生殖和发育毒性试验与评定
8-2 生殖毒性及其评定
第二节生殖毒性及其评定一、生殖毒性表现外来化合物对生殖过程的损害作用可以表现为性淡漠、性无能或各种形式的性功能减退。
雌性可出现排卵规律改变、月经失调或闭经、卵巢萎缩、受孕减少、胚胎死亡、生殖力降低、不孕或不育等。
雄性可表现为睾丸萎缩或坏死、精子数目减少等。
二、生殖毒性作用的评定外来化合物对生殖过程作用的评定主要通过生殖毒性试验来进行，过去也称为繁殖试验。
生殖毒性试验可以全面反映外来化合物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的影响。
评定的主要依据是交配后母体受孕情况（受孕率）、妊娠过程情况（正常妊娠率）、子代动物分娩出生情况（出生存活率）、授乳哺育情况（哺育成活率）以及断奶后发育情况等。
此外还可同时观察出生幼仔是否有畸形出现，但畸形观察主要在发育毒性评定中进行。
（一）试验方法原则生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔。
大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。
一般设三个剂量组，另设对照组。
最高剂量组剂量应该超过预期人类实际接触水平，希望能使亲代动物出现轻度中毒，但不出现死亡或死亡率不超过10%，也不能完全丧失生育能力。
低剂量组的亲代动物不应观察到任何中毒症状。
另设中间剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。
中间剂量与高剂量和低剂量应呈等比级数。
最高剂量组轻度中毒的概念是进食量显著减少，体重明显下降。
要求最高剂量组出现轻度中毒的目的是表明在已能引起中毒剂量下，如仍不致影响正常生殖过程，则表示该受试物确实不具有生殖毒性作用。
反之，如剂量过低，则难于确定受试物是否确实不具有生殖毒性，有可能因剂量不足，未达到最小有作用剂量。
剂量的确定可用少数动物进行预试，如已进行过亚慢性和急性毒性试验，则最高剂量也可略高于亚慢性毒性试验中最大无作用剂量，或相当于LD50的1/10左右。
最低剂量可相当于最高剂量的1/30。
如经多次试验确实证实1 000mg／kg体重剂量对生育力无损害作用，或最高剂量可引起亲代动物表现一般毒性作用，但对生育力无不利影响，则可不进行其它剂量试验。
生殖毒性试验(食品安全国家标准)
床而导致不孕外，尚可影响胚胎的发生及发育，如胚胎死亡导致自然流产、胎仔发育迟缓以及胎仔畸形。 如果对母体造成不良影响会出现妊娠、分娩和乳汁分泌的异常，也可出现胎仔出生后发育异常。
４ 试验方法 ４．１ 受试物
受试物应使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理。将 受试物掺入饲料、饮用水或灌胃给予。 ４．２ 实验动物
个体在出生前暴露于受试物、发育成为成体之前（包括胚期、胎期以及出生后）出现的有害作用，表 现为发育生物体的结构异常、生长改变、功能缺陷和死亡。 ２．３ 母体毒性
受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征， 甚至死亡。
３ 试验目的和原理 凡受试物能引起生殖机能障碍，干扰配子的形成或使生殖细胞受损，其结果除可影响受精卵及其着
将每窝仔鼠于出生后第４天调整至相同数量（每窝８只～１０只），尽量做到每窝内雌、雄数量相等， 也可以窝内雌、雄数量不等，但各窝之间两性别的鼠数应分别相同。原窝中多余的鼠应随机取出，而不 应按体重选择。 ４．４．４ 观察代数
在受试物理化和生物特性允许的条件下，最高剂量应使Ｆ０ 代动物出现明显的毒性反应，但不引起 动物死亡；中间剂量可引起轻微的毒性反应；低剂量应不引起亲代及其子代动物的任何毒性反应（可按 最大未观察到有害作用剂量的１／３０，或人体推荐摄入量的１０倍）。 ４．４ 实验动物处理 ４．４．１ 受试物的给予 ４．４．１．１ 试验期间，所有动物应采用相同的方式给予受试物；每日在同一时间段给予受试物，每周７ｄ。 受试物应在交配前连续给予两种性别的各代大鼠至少１０周，并继续给予受试物至试验结束，其中子代 的 雌 鼠 和 雄 鼠 在 断 乳 后 每 日 给 予 。 各 代 大 鼠 给 予 的 受 试 物 剂 量 （按 动 物 体 重 给 予 ，ｍｇ／ｋｇ 体 重 或 ｇ／ｋｇ 体重）、饲料和饮水相同。 ４．４．１．２ 根据受试物的特性或试验目的，选择合适的给予方式。首选掺入饲料，若受试物加入饲料或饮 水中影响动物的适口性，则应选择灌胃给予受试物。 ４．４．１．３ 受试物灌胃给予，要将受试物溶解或悬浮于合适的溶媒中，首选溶媒为水，不溶于水的受试物 可使用植物油（如橄榄油、玉米油等），不溶于水或油的受试物可使用羧甲基纤维素、淀粉等配成混悬液 或糊状物等。受试物应新鲜配制，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者除外。应每日在同一时间灌 胃 １ 次 ，每 周 称 体 重 ２ 次 ，根 据 体 重 调 整 灌 胃 体 积 。 灌 胃 体 积 一 般 不 超 过 １０ ｍＬ／ｋｇ 体 重 ，如 为 水 溶 液 时 ，最 大 灌 胃 体 积 可 达 ２０ ｍＬ／ｋｇ体 重 ；如 为 油 性 液 体 ，灌 胃 体 积 应 不 超 过 ４ ｍＬ／ｋｇ 体 重 ；各 组 灌 胃 体 积一致。 ４．４．１．４ 受试物掺入饲料或饮水给予，要将受试物与饲料（或饮水）充分混匀并保证该受试物配制的稳 定性和均一性，以不影响动物摄食、营养平衡和饮水量为原则，受试物掺入饲料比例一般小于质量分数 的５％，若超过５％时（最大不应超过１０％），可调整对照组饲料营养素水平（若受试物无热量或营养成 分，且添加比例大于５％时，对照组饲料应填充甲基纤维素等，掺入量等同高剂量），使其与剂量组饲料 营养素水平保持一致，同时增设未处理对照组；也可视受试物热量或营养成分的状况调整剂量组饲料营 养素水平，使其与对照组饲料营养素水平保持一致。受试物剂量单位是每千克体重所摄入受试物的毫 克（或克）数，即 ｍｇ／ｋｇ体重（或 ｇ／ｋｇ体重），当受试物掺入饲料其剂量单位也可表示为 ｍｇ／ｋｇ（或 ｇ／ｋｇ）饲料，掺入饮水则表示为 ｍｇ／ｍＬ水。受试物掺入饲料时，需将受试物剂量（ｍｇ／ｋｇ体重）按动物 每１００ｇ体重的摄食量折算为受试物饲料浓度（ｍｇ／ｋｇ饲料）。 ４．４．２ 交配
第九章 生殖毒性和发育毒性及其评价
人类先天缺陷的原因
1、遗传因素 2、环境因素 3、原因不明的因素 我国将9月12日定为“中国预防出生缺陷日”
第一节 生殖毒性和发育毒性的基本概念
一、孕体的主要发育阶段
孕体：卵子受精后不断发育直至出生为止，都称为 孕体。 孕体的主要发育阶段： 1、着床前期
2、胚泡着床、植入和原肠形成
3、器官形成期：胚胎发育的关键期 结构畸形的敏感期
第九章 生殖毒性和发育毒性及 其评价
概述
生殖发育
生殖细胞发生、受精、着床、植入、 胚胎形成、胚胎发育、器官发生、分娩 和哺乳 （新生儿期、哺乳期直至性成熟 期）
生殖毒性：生殖毒性试验 发育毒性：发育毒性试验
检验受试物或其 代谢产物对成年哺 乳动物的生殖功能 和生育力的影响
研究外源化学物 对胚胎发育、胎仔 发育以及出生幼仔 发育的影响
4、胎儿期
二、生殖毒性
生殖毒性：指对雄性和雌性生殖功能或能力的损害和 对后代的有害影响。 妊娠期、妊娠前期、哺乳期
三、发育毒性
发育毒性：指在到达成体之前诱发的任何有害影响， 包括在胚胎期和胎儿期，以及在出生后诱发或显示的 影响。
具体表现： 1、生长迟缓 2、结构异常：致畸作用 3、功能缺陷 4、发育生物体死亡：流产、死产、死胎
10只孕鼠继续接触受试物至分娩 和哺乳结束
分娩后，幼仔体重、性别、有 无畸形
4d后 调整到相同幼仔数
称第4、7、14、21日体重， 记录成活情况
（二）第二阶段——致畸作用和胚胎毒性的评定 （三）第三阶段——围产期及出生后发育情况试验
二、两代生殖毒性试验 （一）实验程序
（二）结果评定 受孕率=妊娠雌性动物数÷交配雌性动物数×100% 妊娠率=妊娠出生活胎的鼠数÷受孕的鼠数×100% 出生活仔率=出生活仔鼠数÷胎仔总数×100% 出生存活率=出生后4d仔鼠存活数÷胎仔总数×100% 哺乳存活率=21d断乳时的仔鼠存活数÷胎仔总数×100% 三、人群调查
第八章 化学物质的生殖发育毒性和致畸作用及评价
3．损伤细胞和分子水平的翻译 细胞增殖率在个体发生过程中空间和
时间都在变化，在胚胎中细胞增殖、分化 和凋亡之间有精致的平衡。用CP处理妊娠 第10天大鼠，引起胚胎的S-期细胞周期阻 断，在细胞迅速增殖区域观察到细胞死亡
36
细胞周期长度的不同可能部分地影响 敏感性。如：胚胎的神经上皮对CP诱导 的细胞死亡相当敏感，而心脏有抵抗力。 第10天大鼠胚胎神经上皮的细胞周期时间 大约为9.5h，而在心脏中的细胞周期大约 是13.4h，这是由于心脏细胞比神经上皮 有更长的C0/G1期
48
第四节 外源性化学物发育毒性的评价
49
一、动物发育毒性试验
➢ 最佳联合方案是对成年动物进行染毒并包 括子代从受精卵到性成熟所有生长发育阶段 ➢ 观察期应贯穿一个完整的生命周期，以 检测近、远期效应 ➢ 最常选用的方案为三阶段试验
50
I 阶段试验
➢ 雌雄性交配前-受孕-雌性受精-雌性着床 期间染毒 ➢ 对成年雌雄性的生殖功能、配子的发生 及成熟、交配行为、受精、着床前的发育 和着床的影响
12
（二）器官形成期
孕体着床后直到硬腭闭合的一段时间 致畸敏感期或致畸作用危险期 (critical period)
➢ 器官结构畸形 ➢ 胚胎死亡
✓ 吸收胎（resorption） ✓ 流产
13
➢ 各个器官发育最旺盛时感受性最强，不 同器官的敏感期（target window）不同， 且有交叉重叠
8
3. 胚胎-胎儿毒性
胚胎毒性（embryotoxicity） 外源性理化因素造成的着床前后直到
器官形成期结束的所有毒性表现
胎儿毒性（fetoxicity） 器官形成期结束后的因素引发的任何
毒性表现（死亡、低体重、骨化迟缓、功 能缺陷以及结构异常）
生殖毒性及其评定
第二节生殖毒性及其评定一、生殖毒性表现外来化合物对生殖过程的损害作用可以表现为性淡漠、性无能或各种形式的性功能减退。
雌性可出现排卵规律改变、月经失调或闭经、卵巢萎缩、受孕减少、胚胎死亡、生殖力降低、不孕或不育等。
雄性可表现为睾丸萎缩或坏死、精子数目减少等。
二、生殖毒性作用的评定外来化合物对生殖过程作用的评定主要通过生殖毒性试验来进行，过去也称为繁殖试验。
生殖毒性试验可以全面反映外来化合物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的影响。
评定的主要依据是交配后母体受孕情况（受孕率）、妊娠过程情况（正常妊娠率）、子代动物分娩出生情况（出生存活率）、授乳哺育情况（哺育成活率）以及断奶后发育情况等。
此外还可同时观察出生幼仔是否有畸形出现，但畸形观察主要在发育毒性评定中进行。
（一）试验方法原则生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔。
大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。
一般设三个剂量组，另设对照组。
最高剂量组剂量应该超过预期人类实际接触水平，希望能使亲代动物出现轻度中毒，但不出现死亡或死亡率不超过10%，也不能完全丧失生育能力。
低剂量组的亲代动物不应观察到任何中毒症状。
另设中间剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。
中间剂量与高剂量和低剂量应呈等比级数。
最高剂量组轻度中毒的概念是进食量显著减少，体重明显下降。
要求最高剂量组出现轻度中毒的目的是表明在已能引起中毒剂量下，如仍不致影响正常生殖过程，则表示该受试物确实不具有生殖毒性作用。
反之，如剂量过低，则难于确定受试物是否确实不具有生殖毒性，有可能因剂量不足，未达到最小有作用剂量。
剂量的确定可用少数动物进行预试，如已进行过亚慢性和急性毒性试验，则最高剂量也可略高于亚慢性毒性试验中最大无作用剂量，或相当于LD50的1/10左右。
最低剂量可相当于最高剂量的1/30。
如经多次试验确实证实1 000mg／kg体重剂量对生育力无损害作用，或最高剂量可引起亲代动物表现一般毒性作用，但对生育力无不利影响，则可不进行其它剂量试验。
第八章生殖发育毒性作用及其评价 毒理学课件
第一节 生殖发育毒性概述
生殖发育 是哺乳动物繁衍种族的生理过程的总称。其 中包括生殖细胞（精子和卵细胞）的发生，卵细胞受精、 胚泡的形成、着床（人受精后10～14天，大、小鼠6～7 天） 、胚胎形成（8周前称胚，以后称胎）、胚胎发育、 器官发生（或称器官形成）、胎仔发育、分娩。从广义 上说还应包括胎儿娩出后的新生儿期、哺乳期、直到性 成熟的整个发育过程。
❖ 1960年前后，日本妇女以反应停（thalidomide）作镇静 剂减轻早孕反应，出生了近万名短肢畸形儿（海豹畸 形），约占早孕期服药者新生儿的1/3。
❖ 1968年和1978年在日本，1979年在台湾曾先后发生因多 氯联苯（PCBs）污染米糠油而导致的中毒事件，中毒 孕妇发生死产、早产和畸胎等。
此外，化学物质还可引起哺乳期毒性（通过乳汁致婴 儿中毒，如铅中毒）和通过对中枢神经系统及全身机能状 态的毒作用来影响生殖过程。
三、化学物质影响生殖发育毒性的途径及特点 影响途径
❖直接作用于生殖发育过程； ❖通过对内分泌系统特别对性腺的作用，产生间接影响； ❖作用于神经系统，影响内分泌功能，间接影响生殖发育
人们对先天缺陷和环境关系的认识是经历了一系列重大人 间悲剧后才得到的。大量资料表明许多生殖内分泌系统 疾病也与化学物质有关。
❖ 1945年美国在日本广岛和长崎爆炸原子弹，受到核辐射 的胎儿出生后患小头畸形和智力低下，婴儿一年内死亡 率达25%。
❖ 1950年美国霍普金斯大学医院发现，怀孕期间服用黄体 酮，先后有600多名女婴出现生殖器男性化畸形；
其它阶段接触发育毒物可能带来的损害：
4）出生后的发育期 人在出生前后从母乳、空气、食物、环境、玩具中摄入
铅，会引起幼儿认知功能发育和学习障碍。 父母亲吸烟（烟碱）可改变胎儿中枢神经系统烟碱受体
两代生殖发育毒性试验方法
两代生殖发育毒性试验方法Two-Generation Reproductive Toxicity Study1范围本规范规定了两代生殖发育毒性试验基本原则，试验方法和技术要求。
本规范用于检测化妆品原料的生殖发育毒性。
2试验目的提供关于受试物产前、产后暴露对雌性、雄性动物生殖功能、生育力及子代发育影响的确切信息。
3定义3.1生殖毒性Reproduction toxicity对后代产生有害作用，并损伤雄性和雌性的生殖功能和生殖能力。
3.2发育毒性Developmental toxicity生殖毒性的表现，具体表现为后代在产前、围产期、产后发生的结构和功能紊乱。
3.3母体毒性Maternal toxicity受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、毒性反应、甚至死亡。
3.4未观察到有害作用剂量NOAEL通过动物试验，以现有的技术手段和检测指标未观察到任何与受试物相关的毒性作用的最大剂量。
3.5观察到有害作用的最低剂量LOAEL在规定的条件下，受试物引起实验动物组织形态、功能、生长发育等有害效应的最小作用剂量。
4试验的基本原则通过对实验动物以受试物暴露，考察其对雄性和雌性动物生殖功能、生育力及生殖系统形态的影响。
若该暴露（直接或间接）持续至子代，则还可以继续考察受试物对子代发育，甚至子代生殖功能和生育力的影响。
5受试物配制化妆品生殖发育毒性试验一般采用经口途径给予受试物，但基于人的可能暴露途径或受试物的特性而选择经皮或吸入也是合适的。
溶媒对照应采用与之相同的给予途径。
若设置阳性对照，其处理方式可以不同于受试物处理组。
一般情况下首选水作为溶媒，可以是水溶液也可以是混悬液，其次可以选择玉米油作为溶媒配制成乳浊液，也可以将其与水混合配制成油溶液。
使用水以外的其它溶媒，应阐明其毒性并保证所配制溶液的稳定性。
其它应纳入考虑的因素包括：溶媒是否影响受试物化学特征继而改变受试物毒性；溶媒是否影响受试物的吸收、代谢、分布和蓄积；溶媒是否影响动物食物和饮水摄入继而影响营养状况；溶媒本身是否有潜在毒性。
生殖与发育毒性-研究结果综合评价相关性指导原则-美国
生殖与发育毒性-研究结果综合评价相关性指导原则Guidance for Industry Reproductive and Developmental Toxicities - Integrating Study Resultsto Assess Concerns美国FDA的CDER于2011年9月颁布I. 前言本指导原则描述了当非临床研究结果确定有毒性但无法获得充分的人类资料时，与药物或生物制品暴露相关的可能的人体生殖或发育风险评估的方法。
本指导原则用于NDA和生物制品许可申请（BLA）。
此处的建议也可有助于保证CDER审评人员之间对生殖与发育毒性资料审评的一致性。
本指导原则（1）未对说明书或毒性信息在产品标准中所放位置给予详细建议（关于说明书的信息参见21 CFR 201.57）；或（2）未讨论临床资料或对非临床和临床资料进行综合评价。
FDA指导原则文件（包括本指导原则）不属于法律强制性要求，而只是阐述了本机构对某主题的目前看法，只能认为是一种建议，除非已经在特殊药政法规或法令要求中进行了指明。
本机构指导原则中所使用的词汇“应该（should）”的意思是建议或推荐，而不是要求。
II. 背景此处所介绍的对非临床生殖与发育毒性资料进行评估的方法包括对各种不同类型的非临床信息的综合评价和仔细考虑：生殖毒性；一般毒性；毒代和药代信息，包括吸收、分布、代谢和排泄资料。
当出现毒性结果且重点评估药物引起不良的人类发育或生殖结果风险的可能性时，采用本方法。
本方法包括当未进行研究时或当未在相关的模型系统或合适的剂量范围下进行研究时的计算法。
此处所描述的基本原则（即对可获得资料的综合分析）将代表性地与药物和生物制品相关，虽然有些方面可能不适用于生物制品，由于可能无法获得本指导原则中所考虑的所有因素的资料（如，种属间一致性、剂量反应关系、代谢、相对暴露倍数（动物：人）>25）。
对于某些肿瘤药物（如细胞毒类），本指导原则的某些方面可能并不适用，因为患者可能给予最大耐受量（MTD）。
毒理学评价实验的主要内容
毒理学评价实验的主要内容毒理学评价实验是评估物质对生物体可能产生的不良影响的重要手段。
以下是毒理学评价实验的主要内容：1.受试物的形态学观察在毒理学评价实验中，首先需要对受试物进行形态学观察，以了解其外观、颜色、气味、结晶等物理性质。
此外，还需观察受试物的稳定性、溶解度等化学性质，以便更好地了解其可能对生物体产生的影响。
2.急性毒性试验急性毒性试验是评估受试物在短期大量接触后对生物体产生的影响。
通过测定受试物对生物体产生毒性效应的剂量和时间关系，为后续的毒性试验提供参考。
3.遗传毒性试验遗传毒性试验是评估受试物对生物体遗传物质的影响。
通过检测受试物对生物体基因突变、染色体畸变等的影响，评估其潜在的致癌性。
4.发育毒性试验发育毒性试验是评估受试物对胎儿或婴儿生长发育的影响。
通过观察受试物对妊娠期妇女、胎儿及婴儿生长发育的影响，评估其安全性。
5.慢性毒性试验慢性毒性试验是评估受试物在长期接触后对生物体的影响。
通过观察受试物对生物体脏器功能、生理生化指标等的影响，评估其长期使用的安全性。
6.致癌性试验致癌性试验是评估受试物是否具有致癌性的实验。
通过观察受试物对生物体肿瘤发生的影响，评估其致癌风险。
7.免疫毒性试验免疫毒性试验是评估受试物对生物体免疫系统的影响。
通过检测免疫器官、细胞数量、功能等指标，评估受试物对免疫系统的损害程度。
8.生殖毒性试验生殖毒性试验是评估受试物对雄性或雌性生殖系统的影响。
通过观察受试物对性成熟、繁殖能力等的影响，评估其对生殖系统的损害程度。
综上所述，毒理学评价实验的主要内容包括受试物的形态学观察、急性毒性试验、遗传毒性试验、发育毒性试验、慢性毒性试验、致癌性试验、免疫毒性试验以及生殖毒性试验等方面。
通过对这些方面的综合评估，可以全面了解受试物对生物体的影响，为产品的安全性评价提供科学依据。
毒理08化学毒物生殖和发育毒性作用
生殖毒性试验也称繁殖试验，可以全面反映外源化学物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的损害作用。
1.试验方法原则 大鼠，一般设三个剂量组及对照组。最高剂量，稍高于亚慢性最大无作用剂量，或LD50的1/10左右。每组雌雄各20只。
3.观察指标
（1）受孕率：
（2）正常分娩率：
（3）幼仔出生存活率：
（4）幼仔哺乳成活率：
三、发育毒性及其评介
（一）致畸作用的毒理学特点
1.致畸作用和母体毒性
母体毒性作用是指外源化学物在一定剂量下，对受孕母体产生的损害作用。具体表现包括体重减轻、功能异常，出现某些毒性表现、死亡。
A. 1～3周
B. 3～8周
C. 5～8周
D. 4～10周
E. 5～10周
[答疑编号111080104：针对该题提问]
『正确答案』B
B1型题
（1～2题共用备选答案）
A.生长迟缓
B.受精卵死亡
C.致畸作用
『正确答案』A
3.致畸试验首选的实验动物是（ ）
A.大鼠
B.小鼠
C.豚鼠
D.家兔
E.狗
[答疑编号111080103：针对该题提问]
『正确答案』A
A2型题
1.器官形成期这一阶段对致畸作用的敏感性最强，人体主要器官系统的形成期是受精后第几周（ ）
①具有致畸作用，但无母体毒性出现；②出现致畸作用的同时也表现母体毒性；③仅具有母体毒性，但不具有致畸作用。
2.致畸作用的毒理学特点
（1）器官发生期的胚胎对致畸物最为敏感
第08章-食品中化学物质生殖发育毒性和致畸作用及评价
2008年，解放军174医院生殖中心调查显示，四成男性 精子数量、质量不正常。
我国人口和计划生育委员会科学技术研究所，整理分 析了北京、上海等39个市、县的数据，结果显示，近 25年来，我国男性的精液质量正以每年1%的速度下降， 精子数量降幅达40%以上；且工业化程度越高，该地 区的精子质量降低越明显。
1966-1972年美国孕妇服用己烯雌酚，女性后代青春期阴 道癌，男性后代成年后性功能低下、精子数下降。
反应停 thalidomide
第二节 发育毒性和致畸性 一、基本概念
1．发育毒性(developmental toxicity)
指出生前经父体和(或)母体接触外源性理化因素引 起的在子代到达成体之前出现的有害作用。
大鼠器官发生期约为9-17天；小鼠器官发生期为 7.5-16天；家兔为11-20天 ；人为3-12周。
2．剂量-效应关系较为复杂
剂量增加，毒性作用增强，但与致畸性不成一定的比例。 胚胎致死作用增强，致畸作用降低。
某种致畸物可以引起一定的畸形，但在给予更高的剂量， 并不出现同一类型的畸形。 例如环磷酰胺：低剂量——多趾，中等剂量——肢长骨缩 短，高剂量——缺肢或无肢。
动物选择 剂量分组 动物交配处理 胎仔检查 数据处理 结果评定
1．传统致畸试验
（1）动物选择 食性和对受试物代谢过程与人类接近； 体型小，驯服，容易饲养、繁殖及价廉； 妊娠过程较短、每窝产仔数较多、胎盘构造及厚
度与人类接近。 大鼠（12-20只/组）
1．传统致畸试验
（2）剂量分组 先进行预试验，找出引起母体中毒的剂量； 最高剂量组，可以引起母体轻度中毒，即进食量
F３a
F３b
3．繁殖毒性试验观察指标
受孕率(%)：
生殖毒性与发育毒性
从着床至哺乳期终止[大、小 鼠：妊娠 15 天-分娩后 21 （28 天）]
处 死 孕中期（13-15 天）（部分动物出生 分娩前一天
亲代：F1 代断乳时
时间 或断乳）
子代：断乳时
观 察 项 目
亲代动物：一般情况，交配行为， 孕鼠：一般情况， 孕鼠一般情况，受孕情况
雄鼠精子检查，生殖器官病理改变 受孕情况
发育生物体死亡 结构异常 生长、发育迟缓 功能缺陷
• 对胎盘的毒作用
经胎盘致癌作用(transplacental carcinogenesis)
致畸作用 （Terotogenicity)
外源化学物作用于妊娠母体， 干扰胚胎及胎儿的正常发育过程， 使胎儿出现形态结构及功能异常．
已知的人类致畸物
电离辐射 放射治疗 放射性碘 原子武器
学物，对生育力及早期胚胎发育的 接触化学物，对动 触化学物，对母鼠妊娠，仔鼠
影响
物 妊 娠 ， 胎 体 死 生长发育、形态结构及神经行
亡、生长及结构异 为功能的影响
常的影响
动物 首选大鼠，也可用小鼠
大鼠、小鼠、家兔 大鼠、小鼠、家兔
染 毒 期
雄鼠：交配前 28-80 天（精子发生 胎鼠器官形成期 期） 雌鼠：交配前 14 天（卵子发生期） 到着床（多数器官形成期）
一代生殖毒性试验
两代生殖毒性试验
7
器官形成 10-56 6-15 6-15 4-14 6-18
平均妊娠期 270 21-22 19-20 16 32
胎儿发育过程中对发育缺陷的敏感期
大鼠胚胎各器官的特殊敏感期
剂量增加与毒作用表现的关系
三段生殖毒性试验
一般生殖毒性试验
致畸敏感期
围生期毒性试验
生殖发育毒性试验(食品安全国家标准)
食品安全国家标准生殖发育毒性试验１范围本标准规定了生殖发育毒性试验的试验方法和技术要求。
本标准适用于评价受试物的生殖发育毒性作用。
2术语和定义2.1生殖毒性生殖毒性指对雄性和雌性生殖功能或能力的损害和对后代的有害影响。
生殖毒性既可发生于妊娠期，也可发生于妊前期和哺乳期。
表现为外源化学物对生殖过程的影响，例如生殖器官及内分泌系统的变化，对性周期和性行为的影响，以及对生育力和妊娠结局的影响等。
2.2发育毒性个体在出生前暴露于受试物、发育成为成体之前（包括胚期、胎期以及出生后）出现的有害作用，表现为发育生物体的结构异常、生长改变、功能缺陷和死亡。
2.3母体毒性受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征，甚至死亡。
2.4功能发育毒性经母体给予受试物后，其子代从出生后直到性成熟期间出现的机体或器官功能运用能力的改变或延迟，包括器官系统、生化、免疫等功能的变化。
其中功能的改变或延迟往往要在出生后经过相当时间才能判断，如听力或视力异常、行为发育迟缓等。
3 试验目的和原理本实验包括三代（F0、F1和F2代）。
F0和F1代给予受试物，观察生殖毒性，F2代观察功能发育毒性。
提供关于受试物对雌性和雄性动物生殖发育功能影响：如性腺功能、交配行为、受孕、分娩、哺乳、断乳以及子代的生长发育和神经行为情况等。
毒性作用主要包括子代出生后死亡的增加，生长与发育的改变，子代的功能缺陷（包括神经行为、生理发育）和生殖异常等。
4 试验方法4.1受试物受试物应首先使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理。
将受试物掺入饲料、饮用水或灌胃给予。
4.2实验动物4.2.1动物选择实验动物的选择应符合国家标准和有关规定。
选择已有资料证明对受试物敏感的动物物种和品系，一般啮齿类动物首选大鼠，避免选用生殖率低或发育缺陷发生率高的品系。
为了正确地评价受试物对动物生殖和发育能力的影响，两种性别的动物都应使用。
化学物的生殖发育毒性及其评价
短
•概述
肢
•概念
•特点
畸
•损害
形
•机理
•方法
|
海
豹
肢
9
先天畸形的危害
内容
•概述
❖在人类疾病谱中，先天缺陷致寿命缩短
•概念 分别是肿瘤和心血管病的8倍和5倍。
•特点
•损害 ❖先天畸形是导致婴幼儿死亡的重要原因
•机理 之一。在我国婴幼儿死亡原因中，先天畸
•方法
形占第二位，而在发达国家和我国的一些
大城市已占首位。
•机理 •方法
• 致畸形
• 对孕后期与哺乳的不良反应
9 3、发育毒性 (developmental toxicity )
内容
外源性化学物对发育生物体从受精卵直到出
•概述 生后性功能成熟整个发育过程产生的毒作用，
•概念 •特点
包括胚胎毒性(embryonic toxicity)、胎儿毒性
•损害 (fetal toxicity)和行为致畸作用(behavioral
农药敌枯双
反应停
豚鼠 家兔和仓鼠 豚鼠与家兔 仓鼠
大鼠 人群调查中尚未证实 小鼠和家兔
人类以及其它灵长类动物
9
内容
•概述 畸 •概念 形 •特点 率
•损害
•机理 %
•方法
大鼠怀孕天数 大鼠胚胎各器官致畸敏感期
9
内容
每
•概述 •概念
窝
•特点
反
•损害
应
•机理
率
•方法
%
胚胎毒性剂量范围 发育毒物不同类型的剂量—反应模式
•概念
儿的有些损伤会在下一代表现为某些系
•特点
统功能异常或疾病。
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（2）试验方法
①三代两窝生殖试验
大鼠断奶或出生8周后，开始喂受试物或以其 它方式与受试物接触，共进行8～12周，即直到 性发育成熟，相当出生后4个月左右。每周至少 称体重一次，记录进食量并观察有无中毒症状或 死亡。
亲代动物（F0）所生仔鼠为第一代（F1）。出生后应检查每窝幼仔数、死 亡数以及肉眼可见幼仔畸形。出生后第4天和第21天逐个称取重量，仔鼠 断奶后，母鼠休息10天，再与雄鼠交配一次，并生出第二窝仔鼠，亲代共 生出仔鼠两窝，分别为F1a和F1b。F1b出生后，将雄性亲鼠淘汰，雌性亲 鼠继续喂受试物，直至F1b出生后21天断奶为止。F1a断奶后观察其发育情 况，不再喂受试物。F1b断奶后，继续接触受试物8 ～12周，直到性发育 成熟，选出雌雄各16～20只，按前法进行交配。F1b所产第一窝幼仔为F2a， F2a断奶后，其母鼠F1b休息10天，再次交配，所生幼仔为F2b，F2b断奶后， 将F1b淘汰。F2b交配处理方法与F1b相同。但F2b也可只交配一次，所产仔 鼠为F3a，不再进行第二次交配，试验结束。
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生殖和发育毒性试验与评定
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一、 生殖毒性试验与评定 二、发育毒性试验与评定
一、生殖毒性试验与评定
外来化合物对生殖过程的损害作用，即生殖毒性。 生殖毒性可发生于妊娠期，也可发生于妊娠前期和 哺乳期。 生殖毒性试验主要研究外来化合物对生殖细胞发生、 卵细胞受精、胚胎形成、妊娠、分娩和哺乳过程的 损害及其评定。过去也称为繁殖试验。
————————
×100%
妊娠动物数
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3．幼仔出生存活率反映雌性动物分娩过程是 否正常，如分娩过程受到影响，则幼仔往往在 出生4天内死亡。
出生后4天存活幼仔数
幼仔出生存活率= ———————————×100%
分娩时出生幼仔数
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4．幼仔哺乳成活率反映雌性动物授乳哺育幼 仔的能力。
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生殖毒性试验的目的在于了解外源化学物及其代 谢产物对机体成年哺乳动物的生殖功能和生育力 的影响。
多代繁殖试验在整个生命期内接触受试化学物， 更符合人类实际生活中长期低剂量接触食品添加 剂、微量重金属、农药及环境污染物的情况。
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（1）试验方法原则
生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家 兔。大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。 一般设三个剂量组，另设对照组。
F0（断奶或出生８周）
第一次交配 第二次交配
给予受试物8到12周
F１a
观察三个月，喂饲普通 饲料，观察其生长发育
情况
F２a
观察三个月，喂饲普通饲 料，观察其生长发育情况
F１b
断乳后给予受试 物８到１２周
F２b 断乳后给予受试
物８到１２周
F３a
F３b
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2．两代一窝和一代一窝生殖试验
近年来许多国家与机构多规定采用两代一窝或一代一 窝试验法。 两代一窝生殖试验法基本程序与三代两窝试验法相同， 但只进行到第二代F2，每代只交配一窝。
两代一窝生殖试验
出生第8周给予受试物（F0） 第16~19周 雌雄交配 F1（每窝选留幼仔８只，雌雄各半）
断奶，给予受试物 F１交配
F2出生，每窝留８只幼仔 F2断奶，检查发育情况
21天断奶幼仔存活数
幼仔哺乳成活率= —————————×100%
出生后4天幼仔存活数
（四）结果判定
将试验组动物各项观察指标统计结果与对照组动 物进行比较，如试验动物在交配、妊娠、幼仔存 活、幼仔发育（哺育）等方面受到影响，则说明 受试物对动物繁殖功能有损害作用。
二、发育毒性试验与评定
1. 基本概念 发育毒性指出生前经父体和（或）母体接触外源 理化因素引起的在子代到达成体之前内出现的有 害作用，包括结构畸形、生长迟缓、功能障碍及 死亡。 能造成发育毒性的物质称为发育毒物。
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③功能不全或异常 即胎仔的生化、生理、代谢、免疫、神经活动及 行为的缺陷或异常。功能不全或异常往往在出生 后一定时间才被发现，因为正常情况下，有些功 能在出生后一定时间才发育完全。
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最高剂量组剂动物出现轻度中毒，但不出现死亡或 死亡率不超过10%，也不能完全丧失生育能力。 低剂量组的亲代动物不应观察到任何中毒症状。 另设中间剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。 中间剂量与高剂量和低剂量应呈等比级数。
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（三）观察指标
在上述各种生殖毒性试验中，根据哺乳动物全部 生育繁殖过程，可观察下列4个指标： 1．受孕率反映雌性动物生育能力以及雌性动物受 孕情况。
妊娠雌性动物数
受孕率= ————————×100%
交配雌性动物数
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2．正常分娩率反映雌性动物妊娠过程是否受到影 响。
正常分娩率=
正常分娩雌性动物数
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将雌雄亲代动物（F0）同笼交配，雌雄比 例为1︰1或2︰1，直到受孕或进行3周为止。 雌鼠受孕后即单笼饲养，继续接触受试物。交 配3周后，如仍未受孕，则停止交配，并进行 生殖器官病理学检查。
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确定是否受孕的方法是每日清晨进行雌性动物阴道涂片， 检查有无精子；亦可检查阴道有无阴栓出现，以确定受精 日期。小鼠阴栓可在阴道口存留较长时间，但在大鼠极易 脱落，次晨检查时往往在笼下粪便盘中检出。发现阴栓或 检出精子，即为受孕0日，也有作为受孕第1日。
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畸形：指出生前因素引起发育生物体的严重的解剖 学上形态结构的缺陷。 致畸性和致畸作用：均指在妊娠期（出生前）接触 外源性理化因素引起后代结构畸形的特性或作用。 变异：是由遗传和遗传外因素控制的外观变化，或 由于分化改变而引起的中途歧异。
2. 发育毒性的表现
① 生长迟缓 即胚胎与胎仔的发育过程在外来化合物影响下，较正常的 发育过程缓慢。 ② 致畸作用 由于外来化合物干扰，活产胎仔胎儿出生时，某种器官表 现形态结构异常。致畸作用所表现的形态结构异常，在出 生后立即可被发现。