Folin-酚试剂法测蛋白质含量测定实验报告
folin酚试剂法实验报告
folin酚试剂法实验报告一、实验目的Folin 酚试剂法是一种常用的测定蛋白质含量的方法。
本次实验的目的是通过使用 Folin 酚试剂法，掌握其操作流程，熟练运用相关仪器设备，准确测定给定样品中的蛋白质含量，并对实验结果进行分析和讨论。
二、实验原理Folin 酚试剂法的原理基于蛋白质中的肽键在碱性条件下与铜离子形成络合物，该络合物能将 Folin 酚试剂还原，产生蓝色物质。
蓝色物质的颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，通过测定其在一定波长下的吸光度，可以计算出样品中蛋白质的含量。
三、实验材料与仪器1、实验材料（1）标准蛋白质溶液：准确称取一定量的结晶牛血清白蛋白，用蒸馏水配制成浓度为 1mg/mL 的标准溶液。
（2）待测样品溶液：准备好需要测定蛋白质含量的样品溶液。
（3）Folin 酚试剂甲：由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成。
（4）Folin 酚试剂乙：由钨酸钠、钼酸钠、磷酸、盐酸和硫酸锂组成。
2、实验仪器（1）分光光度计（2）恒温水浴锅（3）容量瓶（100mL、50mL、10mL 等）（4）移液器（5）试管（6）刻度吸管四、实验步骤1、标准曲线的绘制（1）取 6 支干燥洁净的试管，分别编号为 0、1、2、3、4、5。
（2）按照下表向各试管中加入标准蛋白质溶液和蒸馏水：｜试管编号｜ 0 ｜ 1 ｜ 2 ｜ 3 ｜ 4 ｜ 5 ｜｜｜｜｜｜｜｜｜｜标准蛋白质溶液（mL）｜ 0 ｜ 02 ｜ 04 ｜ 06 ｜ 08 ｜ 10 ｜｜蒸馏水（mL）｜ 10 ｜ 08 ｜ 06 ｜ 04 ｜ 02 ｜ 0 ｜（3）向各试管中加入 Folin 酚试剂甲 5mL，摇匀，于室温下放置10 分钟。
（4）再向各试管中加入 Folin 酚试剂乙 05mL，立即摇匀，在 30℃水浴中保温 30 分钟。
（5）以 0 号试管为空白对照，在分光光度计上于 650nm 波长处测定各管溶液的吸光度值（A）。
（6）以蛋白质含量（mg）为横坐标，吸光度值（A）为纵坐标，绘制标准曲线。
实验二福林酚试剂法测定测定蛋白质的含量
• 3.含有什么氨基酸的蛋白质能与 Folin-酚试剂 呈蓝色反应？ • 4.测定蛋白质含量除Folin-酚试剂显色法以外， 还可以用什么方法
八、分析讨论
强碱性缓冲液； TritonX-100; SDS
最好的方法； 干扰物质少； 颜色稳定； 颜色深浅随不同
• 此法可检测的最低蛋白质量达5g。通常 测定范围是20~250g
二、材料和试剂
• 1、标准蛋白质 250ug/ml 牛血清白蛋白溶 于重蒸水溶液 • 2、Folin—酚试剂甲 A0.2MNaOH+4%NaCO3 等体积混合 当天使用时混合有效A 100ml+B 2ml • 3、 Folin—酚试剂乙 吸取5ml苯酚+5ml水，用0.1MNaOH滴定至酸浓度为1M 配100ml B2%酒石酸钾钠+1%CuSO4.5H2O 等体积混合 配10 ml
2、Folin-酚乙试剂在酸性条件下较稳定，而Folin －酚甲试剂是在碱性条件下与蛋白 质作用生 成碱性的铜－蛋白质溶液。当Folin－酚乙试 剂加入后，应迅速摇匀（加一管摇一管），使 还原反应产生在磷钼酸－磷钨酸试剂被破坏之 前。
3、样品稀释的倍数应使蛋白质含量在标准曲线范 围之内，若超过此范围则需将样品酌情稀释。
• 4、 分光光度计 • 5、恒温水浴锅
• 6、蛋白质样品溶液
A：鸡蛋清白蛋白 100-250ug/ml 的重蒸水
B：土豆
取样品用水冲洗干净，用纱布擦干，立即称取15g鲜样，置研钵中加重蒸水少许及石英沙，研磨成 匀浆，过滤弃去残渣，定容至50 ml,滤液经6000 r/min离心30分钟，取上清液待测。
五、 操作
• 1、标准曲线制作： 各吸取 0、0.2 0.4 0.6 0.8 1.0ml标准蛋白 液于带塞小试管，分别加入不同量的蒸馏水到 1ml ，各加5ml 试剂甲，混匀后室温下（25℃） 放10分钟，加入 0.5ml试剂乙，立即混匀，25℃ 左右反应30分钟，于500nm波长下测定消光值， 以OD500为纵坐标，含量为横坐标，绘出标准曲 线，（浓度低时可用OD750nm）
Folin酚测蛋白质含量实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级： 2014级生物信息学组别：第8实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称Folin-酚试剂法测定蛋白质含量实验日期2015-11-2 实验地点第8实验室合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1、掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其实验操作技术。
2、掌握制作标准曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。
3.熟悉分光光度计的用法。
二、实验原理1.在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质- Cu2+复合物。
2.蛋白质- Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物。
3.在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。
三、材料与方法1.实验材料（1）样品健康人血清（300倍稀释）；正常人血清蛋白质含量：60~80 g/L（2）试剂牛血清白蛋白标准液（200μg/ml）；碱性硫酸铜溶液（现配现用）；Folin-酚试剂（3）仪器与器材V-1100分光光度计；恒温水浴箱；试管6支、试管架；加样枪、加样枪架；坐标纸2.实验步骤（1）图示（2）取6支试管做好标记，再按下表加样：（1作空白对照，2-5作标准，6为待测样品）（3）加样时按横向顺序加样，并在加入碱性硫酸铜时：于1号试管加入碱性硫酸铜溶液2ml后等待1分钟再往下一支试管加入等量的碱性硫酸铜溶液，摇匀。
以此类推。
（4）在全部试管加完碱性硫酸铜试剂之至距第一支试管加样10分钟后，于第1支试管立即加入0.20mL Folin-酚试剂，并于2s内摇匀。
1分钟后第2支试管加入0.20mL Folin-酚试剂，2分钟后加第3支试管，以此类推。
（5）加样完毕后将各试管每隔1min按1-6顺序放一只试管入水浴箱，分别40℃水浴10min后取出冷却至室温。
（6）以500nm波长比色，以1号管作空白对照，按2-6顺序每隔一分钟测定一支试管内溶液吸光度并重复测三次，记下读数，求出平均值，记录数据并计算结果。
Folin-酚法测定蛋白质含量
实验二 Folin-酚法测定蛋白质含量一、目的要求了解Folin–酚法测定蛋白质的原理，掌握Folin–酚法测定蛋白质含量的分析方法。
二、实验原理用化学法测定蛋白质含量的方法主要有凯氏定氮法、双缩脲比色法、Folin–酚比色法、考马斯亮蓝比色法等。
凯氏定氮法多用于贮存蛋白的测定；后者常用于可溶性蛋白的含量分析，它们具有操作简便，迅速，可适合一般实验要求的特点。
其中Folin–酚法较双缩脲法灵敏100倍，与考马斯亮蓝比色法灵敏度相似，但干扰物对检测方法的影响不相同，选用时应予考虑。
Folin–酚试剂由甲、乙两部分组成。
作用机理是：首先蛋白质中的肽键与碱性铜盐产生双缩脲反应，生成铜—蛋白质复合物；然后该复合物还原磷钼酸—磷钨酸试剂，产生蓝色反应，其呈色强度与蛋白质含量成正比。
所测定蛋白质样品中若含有酚及柠檬酸均对实验有干扰。
浓度较低的尿素（约0.5%），三氯乙酸（约0.5%），乙醇（5%），丙酮（0.5%）等溶液对显色无影响。
若样品酸度较高，需提高碳酸钠—氢氧化钠溶液浓度1–2倍。
三、试剂和仪器（一）试剂1、酪蛋白标准溶液：称取50mg酪蛋白（预先用凯氏定氮法测定蛋白质含量），加30mL 0.05mol/L NaOH ，于磁力搅拌器下溶解，补加0.05mol/L NaOH 至100 mL。
酪蛋白含量0.5 mg/ mL。
2、Folin-酚试剂试剂甲：（1）4% Na2CO3；（2）0.2 mol/L NaOH；（3）1%CuSO4；（4）2%酒石酸钾钠溶液。
使用前，将（1）与（2）以等体积混合配置成Na2CO3–NaOH溶液；（3）与（4）以等体积混合，配成硫酸铜—酒石酸钾钠溶液；然后将这两种溶液以50:1的体积混合，即为Folin–酚试剂甲。
该试剂只能用一天，过期失效。
试剂乙：在1000 mL磨口回流装置内加入50g 钨酸钠（Na2WO4·2H2O），12.5g 钼酸钠（Na2M O O4·2H2O），350 mL 85%磷酸，50 mL浓盐酸，混匀。
【2017年整理】Folin-酚比色法测定蛋白质含量
实验一 Folin-酚比色法测定蛋白质含量一. 目的学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法二. 原理Folin-酚法，又名Lowry法，所用的试剂由两部分组成：试剂甲为碱性硫酸铜溶液，相当于双缩脲试剂，可与蛋白质中肽键起双缩脲反应，生成Cu2+-蛋白质络合物；试剂乙为磷钨酸-磷钼酸混合物，在碱性条件下极不稳定，易被上述络合物以及酪氨酸和色氨酸残基还原成钨蓝和钼蓝。
在一定蛋白质浓度范围内，钨蓝和钼蓝在500nm波长处的光吸收与蛋白质含量成正比，以此可测定蛋白质的含量。
该方法灵敏度高，测定范围为25μg～250μg，比双缩脲法灵敏100倍，用作一般浓度的测定较为适宜，且操作简便、快速，所以是一般实验室中经常使用的方法之一。
注意，酚类物质、柠檬酸、甘氨酸、EDTA、各种糖以及各种还原剂等对测定均有干扰作用。
三. 实验材料及设备1. 材料绿豆芽2. 仪器分光光度计电子天平3. 器材普通试管：20mL×8容量瓶：100mL×1移液管：1mL×4 5mL×1烧杯：250mL×1 50mL×1滤纸：φ11cm滴管： 2洗耳球： 2坐标纸研钵、漏斗、洗瓶、试管架、移液管架、玻棒：各1四. 试剂的配制1. 牛血清白蛋白标准液（250μg/mL）精确称取0.0250g牛血清白蛋白，用蒸馏水溶解后定容至100mL。
2. Folin-酚试剂甲●溶液A：Na2CO310gNaOH 2g 用蒸馏水溶解后定容至500mL；酒石酸钾钠0.25g●溶液B：CuSO4·5H2O 0.05g 用蒸馏水溶解后定容至10mL；●使用前，将溶液A和溶液B以50:1相混合。
该混合液只能保持一天。
3. Folin-酚试剂乙●在1500mL容积的磨口烧瓶中，加入100g钨酸钠(Na2WO4·2H2O)、25g钼酸钠(NaMoO4·2H2O)及700mL蒸馏水，再加入50mL 85%正磷酸和100mL浓盐酸，充分混合后，接上回流冷凝管，以小火回流10小时。
实验五 Folin酚法测定蛋白质含量
下次实验：SDS-PAGE
然后，蛋白质Cu2+ 复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基 还原乙试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物 （钼蓝和钨蓝混合物）。
该呈色反应在 30min内即接近极限，并至少可稳定几小 时。
在一定浓度范围内，蓝色的深浅与蛋白质含量呈线性关 系，所以，可用比色的方法确定蛋白质的含量。
Fo1in－酚法测定蛋白质含量灵敏度较高。在640nm下 测定范围是25－250微克。
Fo1in—酚法是双缩脲法的发展。 Folin-酚试剂由甲试剂与乙试剂组成。
– 甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜及酒石酸钾钠组 成。（碱性）
– 乙试剂由磷钼酸和磷钨酸组成。（在碱性中极不稳定）
反应过程分为两步：
首先，在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试 剂中的 Cu2+作用生成蛋白质Cu2+ 复合物；
该呈色反应在30min内即接近极限并至少可稳定几小在一定浓度范围内蓝色的深浅与蛋白质含量呈线性关系所以可用比色olin-酚试剂法（Lowry法）
一、目的和要求
学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法。 进一步掌握分光光度法——求标准曲线、准确测
（一）试剂 1.标准BSA溶液：250μg／mL。 2.Fo1in—酚试剂甲 3.Fo1in—酚试剂乙 4.蛋清：稀释后用。
（二）器材 1.试管及试管架 2.吸量管(5、1、0.5mL) 3.722型分光光度计 4.电热恒温水浴
Fo1in—酚试剂甲的配制
由下述四种溶液配制： (1)4％碳酸钠溶液；和 (2)0.2mol/L氢氧化钠溶液； (3)1％硫酸铜(CuS04·5 H20)溶液； (4)2％酒石酸钾钠溶液。
此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。 本实验以蛋清为材料，测定蛋清的蛋白质含量。
生化实验：Folin-酚试剂法测定血清总蛋白含量
三、实验步骤
1、待测血清样品稀释：
0.1ml 血清，置于50ml 容量瓶， 加生理盐水至离刻度1-2cm处，以胶 头滴管补充至刻度， 倒置摇匀。此为 血清待测液样品。
2、Folin-酚试剂法测蛋白质溶度
取玻璃试管3支，按下表操作：
3、722分光光度计使用
开机预热10分钟 调波长 空白、标准与待测液体加入比色杯 开盖调“0”，关盖调“100”------T 转至A档，测吸光度------A 记录，重复测三次
原理：当一束强度为I0的单色光垂直照 射某物质的溶液后,由于一部分光被体系 吸收,因此透射光的强度降至I,则溶液的 透光率T为: T=I/ I0 A=-lgT
朗伯(Lambert)-比尔(Beer)定律: A=KLC
(式中A为吸光度，L为溶液层厚度,C为溶液的浓度， K为吸光系数) C测= A测*C标/A标
Folin-酚试剂法原理
第二步：Folin-酚显色反应 Folin-酚试剂在碱性条件下极不稳定，
其磷钼酸盐-磷钨酸盐易被酚类化合物还原 而呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝的混合物)。由 于蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸(Tyr) ， 故有此显色反应。
即蛋白质- Cu2+复合物中所含的酪氨酸 或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷 钨酸，生成蓝色的化合物。
干扰物质多、费时、 操作严格计时
（1）双缩脲法测定蛋白质
H2N-CO-NH2 + NH2-CO-NH2
双缩脲反应：
在碱性条件下，双缩 脲可与铜离子结合生成 紫红色化合物。
H2N-CO-NH-CO-NH2 ＋NH3
双缩脲
具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩 脲反应，颜色深浅与其浓度成正比，可用比色 法进行测定。
Folin-酚试剂法测蛋白质含量
实验1-3 蛋白质的定量测定（Folin-酚试剂法）一、实验原理1921年，Folin 首创Folin-酚试剂法，利用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基（酚基）还原酚试剂（磷钨酸-磷钼酸）起蓝色反应；1951年，Lowry对此法进行了改进，先于标本中加碱性铜试剂，再与酚试剂反应，提高了灵敏度。
Folin-酚试剂法主要包括两步：第一步双缩脲反应在碱性溶液中，双缩脲（H2NOC－NH－CONH2）能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。
由于蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的多个肽键, 因此有双缩脲反应。
即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质- Cu2+复合物。
第二步 Folin-酚显色反应Folin-酚试剂在碱性条件下极不稳定，其磷钼酸盐-磷钨酸盐易被酚类化合物还原而呈蓝色反应（钼蓝和钨蓝的混合物）。
由于蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸( Tyr ) ，故有此显色反应。
即蛋白质- Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物。
在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出样品中蛋白质的含量。
另外，可以根据预先绘制的标准曲线求出待测样品中蛋白质的含量。
二、实验材料（一）样品液的制取10g样品加入100mL蒸馏水进行匀浆，离心后取上清液备用（或者振荡浸渍30min滤液备用）（二）试剂1．牛血清白蛋白标准液（1mg/mL）准确称取牛血清白蛋白粉末50.0mg，用0.1mol/L NaOH溶液润湿溶解，加蒸馏水到50mL。
2．碱性硫酸铜溶液(福林酚试剂A)①碱溶液：Na2CO32g 溶于100ml 0.1mol/L NaOH中。
②硫酸铜溶液：CuSO4∙5H2O 0.5g溶于100ml 35mmol/L(1%)酒石酸钾钠中。
使用前将①与②按50:1混合即成碱性硫酸铜溶液（福林酚试剂A）。
生化实验报告 福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度
实验三：福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度一、实验目的1．学会制备无蛋白血滤液。
2．掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。
3．掌握7200型可见分光光度计的使用方法。
二,实验原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用比色法测定。
三.实验仪器1．试管2．移液管3．卵清蛋白片4．7220分光光度计四.实验试剂1、碱性硫酸铜溶液A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水，稀释定容至1000ml.B液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
临用时，A液：B液=9：1混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。
2、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。
(2)葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。
3、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。
4、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。
五.实验步骤1、无蛋白血滤液的制备：用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入100ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。
再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再加0.33mol/L H2SO41-2滴）。
用干滤纸过滤。
先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液不清需重新过滤。
每毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml全血。
2、血糖的定量测定：取25ml的血糖管3支，编号。
第一支血糖管中加入2ml蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
福林(folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度实验报告完整版 (1)
福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度一、原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用比色法测定。
二、实验仪器1.卵清蛋白片2.7220分光光度计3.试管4.移液管三、实验试剂1.Folin-酚试剂A：碱性铜溶液甲液：取Na2CO32g溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中乙液：取CuSO4.5H2O晶体0.5g，溶于1%酒石酸钾100ml 中。
临用时按甲：乙=50：1混合使用。
2.Folin-酚试剂B：将100g钨酸钠、25g钼酸钠、700ml蒸馏水、50ml85%磷酸继100ml浓盐酸置于1500ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接上磨口冷凝管，回馏10小时，再加入硫酸锂150g，蒸馏水50ml及液溴数滴，开口煮沸15分钟，在通风橱内驱除过量的溴。
冷却，稀释至1000ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。
临用时，用1mol/l的氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至相当于1mol/L的酸。
3.1mg/mL牛血清蛋白液：称取1g牛血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中，并稀释至1000ml四、实验步骤1.标准曲线的绘制取7支干燥洁净的试管，编号，按下表加入试剂，比色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图。
2.样品测定准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求出样液的蛋白质浓度。
五、实验结果标准曲线的绘制：蛋白质浓度0.00 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.100.079 0.215 0.264 0.346 0.450 0.493 吸光度0.000则根据y=5.5072x=0.325得x为0.05901，则样液的浓度为0.5901mg/ml.六、实验结果分析及思考1、试说明Folin-酚法的优缺点该方法较双缩脲法反应灵敏，与0.1mg/ml浓度的蛋白质样品亦可得到很好的显色反应，使用很广泛，但花费时间长，其干扰因素较多。
Folin酚法测定血清蛋白质含量
实验8 Folin—酚法测定血清蛋白质含量一、目的1、学习分光光度计的原理和使用方法。
2、学习Folin—酚法测定蛋白质含量的原理和方法。
3、进一步掌握比色法或分光光度法，准确测定未知样品。
二、原理蛋白质浓度从它们的物理化学性质，如折射率，比重，紫外吸收测定而得知，或用化学方法，如定氮，双缩脲反应，Folin—酚法是一般实验室中经常使用的方法。
Folin—酚法是双缩脲法的发展，反应的第一步涉及到在碱性溶液中铜一蛋白质复合物的形成，然后这个复合物去还磷钼酸—磷钨酸试剂（Folin氏剂），产生深蓝色（钼蓝和钨蓝混合物）。
Folin—酚法灵敏度高，较双缩脲法灵敏100倍。
所测蛋白质样品中若含酚类及柠檬酸均有干扰作用，浓度较低的尿素（约0.5%左右），胍（0.5%左右），硫酸钠（1%），硝酸钠（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%）乙醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液对显色反应影响，这些物质浓度高时必须做校正曲线。
含硫酸铵的溶液只须加浓碳酸钠—氢氧化钠溶液即可显色测定。
若样品酸度较高，显色后色浅。
则必须提高碳酸钠—氢氧化钠溶液的浓度1—2倍。
三、材料、试剂与器具（一）材料血清：使用前稀释100%（二）试剂1、标准酪蛋白溶液：称取125毫克酪蛋白粉末，用0.1N氢氧化钠溶液溶解，加蒸馏水到250 毫升，则配成500微克/毫升的标准酪蛋白溶液。
2、Folin—酚试剂甲：由下述四种溶液配制而成。
（1）4%碳酸钠溶液（2）0.2N氢氧化钠溶液（3）1%硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶液（4）2%酒石酸钾钠溶液，在使用前，将（1）和（2）等体积混合成碳酸钠—氢氧化钠溶液。
将（3）与（4）等体积混合配成硫酸铜—酒石酸钾钠溶液。
然后将这两种溶液按50：1的比例混合，即为Folin—酚试剂甲。
该试剂只能用一天，过期失效。
3．Folin—酚试剂乙：在2升的磨口回流装置内加入钨酸钠（Na2WO4·2H2O）100克，钼酸钠（Na2MOO4·2H2O）25克，蒸馏水700毫升，85%磷酸50毫升和浓盐酸100毫升，充分沸合后以小火回流10小时，再加入硫酸锂（L i2SO4）150克，蒸馏水50毫升及数滴液体溴。
Folin-酚试剂法测定蛋白质含量
Folin-酚试剂法测定蛋白质含量一、实验目的1、掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其实验操作技术。
2、掌握制作标准曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。
二、实验原理1、化学反应原理（1）双缩脲反应双缩脲反应：在碱性溶液中,双缩脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物。
图1 双缩脲蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的多个肽键, 可以发生双缩脲反应。
反应过程中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质-Cu2+复合物。
图2 蛋白质-Cu2+复合物（2）Folin-酚显色反应Folin-酚试剂在碱性条件下极不稳定，其磷钼酸盐-磷钨酸盐易被酚类化合物还原而呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝的混合物)。
蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸( Tyr ) ，故有此显色反应。
（即蛋白质-Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基与还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸反应生成蓝色的化合物。
）2、测算原理在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。
（即根据预先绘制的标准曲线求出未知样品中蛋白质的含量。
）三、材料与方法1、样品（1）健康人血清（300倍稀释）（2）牛血清白蛋白标准液（200μg/ml）（3）碱性硫酸铜溶液（当日有效）（4）Folin-酚试剂（5）蒸馏水2、仪器与器材（1） V-1100分光光度计 （2） 恒温水浴箱 （3）试管6支、试管架 （4）加样枪、加样枪架 3、实验流程4、反应步骤（1）试管编号为1、2、3、4、5、6，按图示加样后混匀放置10min 表1 加样试剂表（2）向各管内加入Folin-酚试剂0.20mL, 2s 内迅速混匀！ 40℃放置10min 。
（3）冷却至室温后，以500nm 波长比色，用1号管作空白，读取各管吸光度。
试剂（ml)1 2 3 4 5 6 牛血清白蛋白标准液样品液（稀释300倍）蒸馏水碱性硫酸铜- - 1.02.00.20 - 0.802.00.40 - 0.602.00.60 - 0.402.00.80 - 0.202.0- 0.50 0.502.0（4）绘制标准曲线，计算浓度。
酚试剂法测定蛋白质含量实验报告
南方医科大学生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：第七实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称Folin-酚试剂法测定蛋白质含量实验日期实验地点第七实验室合作者指导老师评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的1、掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其实验操作技术。
2、熟悉分光光度计的用法。
3、掌握制作标准曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。
二、实验原理1、双缩脲反应：在碱性溶液中，双缩脲能与Cu2+作用,形成紫红色的络合物,而蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的多个肽键，在与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质-Cu2+复合物。
2、Folin-酚试剂在碱性条件下极不稳定，蛋白质-Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物。
3、在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。
即根据预先绘制的标准曲线求出未知样品中蛋白质的含量。
三、材料与方法：以流程图示意1、实验材料（1）样品健康人血清（300倍稀释）；正常人血清蛋白质含量：60~80 g/L（2）试剂牛血清白蛋白标准液（200μg/ml）；碱性硫酸铜溶液；Folin-酚试剂2、仪器与器材V-1100分光光度计；恒温水浴箱；试管6支、试管架；加样枪、加样枪架3、实验步骤（1）图示图一：Folin-酚试剂法测定蛋白质含量流程图（2）取6支试管做好标记，再按下表加样：（1为空白对照，2-5作标准，6为待测样品）试剂（ml) 1 2 3 4 5 6牛血清白蛋白标准液样品液（稀释300倍）蒸馏水碱性硫酸铜--1.02.00.20-0.802.00.40-0.602.00.60-0.402.00.80-0.202.0-0.500.502.0表一：反应体系设置（3）加样时顺序加样，在1号试管加入碱性硫酸铜溶液2ml后开始计时，等待1分钟再往下一支试管加入等量的碱性硫酸铜溶液，摇匀。
生化实验报告-福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度
实验：福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度一、原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用比色法测定二、实验仪器1.卵清蛋白片2.7220分光光度计3.试管4.移液管三、实验试剂1.Folin-酚试剂A：碱性铜溶液甲液：取Na2CO32g溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中乙液：取CuSO4.5H2O晶体0.5g，溶于1%酒石酸钾100ml中。
临用时按甲：乙=50：1混合使用。
2.Folin-酚试剂B：将100g钨酸钠、25g钼酸钠、700ml蒸馏水、50ml85%磷酸继100ml浓盐酸置于1500ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接上磨口冷凝管，回馏10小时，再加入硫酸锂150g，蒸馏水50ml及液溴数滴，开口煮沸15分钟，在通风橱内驱除过量的溴。
冷却，稀释至1000ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。
临用时，用1mol/l的氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至相当于1mol/L的酸。
3.1mg/mL牛血清蛋白液：称取1g牛血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中，并稀释至1000ml四、实验步骤1.标准曲线的绘制取7支干燥的试管，编号，按下表加入试剂，比色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图。
2.样品测定准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求出样液的蛋白质浓度。
五、实验数据1标准曲线的绘制2.样品测定右上表可知待测样液的蛋白质吸光度y=0.853,则由图可知x=0.104mg/ml故待测样液的蛋白质浓度为0.104mg/m l×5ml÷0.5ml=1.04mg/ml六、实验分析注意事项：1.在实验时，不要将牛血清蛋白和样液加反了；2.一定要注意实验的时间，因为溶液的光密度值是随着时间在不断增大的，如果时间超过了30分钟，则测得的光密度值就不准确了；3.由于分光光度计比较精密，所以往试管中加药品的时候要尽量做到准确；4.在使用分光光度计时，那比色皿是要拿它的毛面，不可以用手接触它的光滑面，防止自己手上的油污是测量值不准确；5.在擦拭比色皿时，要顺着一个方向擦；6.在比色皿中装入的液体量大约要是比色皿体积的三分之二。
福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度实验报告完整版
福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度一、原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用比色法测定。
二、实验仪器分光光度计,试管,移液管,容量瓶，分析天平，烧杯三、实验试剂1.Folin-酚试剂甲：碱性铜溶液甲液：取Na2CO32g溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中乙液：取CuSO4.5H2O晶体0.5g，溶于1%酒石酸钾100ml。
临用时按甲：乙=50：1混合使用。
2.Folin-酚试剂乙：将10g钨酸钠、2.5g钼酸钠、70ml蒸馏水、5ml85%磷酸继10ml浓盐酸置于150ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接上磨口冷凝管，回馏1小时，再加入硫酸锂15g，蒸馏水5ml及液溴数滴，开口煮沸15分钟，在通风橱内驱除过量的溴。
冷却，稀释至100ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。
临用时，用1mol/l的氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至相当于1mol/L的酸。
标准蛋白质溶液：称取1g牛（人）血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中，并稀释至1000ml四、实验步骤1.标准曲线的绘制取7支干燥洁净的试管，编号，按下表加入试剂，比色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图。
各管加入1mlFo1in 酚试剂乙后，立即摇匀，放置15分钟后比色，在500nm 处记下各管光密度，以0号管为对照，以吸光度为纵坐标，标准蛋白质溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线2.样品测定准确吸取样液于干燥的试管中，同样按下表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求出样液的蛋白质浓度。
室温放置10分钟后，再各加1毫升Fo1in 酚试剂乙，立即摇匀，放置15分钟，在500nm 处测定光密度值。
五、实验结果管号试剂 1 2样液（ml ） 1.0 1.0Folin-酚试剂甲 5.0 5.0（ml ）标准曲线的绘制：蛋白质浓度0.00 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 吸光度0.000 0.079 0.215 0.264 0.346 0.450 0.493则根据y=5.5072x=0.325得x为0.05901，则样液的浓度为0.5901mg/ml.六、实验结果分析及思考1、试说明Folin-酚法的优缺点该方法较双缩脲法反应灵敏，与0.1mg/ml浓度的蛋白质样品亦可得到很好的显色反应，使用很广泛，但花费时间长，其干扰因素较多。
Folin-酚试剂法测蛋白质含量
Folin-酚试剂法测蛋白质含量实验1-3 蛋白质的定量测定（Folin-酚试剂法）一、实验原理1921年，Folin 首创Folin-酚试剂法，利用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基（酚基）还原酚试剂（磷钨酸-磷钼酸）起蓝色反应；1951年，Lowry对此法进行了改进，先于标本中加碱性铜试剂，再与酚试剂反应，提高了灵敏度。
Folin-酚试剂法主要包括两步：第一步双缩脲反应在碱性溶液中，双缩脲（H2NOC－NH－CONH2）能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。
由于蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的多个肽键, 因此有双缩脲反应。
即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质- Cu2+复合物。
第二步Folin-酚显色反应Folin-酚试剂在碱性条件下极不稳定，其磷钼酸盐-磷钨酸盐易被酚类化合物还原而呈蓝色反应（钼蓝和钨蓝的混合物）。
由于蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸( Tyr ) ，故有此显色反应。
即蛋白质- Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物。
在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出样品中蛋白质的含量。
另外，可以根据预先绘制的标准曲线求出待测样品中蛋白质的含量。
二、实验材料（一）样品健康人血清（稀释300倍）（二）试剂1．牛血清白蛋白标准液（200 g/ml）准确称取牛血清白蛋白粉末50.0mg，用0.1mol/L NaOH溶液润湿溶解，加蒸馏水到250ml。
2．碱性硫酸铜溶液①碱溶液：Na2CO3 2g 溶于100ml 0.1mol/L NaOH中。
②硫酸铜溶液：CuSO4?5H2O 0.5g溶于100ml 35mmol/L(1%)酒石酸钾钠中。
使用前将①与②按50:1混合即成碱性硫酸铜溶液。
使用时新鲜配制。
3．Folin-酚试剂在2L磨口回流装置内加钨酸钠（Na2WO4?2H2O）100g，钼酸钠（Na2MoO4?2H2O）25g，蒸馏水700ml，14.68mol/L（85%）磷酸50ml，浓盐酸100ml，充分混合后用小火回流10h。
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不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的
1、掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其实验操作技术。
2、掌握制作标准曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。
二、实验原理
Folin-酚反应是利用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基（酚基）还原酚试剂（磷钨酸-磷钼酸）起蓝色反应。
为了提高该反应的敏感度，先于标本中加碱性铜试剂，再与酚试剂反应。
1、双缩脲反应：在碱性溶液中,双缩脲(H2NOC－NH－CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。
由于蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的多个肽键,因此有双缩脲反应。
即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质- Cu2+复合物。
2、Folin-酚显色反应：蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。
即根据预先绘制的标准曲线求出未知样品中蛋白。