种针接触菌落似有黄油树胶 的粘稠感。
革兰氏染色
血浆凝固酶鉴别
金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球 菌，排列呈葡萄球状，无芽孢
血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为白色，大 而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血圈。
36℃±1 ℃
45h~48h
计数及血浆凝固酶试验
GB 4789.10-2016 金黄色葡萄球菌的检验第二法
报告
操作规程
样品稀释 同菌落总数检验
选择合适稀释度 接种涂布BP平板
三、金黄色葡萄球菌定量检测
样品处理
移1ml
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涂片染色
观察溶血
血浆凝固酶试验
报告 闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
金色葡萄球菌检验
检验程序 ——增菌培养
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受15%的 氯化钠），用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤或7.5%
氯化钠肉汤增菌。
置37摄氏度培养箱培养24小时。
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25g(ml)+225ml灭菌生理盐水
国标：金黄色葡 萄球菌检验程序
直接计数方法
Baird-parker（贝尔德- 帕克） 0.3ml、0.3ml、0.4ml
36± 1℃ 24hr
增菌培养方法
7．5％氯化钠肉汤或 胰酪胨大豆肉汤
36± 1℃ 24hr
血平板
36± 1℃ 24hr
血平板 ，Baird-parker
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食品安全检验技术（微生物部分）
金色葡萄球菌检验
检验程序——分离培养
BP（贝尔德- 帕克）平板：
胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素 和矿物元素
丙酮酸钠是一种生长促进剂
亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有 毒性，并使菌落产生黑色
卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环
食品安全检验技术（微生物部分）
金色葡萄球菌检验
检验程序 ——分离培养
血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血 平板上产生明显的溶血环。 典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆 形，不透明，表面光滑，有溶血环。
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食品安全检验技术（微生物部分）
金色葡萄球菌检验
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食品安全检验技术（微生物部分）
金色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌， 临床表现多种多样，可引起局部化脓感染，也可引起肺 炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
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食品安全检验技术（微生物部分）
葡萄球菌皮肤感染
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金色葡萄球菌检验
生物学特性 ——致 病 性
金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主 要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌 体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。 d.脱氧核糖核酸酶（DNA酶） e.肠毒素：引起急性胃肠炎。
食品安全检验技术（微生物部分）
金色葡萄球菌检验
大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞团呈现出深橙色 到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄 色葡萄球菌。
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食品安全检验技术（微生物部分）
金色葡萄球菌检验
大多数菌株最适生长温度30-37℃，最适pH为7.0-7.5； 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；
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试管法
金色葡萄球菌检验
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食品安全检验技术（微生物部分）
金色葡萄球菌检验
二、检验程序与操作方法
根据中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准： 《食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验》 GB 4789.10-94
金黄色葡萄球菌检验
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食品安全检验技术（微生物部分） 检样 金色葡萄球菌检验
金色葡萄球菌检验
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金色葡萄球菌检验
葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾
病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最 为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品， 如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经810小时即可相当数量的肠毒素。
大而突起，圆形，不透明， 表面光滑，有溶血环
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食品安全检验技术（微生物部分）
金色葡萄球菌检验
血平板制作
成分：豆粉琼脂（或营养琼脂）100mL，脱纤维 羊血（或兔血）5-10mL。
制法：加热融化琼脂，冷至50℃，以无菌操作加 入脱纤维羊血或兔血，摇匀，倾注平板。或分装 灭菌试管，摆成斜面。
检验程序 ——鉴定之凝固酶试验
金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别 的主要试验是测定其凝固酶。
方法一：试管法 吸取1:4新鲜兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入 培养24h的金黄色葡萄球肉浸液肉汤培养物0.5mL，振荡 摇匀，放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次， 观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝 块者，被认为阳性结果。
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食品安全检验技术（微生物部分）
金色葡萄球菌检验
B-P平板
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食品安全检验技术（微生物部分）
金色葡萄球菌检验
检验程序 ——鉴定之革兰氏染色镜检
革兰氏阳性，球形，组成葡萄状
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金色葡萄球菌检验
甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制 作用。
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金色葡萄球菌检验
在BP平板上典型菌落为：灰色到黑玉色，圆形，光 滑突起，湿润，直径2-3mm，边缘常为淡色（米黄色或
灰色），周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。用
接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。 长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落，其黑 色常较典型菌落淡些，且外观可能粗燥，质地较干燥。
可在15%氯化钠和40%胆汁中生长。
一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌或7
食品安全检验技术（微生物部分）
金色葡萄球菌检验
所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来源的菌
株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。 金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和 溶菌酶等，大多数菌株可水解天然的动物蛋白并释放 脂肪酸。在BP平板产生磷脂环。