治疗性抗体研发的进展和关键技术
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抗CD20 ofatumumab （Arzerra， 全人抗体） 抗RSV motarizumab （亲和力更高）
） 抗EGFR panitumumab （Vectibix， 全人抗体
抗体效应功能的改造
定点突变改造Fc 改变糖基化 双特异性或多特异性抗体
减弱抗体的效应功能
Fc上进行定点突变 Teplizumab(Leu234Ala,Leu235Ala)
SKVO3 –Her2+++
SKVO3 –Her2+++
HF人源抗体对Her2+ +细胞 的ADCC杀伤效应分析
SDS-PAGE非还原电泳
MCF7 - Her 2+
MCF7 - Her2
+
155KDa
HF
Herceptin
1986 1994 1997 1998 2000 2001 2002 2003 2004 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012
EB病毒转化人B细胞 人-人杂交瘤技术 抗体库技术 转基因小鼠 人工设计和合成人源抗体
抗体库技术 转基因小鼠
人工设计和合成人源抗体
D4
抗原抗体复合物结构信息分析
Her2晶体结构
抗体专家分析系统
人源化抗体设计、虚拟筛选
HF人源抗体基因合成、构建、表达
HF人源表达抗体的纯化和功能鉴定
HF人源抗体对Her2靶点的特异性识别
Simponi Numax Yervoy
鼠源
FDA批准的抗体药物
Remicade Herceptin Enbrel
Raptiva Tysabri
Ilaris Prolia
Arzerra ABThrax
嵌合
人源化
人源
第二代抗体药物
抗TNF adalimuab (Humira，全人抗体） certolizumab（Cimzia，PEG修饰的Fab） golimumab （Simponi，全人抗体）
AME-133v (Fc改造，提高ADCC) TRLI-05 (Fc改造，提高ADCC) Pro13192 (Fc改造，提高ADCC)
抗RSV/F MEDI-557 (Fc改造，增加半寿期)
3 抗体上偶联细胞毒物质
抗体-药物偶联技术
源自文库
赖氨酸 偶联
轻重链间二硫键偶联
定点偶联
KADCYLA (T-DM1) Genentech/Immunogen
OKT3 ReoPro Rituxan Simulect Mylotarg Campath Zevalin Xolair Avastin Lucentis Soliris Cimzia Stelara Actemra Benlysta Perjeta
Zenapax Synagis
Humira Bexxar Erbitux Vectibix
突变Gly236Ala，Ser239Asp，ILe332Glu提高 ADCP和ADCC
杂合IgG亚型提高CDC 突变Met252Tyr，Ser254Thr，Thr256Glu增加
抗体的半寿期
2 改变抗体Fc的糖基化
各种糖基化变化对抗体功能的影响
来自潘海报告
第三代抗体药物
抗CD20 obinutuzumab（糖基化改造，提高 ADCC）
治疗性抗体研发的进展和关键技术
沈倍奋 军事医学科学院基础医学研究所
主要内容
治疗性抗体研发概况 治疗性抗体研发的主要进展 治疗性抗体研发中要注意的问题
用抗体药物治疗的疾病
肿瘤 自身免疫病 感染性疾病 抗移植排斥 心血管疾病
骨质疏松 罕见病 眼黄斑变性 炭疽
抗体结构与功能关系
抗体药物的作用机理
直接效应 间接效应
诱导凋亡 抑制增殖 阻断生长因子或生长因子受体 干扰血管生成 依赖补体的细胞毒（CDC） 依赖抗体的细胞毒（ADCC) 作为毒素、放射性同位素和细胞
毒药物的载体 形成抗独特型抗体 通过双特异性抗体靶向效应细胞
抗体药物在临床应用中面临的挑战
免疫原性 杀伤靶细胞的活性弱 成药性问题 新靶点
临床试验
Phase I Phase I Phase I Phase I Phase I Phase I Phase I Phase I Phase I Phase II Phase II
FDA批准的ADC药物
放射性同位素，Bexxar, Zevalin 毒素 小分子药物，Mylotarg，T-DM1
Adcetris
4 双特异性抗体
欧洲上市的双特异性抗体
在临床试验的双特异性抗体
抗体名称
SAR156597 AFM13 FBT-A05,Bi20 MT110 MT111,MEDI565 IMCgp100 TF2 MEHD-7945A MM-111 CVX-241 Ozoralizumab ATN103
抗体药物研发的主要进展
降低抗体的免疫原性 改变抗体的效应功能 提高抗体表达量 引入先进的抗体表征和质控方法 改进抗体规模化生产技术 新靶点的发现
抗体人源化和人源抗体
CDR移植 FR移植 SDR移植 表面氨基酸重塑
Phage display 转基因鼠
单细胞PCR 人工设计
人源抗体制备的主要技术
去糖基化 Otelixizumab(去糖基化，Asn297Ala)
选择IgG4亚型或杂合亚型（IgG2/IgG4） Fc融合蛋白
提高抗体的效应功能
偶联细胞毒物质
抗体融合蛋白
双特异性抗体
改变抗体 效应功能
细胞内抗体
抗体Fc突变
改变抗体糖基化
1 抗体Fc突变提高效应功能
突变Ser239Asp，Glu330Leu，ILe332Glu提高 ADCC
靶抗原
IL4 x IL13 CD30 x CD16A CD20 x CD3 EpCAM x CD3 CEA x CD3 Gp100 x CD3 CEA x IMP288 hapten EGFR x HER3;dual IgG1 HER2 x HER3 Ang2 x VEGF;dual IgG1 TNF x albumin
ADCETRIS (aCD33-vcMMAE) Seattle Genetics
Thio-Mab or Ambrx’s unnatural AA incoporation
单抗: 癌细胞表面过量表达的抗原且能内吞。 偶联链: 在血液中稳定但可以在细胞内释放毒素。
毒素药物: 需要极毒的可以抑制细胞生长的化合物
） 抗EGFR panitumumab （Vectibix， 全人抗体
抗体效应功能的改造
定点突变改造Fc 改变糖基化 双特异性或多特异性抗体
减弱抗体的效应功能
Fc上进行定点突变 Teplizumab(Leu234Ala,Leu235Ala)
SKVO3 –Her2+++
SKVO3 –Her2+++
HF人源抗体对Her2+ +细胞 的ADCC杀伤效应分析
SDS-PAGE非还原电泳
MCF7 - Her 2+
MCF7 - Her2
+
155KDa
HF
Herceptin
1986 1994 1997 1998 2000 2001 2002 2003 2004 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012
EB病毒转化人B细胞 人-人杂交瘤技术 抗体库技术 转基因小鼠 人工设计和合成人源抗体
抗体库技术 转基因小鼠
人工设计和合成人源抗体
D4
抗原抗体复合物结构信息分析
Her2晶体结构
抗体专家分析系统
人源化抗体设计、虚拟筛选
HF人源抗体基因合成、构建、表达
HF人源表达抗体的纯化和功能鉴定
HF人源抗体对Her2靶点的特异性识别
Simponi Numax Yervoy
鼠源
FDA批准的抗体药物
Remicade Herceptin Enbrel
Raptiva Tysabri
Ilaris Prolia
Arzerra ABThrax
嵌合
人源化
人源
第二代抗体药物
抗TNF adalimuab (Humira，全人抗体） certolizumab（Cimzia，PEG修饰的Fab） golimumab （Simponi，全人抗体）
AME-133v (Fc改造，提高ADCC) TRLI-05 (Fc改造，提高ADCC) Pro13192 (Fc改造，提高ADCC)
抗RSV/F MEDI-557 (Fc改造，增加半寿期)
3 抗体上偶联细胞毒物质
抗体-药物偶联技术
源自文库
赖氨酸 偶联
轻重链间二硫键偶联
定点偶联
KADCYLA (T-DM1) Genentech/Immunogen
OKT3 ReoPro Rituxan Simulect Mylotarg Campath Zevalin Xolair Avastin Lucentis Soliris Cimzia Stelara Actemra Benlysta Perjeta
Zenapax Synagis
Humira Bexxar Erbitux Vectibix
突变Gly236Ala，Ser239Asp，ILe332Glu提高 ADCP和ADCC
杂合IgG亚型提高CDC 突变Met252Tyr，Ser254Thr，Thr256Glu增加
抗体的半寿期
2 改变抗体Fc的糖基化
各种糖基化变化对抗体功能的影响
来自潘海报告
第三代抗体药物
抗CD20 obinutuzumab（糖基化改造，提高 ADCC）
治疗性抗体研发的进展和关键技术
沈倍奋 军事医学科学院基础医学研究所
主要内容
治疗性抗体研发概况 治疗性抗体研发的主要进展 治疗性抗体研发中要注意的问题
用抗体药物治疗的疾病
肿瘤 自身免疫病 感染性疾病 抗移植排斥 心血管疾病
骨质疏松 罕见病 眼黄斑变性 炭疽
抗体结构与功能关系
抗体药物的作用机理
直接效应 间接效应
诱导凋亡 抑制增殖 阻断生长因子或生长因子受体 干扰血管生成 依赖补体的细胞毒（CDC） 依赖抗体的细胞毒（ADCC) 作为毒素、放射性同位素和细胞
毒药物的载体 形成抗独特型抗体 通过双特异性抗体靶向效应细胞
抗体药物在临床应用中面临的挑战
免疫原性 杀伤靶细胞的活性弱 成药性问题 新靶点
临床试验
Phase I Phase I Phase I Phase I Phase I Phase I Phase I Phase I Phase I Phase II Phase II
FDA批准的ADC药物
放射性同位素，Bexxar, Zevalin 毒素 小分子药物，Mylotarg，T-DM1
Adcetris
4 双特异性抗体
欧洲上市的双特异性抗体
在临床试验的双特异性抗体
抗体名称
SAR156597 AFM13 FBT-A05,Bi20 MT110 MT111,MEDI565 IMCgp100 TF2 MEHD-7945A MM-111 CVX-241 Ozoralizumab ATN103
抗体药物研发的主要进展
降低抗体的免疫原性 改变抗体的效应功能 提高抗体表达量 引入先进的抗体表征和质控方法 改进抗体规模化生产技术 新靶点的发现
抗体人源化和人源抗体
CDR移植 FR移植 SDR移植 表面氨基酸重塑
Phage display 转基因鼠
单细胞PCR 人工设计
人源抗体制备的主要技术
去糖基化 Otelixizumab(去糖基化，Asn297Ala)
选择IgG4亚型或杂合亚型（IgG2/IgG4） Fc融合蛋白
提高抗体的效应功能
偶联细胞毒物质
抗体融合蛋白
双特异性抗体
改变抗体 效应功能
细胞内抗体
抗体Fc突变
改变抗体糖基化
1 抗体Fc突变提高效应功能
突变Ser239Asp，Glu330Leu，ILe332Glu提高 ADCC
靶抗原
IL4 x IL13 CD30 x CD16A CD20 x CD3 EpCAM x CD3 CEA x CD3 Gp100 x CD3 CEA x IMP288 hapten EGFR x HER3;dual IgG1 HER2 x HER3 Ang2 x VEGF;dual IgG1 TNF x albumin
ADCETRIS (aCD33-vcMMAE) Seattle Genetics
Thio-Mab or Ambrx’s unnatural AA incoporation
单抗: 癌细胞表面过量表达的抗原且能内吞。 偶联链: 在血液中稳定但可以在细胞内释放毒素。
毒素药物: 需要极毒的可以抑制细胞生长的化合物