石蜡切片制片流程(番红固绿滴染)

石蜡切片制片流程（番红固绿滴染）

1.鲜样FAA（18：1：1）抽气固定24h以上。

2.易碎的材料可用甘油酒精软化剂（1：1）软化1周以上（乙二胺软化剂容易导致颜色变

深）。

3.70%酒精浸泡1h。

4.80%酒精浸泡1h。

5.95%酒精浸泡1h。

6.吸水纸迅速吸干，100%酒精浸泡1h。

7.100%酒精浸泡1h。

8.含1/2酒精+二甲苯的溶液浸泡1h。（若有浑浊，即脱水不完全，需要重新从95%酒精再

脱水一次）。

9.纯二甲苯浸泡1h。

10.纯二甲苯浸泡1h。

11.加入约1/4二甲苯体积的碎蜡，放置约半小时，再加入1/4体积碎蜡（也可一步到位）。

12.视混合物熔点而定，40-50℃液体状态渗蜡1-2d。

13.视石蜡熔点而定，50-65℃（高于熔点3-5℃），含1/2二甲苯+石蜡的蜡锅浸蜡2h。

14.含1/3二甲苯+2/3石蜡的蜡锅浸蜡2h。

15.纯石蜡锅浸蜡2d以上。

16.包埋（若材料大、中间有空气可调高温度再抽气）（新蜡不易凝固，可在新蜡锅抽气再

用老蜡包埋）。

17.空气中冷却（急剧冷却容易收缩不均而变形），削块成棱台形蜡块。

18.切片（8-20µm，若太薄易碎则调高厚度）。

19.40℃水中展片，用涂有粘片剂的载玻片捞片（展片时间不宜太短，易产生褶皱）（捞片

的展片效果优于滴水展片，气泡少），40℃烘干。

20.40-50℃烤片2-3d（比石蜡熔点低5℃左右），让蜡带充分贴在玻片表面。

21.铅笔做好标记，二甲苯浸泡脱蜡20-30min。

22.二甲苯透明10-20min。

23.取出，滴加含1/2酒精+二甲苯的溶液，放置数秒，倾去。（需要过渡酒精至与染色剂的

酒精含量相同的浓度，染色）（以50%番红酒精溶液和95%固绿为例）。

24.滴加100%酒精，放置数秒，倾去。

25.滴加95%酒精，放置数秒，倾去。

26.滴加80%酒精，放置数秒，倾去。

27.滴加70%酒精，放置数秒，倾去。

28.滴加50%酒精，放置数秒，倾去。

29.滴加含50%酒精溶液的番红染色5min，倾去。

30.滴加50%酒精洗去浮色，倾去。

31.滴加70%酒精，放置数秒，倾去。

32.滴加80%酒精，放置数秒，倾去。

33.滴加95%酒精，放置数秒，倾去。

34.滴加含95%酒精溶液的固绿染色30s，倾去。

35.滴加95%酒精洗去浮色，倾去。

36.滴加100%酒精1min，倾去。

37.滴加100%酒精5min，倾去。

38.滴加含1/2酒精+二甲苯的溶液浸泡1min，倾去（若有浑浊，即脱水不完全，需要重新

从95%酒精再脱水一次）。

39.滴加二甲苯透明20-30min（二甲苯易挥发，注意补加）。

40.倾去二甲苯，重做上一步。

41.倾去二甲苯，在二甲苯干之前滴加中性树胶封片（封片后若材料中间有气泡可在酒精灯

下来回摆动几次可消除）。

42.37℃烘干。