紫外定性定量分析
第三章 紫外-可见吸收光谱分析
2．不饱和脂肪烃 ．
在不饱和烃类分子中，除含有σ键外，还含有π 键，它们可以产生 σ→σ＊和π→π＊ 两种跃迁。 如果存在共轭体系，则随共轭系统的延长， 吸收带将明显向长波方 向移动，吸收强度也随之增强 在共轭体系中， π→π＊跃迁产生的吸收带又称为K（Konjugation） 带。其特点是：强度大，εmax›104；位置一般在217～280nm λmax和εmax的大小与共轭链的长短及取代基的位置有关 根据K带是否出现，可判断分子中共轭体系的存在的情况。在紫外光 根据 带是否出现，可判断分子中共轭体系的存在的情况 带是否出现 谱分析中有重要应用。
紫外－ §3-3 紫外－可见分光光度法的应用 一、 定性分析 二、纯度检查 三、结构推测 四、定量分析 单组分样品的定量分析 多组分样品的定量分析
一、 定性分析
1、依据：吸收光谱的特征——形状、波长、峰数目、强度、 吸光系数。 、依据：吸收光谱的特征 形状、 形状 波长、峰数目、强度、 吸光系数。 2、方法：对比法 、方法： (1) 对比吸收光谱特征数据 (2) 对比吸光度或吸光系数的比值
3．芳香烃 ．
苯有三个吸收带 E1带180∼184nm ε=47000 E 2带200∼204 nm ε=7000 苯环上三个共扼双键的 π → π*跃迁特征吸收带 B带 230-270 nm
ε=200
π → π*与苯环振动引起； 含取代基时， B带简化，红移 当苯环上有取代基时，苯的三个特征谱带都会发生显著的变化， 其中影响较大的是E2带和B谱带。
化合物 H2O CH3OH CH3CL CH3I CH3NH2
λmax（nm） 167 184 173 258 215
εmax 1480 150 200 365 600
化学分析与定性定量分析方法
化学分析与定性定量分析方法化学分析是指通过各种化学方法和手段，对物质进行分析和鉴定的过程。
化学分析方法广泛应用于科学研究、工业生产以及环境保护等领域。
它可以通过定性和定量两种方式来分析物质的组成、性质以及含量等信息。
本文将介绍化学分析的基本概念、定性分析方法和定量分析方法。
一、化学分析的基本概念化学分析是一种实验室技术，旨在确定或鉴定物质的各种组成、结构以及特征等信息。
它是化学研究的重要手段之一，可以帮助科学家探索物质的性质和行为。
化学分析主要分为定性分析和定量分析两种方法。
二、定性分析方法1. 颜色反应法：该方法是一种非常直观的定性分析方法，通过观察物质在加入特定试剂后所产生的颜色变化来确定物质的成分。
例如，溴水滴入无机盐溶液中，如果产生橙红色物质，则可以确认该无机盐中含有溴离子。
2. 沉淀法：沉淀法是基于生成沉淀物的定性分析方法。
根据不同物质在特定试剂中产生的沉淀形态、颜色等特征来确定物质的成分。
例如，向无机盐溶液中加入氢氧化钠，如果观察到白色沉淀物生成，则可以确认该溶液中含有钙离子。
3. 质谱法：质谱法是一种高分辨率的定性分析方法，通过测定物质的质量-电荷比来确定其分子结构和组成。
质谱法常用于有机化学分析，可以帮助确定化合物的结构和分子式等信息。
三、定量分析方法1. 滴定法：滴定法是一种常用的定量分析方法，利用化学反应的滴定过程来测定待测物质的含量。
根据滴定液的浓度、滴定体系的pH值以及化学反应的反应条件等参数，可以准确测定物质的浓度。
2. 分光光度法：分光光度法是使用可见光或紫外光对物质进行吸收或发射光谱的定量分析方法。
通过测定物质对特定波长的光的吸收程度或发射光的强度，可以间接测定物质的含量。
3. 电化学分析法：电化学分析法是利用电化学原理进行定量分析的方法。
例如，电位滴定法可以通过测定待测物质在特定电极上的电位变化来确定其浓度。
四、发展趋势和应用前景随着科学技术的不断发展，化学分析方法也在不断创新和改进。
紫外-可见分光光度法
一、分光光度计的主要部件 1. 光源
对光源基本要求：足够光强、稳定、 连续辐射且强度随波长变化小。
钨及碘钨灯：340～2500 nm，多 用在可见光区；
氢灯和氘灯：160～375 nm，多用 在紫外区。
2. 单色器
单色器的用途就是把混合光变成 单色光，由入射狭缝、准直镜、色散 元件、聚焦元件和出口狭缝组成。常 用的色散元件有棱镜和光栅。
对于光谱分析，可测量的最小分析信 号xL为
xL xb ksb
空白试验 多次测量 的平均值
根据一定 置信度确 定的系数
空白试验 多次测量 的标准差
与 xL xb ksb 相对应的浓
度或量即为检出限L
L xL xb ksb
S
S
方法的灵敏度
2. 标准比较法
该法是标准曲线法的简化，即只
配制一个浓度为cs的标准溶液，并测量 其吸 光度 ， 求 出吸 收系 数 k， 然 后 由
Aa2
Ab2
a
2
lca
b
2
lcb
cb
Aa2b
a
2
lca
l
b
2
1. 解方程组
Aa1b
Aa1
Ab1
a
1
lca
b
1
lcb
Aa2b
Aa2
Ab2
a
2
lca
b
2
lcb
2. 双波长法—等吸收点法
测定b组分时，选择b组分的最大吸收波长作测定波长 1，由b的峰顶向横坐标作垂线与a吸收曲线的一侧相 交，从相交点作横坐标的平行线与a吸收曲线的另一 侧相交，交点所对应的波长为参比波长2 。在1和2 处分别测量吸光度 A1ab与 ，然后相减求 Aab 。
紫外可见分光光度法定量方法
紫外可见分光光度法定量方法
紫外可见分光光度法是一种常用的分析技术，可以用于分析多种物质的浓度。
以下是紫外可见分光光度法定量方法的步骤：
1. 准备样品：将待测样品制备成透明的溶液或悬浊液，并过滤除去杂质。
2. 校正仪器：使用标准试剂校正光谱仪，并确定检测范围和灵敏度。
3. 测量样品：将样品溶液放入样品池中，使用光谱仪测量其在透射或反射模式下的吸光度。
记下测量结果。
4. 绘制标准曲线：使用标准试剂制备不同浓度的标准样品，并按照步骤3测量其吸光度。
然后将吸光度与样品浓度之间的关系绘制成标准曲线。
5. 计算样品浓度：使用标准曲线计算样品的浓度。
将样品的吸光度值代入标准曲线方程中，计算出样品的浓度。
6. 分析结果：将样品的浓度结果记录下来，并根据需要进行数据分析和解释。
需要注意的是，使用紫外可见分光光度法进行测量时，需要注意仪器的精度和测量条件的一致性，以避免误差的产生。
此外，样品的制备和处理也是影响测量结果的重要因素，需要仔细控制。
紫外分光光度法原理
紫外分光光度法原理
紫外分光光度法是一种常用的分析化学方法，它利用物质对紫外光的吸收来进
行定量或定性分析。
其原理是基于物质分子在紫外光照射下吸收特定波长的光能，从而产生电子跃迁，使得物质分子发生能级跃迁，从而产生吸收现象。
这种吸收现象与物质的结构和化学键有关，因此可以通过测定吸光度来确定物质的浓度或进行化合物的鉴定。
紫外分光光度法的原理基础是比尔-朗伯定律，该定律表明物质溶液对紫外光
的吸收与其浓度和光程成正比。
根据比尔-朗伯定律，可以利用吸光度与浓度之间
的线性关系来确定物质的浓度。
这种原理使得紫外分光光度法成为一种简单、快速、准确的分析方法，被广泛应用于生物化学、药物分析、环境监测等领域。
紫外分光光度法的工作原理是通过紫外可见分光光度计来实现的。
该仪器利用
光源产生一定波长的光，经过样品后，光强度的变化被探测器检测到，并转化为电信号。
根据比尔-朗伯定律，吸光度与浓度成正比，因此可以根据样品吸光度的测
定值来计算出物质的浓度。
在实际应用中，紫外分光光度法可以用于测定各种有机化合物、药物、生物分
子等的浓度。
例如，可以利用紫外分光光度法来测定DNA、蛋白质、激素等生物
分子的浓度，也可以用于药物的含量分析，甚至可以用于环境水样中有机物的监测。
总之，紫外分光光度法是一种重要的分析方法，其原理基于物质对紫外光的吸
收现象，利用比尔-朗伯定律来实现浓度的测定。
通过紫外分光光度法，可以快速、准确地测定各种有机化合物的浓度，具有广泛的应用前景。
实验一-紫外分光光度法测定维生素C片中的VC含量
紫外分光光度法测定维生素一、实验目的1、了解紫外分光光度计的主要结构及工作原理。
C片中的VC含量2、掌握紫外分光光度计的操作方法及紫外定性定量分析方法3．掌握紫外分光光度法测定水中维生素C含量的原理与分析条件的选择。
二、实验原理维生素C是人体重要的维生素之一，它影响胶元蛋白的形成，参与人体多种氧化-还原反应,并且有解毒作用。
人体不能自身制造Vc，所以人体必须不断地从食物中摄入Vc，通常还需储藏能维持一个月左右的Vc。
缺乏时会产生坏血病，故又称抗坏血酸。
维生素C属水溶性维生素，分子式C6H8O6。
分子结构中具有二烯醇结构，其结构如下：它易溶于水，微溶于乙醇，不溶于氯仿或乙醚。
分子中的二烯醇基具极强的还原性，性质活泼，易被氧化为二酮基而成为脱氢抗坏血酸。
维生素C分子结构中有共轭双键，固在紫外光区有较强的吸收。
根据维生素C在稀盐酸溶液中，Vc吸收曲线比较稳定，在最大吸收波长处，其吸收值A的大小与维生素C的浓度c的大小成正比，符合郎伯—比尔定律：A=εbc其中A为吸收度；c为试样中维生素C的浓度，mol·L-1；b为吸收池厚度，cm；ε为摩尔吸收系数，L·mol-1·cm-1。
若在最大吸收波长下，首先绘制出维生素C在最大吸收波长下的标准曲线，然后在相同条件下测定出吸光度A，由测得的吸光度A在标准曲线上查得浓度,换算为药品中含量(mg/片)。
三、实验仪器与试剂1．仪器TU1810型紫外分光光度计。
电子天平1台，研钵1个，50mL容量瓶7只和500mL容量瓶1只,10mL移液管2支，100mL、1000mL烧杯2只。
2．试剂维生素C标准品(抗坏血酸)，市售维生素C含片（100mg/片），冰醋酸，蒸馏水。
四、实验步骤1.配制维生素C标准贮备液500mL(浓度约为1.5×10-4mol/L):称取约0.0132g维生素C标准品于100mL的烧杯中，用超声波助溶后定容于500mL容量瓶中，摇匀，配成贮备液。
紫外可见分光光度法
420 nm
0.8
0.6
A
0.4
0.2
0.0
460 nm
530nm
200
300
400
500
600
700
wavelength
500nm
A
700 nm
1.2
610 nm
1.0
0.8
420 nm
0.6
0.4
0.2
0.0
200
300
400
500
600
700
wavelength
460 nm
530nm
500nm
2. 直接比较法： 已知试样溶液基本组成，配制相同基体、相近浓
度的标准溶液，分别测定吸光度A标、A样
（二）多组分定量 吸光度具有加合性的特点。
吸收光谱三种相互重叠的情况：
1.第一种情况：
分别在1 及 2 处测定 a 及 b 组分的 c
2. 第二种情况：
先在 1 处测得 ca，再在2处测得混合组分的 吸光度 Aa+b ，根据吸收定律加和性：
Entrance Slit
Array Detector
Measure a large range of wavelengths simultaneously. Parallel detection scheme.
电表指针 荧光屏显示
数字显示 电脑
1.单波长、单光束分光光度计（721、722、752 型 等） 一个单色器；一种波长的单色光；一束单色 光。
迁最大吸收波长的经验规则。
共轭二烯、多烯烃: p39
共轭烯酮类化合物: p40
2、Scott规则 类似于Woodward-Fieser规则，用于计算芳香 族羰基衍生物的跃迁最大吸收波长的经验规则。
紫外-可见吸收光谱分析
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概述
• 紫外-可见吸收光谱法又叫紫外-可见分光光度法，是利用某 些物质分子能够吸收光谱中200-780nm波长的辐射来进行分析 测定的方法；
• 机理：源于价电子或分子轨道上电子的电子能级间跃迁；
• 研究对象：通常为在200-780nm有吸收的分子物质；
• 特点：仪器简单，应用广泛，可广泛用于无机和有机物质的 定性和定量测定。
• 包括：光谱分析法和非光谱分析法。
• 光谱分析法是指在光(电磁波)的作用下，通过测量物质产 生的发射光、吸收光或散射光的波长和强度来进行分析的 方法。
• 目前，紫外-可见(UV-VIS)、红外(IR)、核磁共振(NMR)等 现代波谱技术已被广泛应用于测定有机化合物的结构。
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概述
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2. 基本原理
2.3.3朗伯-比耳定律适用性
引起偏离的因素(两大类)： a. 物理性因素；
原因：难以获得真正的单色光。非单色光、杂 散光、非平行入射光都会引起对朗伯-比耳定律的 偏离；
•
在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起
来的分析方法称为吸收光度法,主要有:
• 紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200400 nm（近紫外区),可用于结构鉴定和定量分析。
• 可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400780 nm,主要用于有色物质的定量分析。
• 红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围2.51000 m ,主要用于有机化合物结构鉴定。
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2. 基本原理
2.3 定性定量分析
2.3.1定性分析
紫外可见光谱定性分析的主要依据是最大吸收波长 max和相应的摩尔吸光 系数 max以及吸收谱线形状、吸收峰数目等。
紫外可见分析的应用-定量分析(示差光度法)
定量分析5. 示差分光光度法用普通分光光度法测定很烯或很浓溶液的吸光度时，测量误差都很大。
若用一已知合适浓度的标准溶液作为参比溶液，调节仪器的100％透射比点（即0吸光度点），测量试样溶液对该已知标准溶液的投射比，则可以改善测量吸光度的精确度。
这种方法称为示差分光光度法。
其原因如图13.25所示。
当测定低透射比（高吸光度）的高浓度试液时，用比试液浓度C1稍低的标准溶液C2作参比溶液，这种示差法叫高吸收法；当测定主透射比（低吸光度）的低浓度溶液时，用比试液浓度稍高的标准溶液作参比溶液，这种示差法叫低吸收法；若同时用浓度不同的两种标准溶液（试液的浓度需介于两标准溶液之间）分别调仪器的100%透射比点及零透射比点，这种示差方法叫最精密法。
较常用的时高吸收法，其原理如下：根据吸收定律有则即用C2作参比测得的A为示差法实质上是相当于把仪器的测量标尺放大，以提高测定的精确度。
如果C2以常规法测得的透射比为10％，在示差法用调至透射比为100％，意味着标尺扩大了10倍。
若待测试液以常规法的最终分析法得的透射比为5％，用C2作参比的示差法测得透射比为50％。
示差法的最终分析结果准确度比常规法高，这是因为尽管示差法测出的很小的ΔC，而测得的误差dC也很大，则仍很大，但最终分析结果的相对误差为，Cs是标准参比溶液，Cs相对很大，所相对误差仍然很小。
6. 光度滴定法分光光度滴定法是利用被测组分或滴定剂或反应产物在滴定过程中的吸光度的变化来确定滴定终点，并由此计算试液中被测组分含量的方法。
分光光度滴定曲线是在某一给定波长处在滴定过程中所测得的吸光度与已知浓度的滴定剂体积之间的关系曲线，其曲线的形状取决于反应体系中样品组分、滴定剂或产物的吸光程度，如图13.26所示。
图13.26（a）是用有色滴定剂（其摩尔吸光系数εt>0）滴定含非吸收组分（εs>0）的试液，生成的产物也无吸收（εp＝0），即εt>0，εs=εp=0；（b）是εp>0，εs=εt=0；（c）是εs>0，εp=εt=0；（d）是εs>0，εt=εp=0；（e）是εp >0，εs=εt=0；（f）是εs>0，εp=εt=0。
紫外可见吸收光谱分析法
2020/10/25
（3）n →π＊跃迁
由n电子从非键轨道向π*反键轨道的跃迁(R 带)，基团中 既有π电子，也有n电子，可以发生这类跃迁。如:
C=O, N=N, N=O, C=S
-OH、-OR、 -NH2、 -NR2、 -SH、 -SR、 -Cl、-Br
D. 蓝移
是指一些基团与某些生色团(C=O)连接后，使生色团的吸 收带向短波移动，这种效应成为蓝移，该基团称为蓝移基团 ：
-CH3、-CH2CH3、 -O-COCH3
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E. 增色效应
最大吸收带的 εmax 增加时称为增色效应。 F. 减色效应
B. 助色团
是指分子中的一些带有非成键电子对的基团。本身在紫 外-可见光区不产生吸收，但是当它与生色团连接后，使生 色团的吸收带向长波移动，且吸收强度增大。
-OH、-OR、-NHR、-SH、-Cl、-Br、-I
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C. 红移
是指一些带有非成键电子对的基团与生色团连接后，使 生色团的吸收带向长波移动，这种效应成为红移，该基团 称为红移基团：
特点: (a). 与组成π键的杂原子有关,杂原子的电负性越强，
λmax 越小; (b). n →π* 跃迁所需能量最小，大部分吸收在
200 ~ 700 nm； (c). n →π* 跃迁的几率比较小，所以摩尔吸光系数比较
小 ，一般~ 102。
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(4) π→π* 跃迁
是π电子从成键π轨道向反键π*轨道的跃迁，含有π电子 基团的不饱和有机化合物，都会发生π→π*跃迁。如含有 碳碳双键、碳碳叁键的化合物。吸收一般在200 nm附近。
紫外光谱分析实验
紫外光谱分析实验紫外光谱分析实验⼆、【实验⽬的要求】通过实验了解苯的B吸收带精细结构及其在不同溶剂中精细结构的变化；利⽤紫外光谱法对分析纯环已烷、正已烷进⾏纯度检验；测量样品中苯的浓度。
要求同学掌握紫外光谱仪的仪器基本构造及分析原理；利⽤所学过的紫外光谱知识，解释苯在不同形态下的B吸收带精细结构变化；对分析纯环已烷、正已烷的纯度的检验，及可能含有的杂质是什么；设计出合理的⽅法测出样品中苯的浓度。
三、【实验原理】紫外吸收光谱法是有机分析中⼀种常⽤的⽅法，具有仪器设备简单、操作⽅便、灵敏度⾼的特点，已⼴泛应⽤于有机化合物的定性、定量和结构鉴定。
由于紫外吸收光谱的吸收峰通常很宽，峰的数⽬也很少，因此在结构分析⽅⾯不具有⼗分专⼀性。
通常是根据最⼤吸收峰的位置及强度判断其共轭体系的类型及在结构相似的情况下，区分共轭⽅式不同的异构体。
1．化合物中微量杂质检查利⽤紫外光谱法可以⽅便地检查出某些化合物中的微量杂质。
例如，在环⼰烷中含有微量杂质苯，由于苯有⼀B吸收带，吸收波长在220~270nm范围，⽽环⼰烷在此处⽆明显吸收峰。
因此，根据在220~270 nm 处有苯的粗细结构吸收带，即可判断环⼰烷中是否有微量杂质苯存在。
2．未知样品的鉴定⽤紫外光谱法鉴定未知样品时，若有标准样品，则把试样和标准样品⽤相同的溶剂，配制成相同浓度的溶液，分别测量吸收光谱，如果两者为同⼀化合物，则吸收光谱应完全⼀致。
若⽆标准样品，可与⽂献上的标准谱图进⾏⽐较。
在实际测定中，我们还常常利⽤紫外吸收峰的波长和强度进⾏定性分析。
例如，烟碱（尼古丁）在0.1N硫酸中最⼤吸收峰波长λmax为260纳⽶，百分吸光系数=343。
如果某化合物在相同条下测得的λmax和与烟碱的数据⼀致，则该化合物结构与烟碱结构就基本相同。
3．定量分析应⽤紫外光谱法进⾏定量分析的⽅法很多，如：a. 标准曲线法、b. 对照法、c. 吸光系数法、d. 混和物的定量、e. 双波长分光光度法。
紫外吸收光谱的特点
紫外吸收光谱的特点紫外吸收光谱是一种常用的分析技术，用于研究物质的吸收特性和分子结构。
它通过测量物质在紫外光区域的吸收强度，可以得到关于物质的信息，如它的化学组成、结构和浓度等。
紫外吸收光谱具有以下几个特点。
首先，紫外吸收光谱在分析物质时具有高灵敏度。
紫外光谱仪可以测量物质对紫外光的微弱吸收，即使是非常低浓度的物质也能够被检测到。
这使得紫外吸收光谱在许多领域中得到了广泛应用，如药物研发、环境监测和食品安全等。
其次，紫外吸收光谱具有较宽的应用范围。
紫外光谱仪可以检测200纳米至400纳米波长范围内的光线，这使得它可以应用于许多不同类型的物质分析。
例如，有机化合物、无机盐和生物分子等都可以通过紫外吸收光谱进行分析。
第三，紫外吸收光谱具有较高的分辨率。
紫外光谱仪可以提供高分辨率的光谱数据，可以检测到物质在不同波长下的吸收峰。
这使得研究人员可以通过观察吸收峰的位置和形状来推断物质的结构和性质。
第四，紫外吸收光谱是非破坏性的分析方法。
在进行紫外吸收光谱分析时，不需要对样品进行任何处理或改变其性质。
这意味着样品可以被保留下来进行其他类型的分析或进一步研究。
第五，紫外吸收光谱是一种相对简单和快速的分析方法。
相比于其他一些分析技术，紫外吸收光谱的操作相对简单，并且可以在较短的时间内得到结果。
这使得它成为许多实验室中常用的分析方法之一。
第六，紫外吸收光谱还可以用于定量分析。
通过测量样品在特定波长下的吸光度，可以建立一个标准曲线来确定样品中特定成分的浓度。
这使得紫外吸收光谱不仅可以进行定性分析，还可以进行定量分析。
总之，紫外吸收光谱是一种重要的分析技术，具有高灵敏度、宽应用范围、高分辨率、非破坏性、简单快速和定量分析等特点。
它在许多领域中得到了广泛应用，并为研究人员提供了重要的实验手段。
色氨酸紫外吸收光谱定性扫描及数据处理实验报告
色氨酸紫外吸收光谱定性扫描及数据处理实验报告一、实验目的1.了解紫外-可见光谱定性分析的原理2.掌握紫外-可见光谱定性图谱数据的处理方法3.掌握紫外可见光谱分析仪定性扫描的实验操作的方法二、实验原理1.分子的最外层电子吸收电磁波辐射，并跃迁到高能级后产生的吸收光谱，通常被称为电子光谱。
由于其波长范围在光谱的紫外可见光区，该谱图又叫做紫外可见光谱。
紫外可见光分为3个区域：远紫外区10-190nm，紫外区190-400nm，可见光区400-800nm，通常我们研究的波长在190-800nm之间的电磁波。
2.当光束照到物质上时，物质对不同波长的光的吸收、透射、反射、折射的程度不同，而使物质呈现不同的颜色。
对溶液来说，溶液呈现不同的颜色是因为溶液中的质点（离子或分子）对不同波长的光具有选择性吸收引起的，溶液呈现的是它吸收光的互补光的颜色。
如果将各种波长的单色光一次通过某一固定浓度的有色溶液，测量每一波长下有色溶液对光的吸收程度（即吸光度A），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到的曲线，即称吸收光谱曲线。
通过该曲线可以明确看出有色溶液对光的吸收情况。
3.紫外吸收光谱的分析①定性分析：虽然各化合物的分子结构不尽相同，但是只要有相同的生色团（相同的共轭结构），他们的最大吸收波长值就相同。
②定量分析：标准曲线法、标准样品对照法、多组分定量分析、示差分光光度法等都是紫外吸收光谱定量分析的依据。
本次试验我们采用的是标准曲线法。
扫描未知浓度的样品我们可以得到其最大吸收波长值，测得不同浓度该化合物的标准溶液在该最大波长处的吸光度值，作浓度——吸光度的曲线，未知浓度的样品在最大吸收波长值处的吸光度落在该曲线上，可以求出样品的浓度。
4.参与蛋白质合成的20种氨基酸在可见光下均无吸收，由于苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸含芳香基团，在紫外光区有吸收，并以色氨酸吸收紫外光的能力最强，其最大吸收峰出现在280nm左右5.UV-1240仪器的基本构造光源→单色器→样品室→检测器→显示器光源：紫外光区使用的光源是氢灯、氘灯，可见光区使用的光源是钨灯样品室:紫外区必须使用石英比色皿，可见光区可以使用石英比色皿或玻璃比色皿。
紫外光谱的应用范围
紫外光谱的应用范围
紫外光谱是一种常用的分析技术，可以在紫外光线的波长范围内进行吸收和发射的测量。
以下是紫外光谱在不同领域中的常见应用范围：
1. 化学分析：紫外光谱在化学分析中广泛应用，可以用于定量和定性分析有机物和某些无机物。
它常用于检测溶液中的成分、测定物质的浓度、研究反应动力学等。
2. 生物化学：紫外光谱在生物化学研究中有着重要的应用。
它可以用于测定蛋白质、核酸和其他生物大分子的含量，研究其结构和功能，以及监测生物反应的动态变化。
3. 药物分析：紫外光谱在药物分析中被广泛使用。
它可以用于药物质量控制、药物含量测定、纯度检验以及药物稳定性研究等方面。
4. 环境监测：紫外光谱在环境监测中具有重要的应用价值。
它可以用于检测水体、大气和土壤中的污染物，例如有机污染物、重金属离子等。
5. 食品安全：紫外光谱在食品安全领域中扮演着重要的角色。
它可以用于检测食品中的添加剂、农药残留、防腐剂等，确保食品的质量和安全性。
6. 材料科学：紫外光谱在材料科学研究中也有广泛应用。
它可用于表征材料的组成、结构和性质，例如聚合物、涂料、纳米材料等。
总体而言，紫外光谱在许多领域中都发挥着重要的作用，帮助人们进行物质分析、研究和监测，提高生产质量、环境保护和人类健康。
紫外-可见分光光度法定量测量注意事项
紫外-可见分光光度法定量测量注意事项以紫外-可见分光光度法定量测量注意事项为标题紫外-可见分光光度法是一种常用的分析方法，用于测量溶液中的物质浓度。
在进行紫外-可见分光光度法定量测量时，有一些注意事项需要遵守，以确保测量结果的准确性和可靠性。
1. 仪器校准在开始测量之前，确保分光光度计已经进行了校准。
校准是非常重要的，可以消除仪器本身的漂移或误差，提高测量结果的精确度。
校准应该定期进行，以确保仪器的准确性。
2. 样品制备样品制备是测量的重要步骤之一。
样品应该被适当稀释或浓缩，以使其浓度在仪器可测量的范围内。
此外，样品的pH值也需要调整到适当的范围，以确保测量结果的准确性。
3. 光程选择在进行测量时，选择适当的光程非常重要。
光程过长或过短都会对测量结果产生影响。
光程应该根据样品的吸光度进行选择，以保证在仪器的线性范围内进行测量。
4. 参比溶液为了减少仪器漂移和误差的影响，使用参比溶液进行校正是必要的。
参比溶液应该与待测样品具有相似的性质，例如溶剂、pH值等。
通过与参比溶液的比较，可以减少仪器和环境因素对测量结果的影响。
5. 良好的实验室操作在进行测量时，需要保持良好的实验室操作。
避免样品受到污染或氧化，使用洁净的容器和仪器进行操作。
此外，避免阳光直射和其他干扰源的干扰，以确保测量结果的准确性。
6. 测量条件在进行测量时，应选择适当的测量条件。
光源的选择、波长范围的设置以及积分时间的确定都会对测量结果产生影响。
根据样品的特性和实验要求，选择合适的测量条件以提高测量的准确性。
7. 数据处理在获得测量结果后，需要进行适当的数据处理。
根据不同的实验要求，可以进行数据平均、背景扣除、曲线拟合等操作。
这些处理步骤可以提高测量结果的精确度和可靠性。
8. 质控和质量保证在进行紫外-可见分光光度法定量测量时，质控和质量保证是非常重要的。
可以通过使用标准溶液进行校正和验证仪器的准确性。
此外，重复测量和对比不同实验者的测量结果也可以评估测量的准确性和可靠性。
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E1a
Ca
Ca
A1a E1a
由A2b
E2b
Cb
Cb
A2b E2b
续前
2．两组分吸收光谱部分重叠 λ1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测Ca λ2→测A2→a组分干扰→不能按单组分定量测Ca
过程：1 测定E1a ；A1a 2 测定E2a和E2b ；A2ab
由A1a
光度为0.463，已知该波长处的 E11c%m 927.，9 求咖啡酸百分
含量
解：
Ci
0.463 927.9 1
4.900
104
g
/100mL
4.900
106
g
/
mL
C样
10.00 10 3 200
5 50
5.000 106 g
/ mL
咖啡酸%
Ci
4.900 106
续前
2．对比吸收光谱的特征值
max ， max ，E11c%m sh ，min
续前
3．对比吸光度或吸光系数的比值：
例： 药典规定VB12定性鉴别：
278 ，361 ，550三处最大吸收
A361 1.70 ~ 1.88 ，A361 3.15 ~ 3.45
A278
A550
ห้องสมุดไป่ตู้
B12标示量%
Ci 标示量
100%
98.1%
续（前 二）多组分的定量方法
定量依据：A总 Aa Ab Ac 三种情况： 1．两组分吸收光谱不重叠（互不干扰）
两组分在各自λmax下不重叠→分别按单组分定量
过程：1 测定E1a ；A1a 2 测定E2b ；A2b
由A1a
C
A E11c%m
l
0.05 435 1
1.1104 g /100ml
1.1103 mg / ml
肾上腺酮% 1.1103 100 0.06% 2
二、定量分析
（一）单组分的定量方法
定量依据：A EC l
1．吸光系数法 2．标准曲线法 3．对照法：外标一点法
λ1 λ2
Aab Ca 消除了b的干扰
优点：同时将待测组分和干扰组分放大信号K倍， 提高了待测组分测定灵敏度
练习 1．取咖啡酸，在165℃干燥至恒重，精密称取10.00mg，加少量
乙醇溶解，转移至200mL容量瓶中，加水至刻度线，取此溶 液5.00mL，置于50mL容量瓶中，加6mol/L的HCL 4mL，加 水至刻度线。取此溶液于1cm比色池中，在323nm处测定吸
解：
Ci
0.507 207 1
2.45 103
g
/100mL
2.45 105
g
/
mL
C样
2.50 102 100
10 100
2.50 105 g
/ mL
B12 %
Ci C样
100%
2.45 105 2.50 105
100% 98.0%
续前
2．标准曲线法
选 a 的等吸收点1和2 A1a A2a
Aab A1b A2b (E1b E2b ) Cb
Eb Cb
Cb
Aab E1b E2b
Aab E b
续前
消去b的影响测a
选 b 的等吸收点1'和2' A1b' A2b'
Aab ' A1a' A2a' (E1a E2a ) Ca
另一点→λ2
令
A1b A2b
K
倍率因子
b
a Aab KA2ab A1ab
A1b
K ( A2b A2a ) ( A1b A1a )
A2b
(KA2b A1b ) (KA2a A1a )
Aab KA2a A1a (KE2a E1a ) Ca
分 子 量 为 1 0 0 . 0 ， 试 计 算 2 6 3 n mE处11c%m和 样 品 的 百 分 含 量 。
解： E11c%m
10 M
10 12000 100.0
1200
Ci
A El
lg T El
lg 0.417 1200 1
3.166 104 g /100mL 3.165 106 g / mL
第五节 定性和定量分析
一、定性分析
定性鉴别 纯度检查和杂质限量测定
二、定量分析
单组分的定量方法 多组分的定量方法
一、定性分析
（一）定性鉴别
定性鉴别的依据→吸收光谱的特征 吸收光谱的形状 吸收峰的数目 吸收峰的位置（波长） 吸收峰的强度 相应的吸光系数
续前
1．对比吸收光谱的一致性
同一测定条件下， 与标准对照物谱图或标准谱图 进行对照比较
C样
0.0500 250
2 100
4.000
10 6
g
/
mL
样品%
Ci
3.165 106 100%
100% 79.15%
C样
4.000 106
解：
A 0.414 C =E l =207 ×1 =0.00200g /100mL =20.0μg / mL
练习
例 ： 精 密 称 取 B12 样 品 25.0mg ， 用 水 溶 液 配 成 100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中， 加 水 至 刻 度 。 取 此 溶 液 在 1cm 的 吸 收 池 中 ， 于 361nm处测定吸光度为0.507，求B12的百分含量？
2
测定E
a 2
和E2b
；A2ab
A1ab A1a A1b E1a Ca E1b Cb
A2ab A2a A2b E2a Ca E2b Cb
Ca
A1ab E1a
E
b 2
E
b 2
A2ab E1b E2a E1b
Cb
A2ab E1a
E1a
Ca
Ca
A1a E1a
由A2ab A2a A2b E2a Ca E2b Cb
Cb
A2ab
E2a
E
b 2
Ca
续前
3．两组分吸收光谱完全重叠——混合样品测定
（1）解线性方程组法 （2）等吸收双波长消去法 （3）系数倍率法
1．解线性方程组法
步骤：1 测定E1a和E1b ；A1ab
续前
（二）纯度检查和杂质限量测定
1．纯度检查（杂质检查）
1）峰位不重叠：
找λ→使主成分无吸收，杂质有吸收→直接考察杂质含量
2）峰位重叠：
主成分强吸收，杂质无吸收 / 弱吸收→与纯品比较，E↓ 杂质强吸收 >> 主成分吸收→与纯品比较，E↑，光谱变形
续前
2．杂质限量的测定：
例：肾上腺素中微量杂质——肾上腺酮含量计算 2mg/mL -0.05mol/L的HCL溶液，λ 310nm下测定 规定 A310≤0.05 即符合要求的杂质限量≤0.06%
E1a E2b
A1ab
E
a 2
E
a 2
E1b
2．等吸收双波长法
步骤：
A1ab A1a A1b A2ab A2a A2b
Aab A1ab A2ab ( A1a A2a ) ( A1b A2b ) Aa Ab
消除a的影响测b
前提：固定仪器和测定条件 AK C AC
过程：配制标准系列固定条件 分别测定A C ~ A曲线 样品 同上条件 测定A样 查得C样
示例
芦丁含量测定 分别移取0.200mg / mL标样0 ~ 5mL 25mL
样品3.0mg 25mL
0.710mg/25mL
解：
1）对照法
2.5 25.00 ×1000 0.508 Ci ×10 = 1000 ×0.518 ⇒Ci =98.1μg / mL
B12标示量%
Ci 标示量
100%
98.1%
练习
2）吸光系数法
Ci
A El
Ci
2.50 10
0.508 207 1
Ci 98.1g / mL
续前
1．吸光系数法（绝对法）
前提：要求单色光
过程：W (g)样/ 含i 稀释C(g / mL) E已知求A Ci
Ci
[g /100mL]
A El
或Ci
[mol / L] A
l
i% Ci 100% C样
练习
例数光度：为是维2007生.，4素1用4B，112c求m的该比水溶色溶液池液的测在浓得3度某61n维m生处素的B百12溶分吸液光的系吸
续前
3．对照法：外标一点法
C
前提：固定仪器和测定条件；
截距为0 ；
标样与样品浓度相近
Cs
过程：一定 分别测定A样和A标
Ci
Ci
CS
Ai AS
注：当样品溶液与标准品溶液的
稀释倍数相同时
mi
mS
Ai AS
i% mi 100% m