小鼠脐间带充质干细胞培养方法

小鼠脐间带充质干细胞培养方法

引言

充质干细胞（me se nc h ym al st em ce ll s，M SC s）是一类具有多向分化潜能的多能干细胞，具有广泛的应用前景。在生物医学领域，小鼠脐间带充质干细胞是一种重要的来源之一。本文将介绍小鼠脐间带充质干细胞的培养方法，帮助研究人员更好地利用这一珍贵的细胞资源。

原料与试剂准备

1.小鼠脐带组织

2.DM EM/F12培养基

3.胎牛血清（F BS）

4.细胞培养袋

5.1×PB S缓冲液

步骤

1.小鼠脐带的处理

（1）准备一个无菌操作台，并在工作区上喷洒酒精消毒剂，手套等工具也需要经过灭菌处理。

（2）取出小鼠脐带组织，置于无菌的1×P BS缓冲液中，用剪刀剪碎细胞片段。

（3）将小鼠脐带组织片段转移到细胞培养袋中。

（4）加入适量的DME M/F12培养基，保证组织片段被完全浸润。

（5）将细胞培养袋密封，并置于37°C恒温培养箱中，进行消化和悬浮培养，时间约为4-6小时。

2.细胞的收获和培养

（1）将消化后的细胞悬液通过100μm的细胞滤网过滤，去除大颗粒

残渣。

（2）将滤液离心，去除上清液，沉淀的细胞用DM EM/F12培养基洗涤。

（3）将洗涤后的细胞沉淀用适量的D MEM/F12培养基重新悬浮。

（4）将细胞悬液转移到细胞培养瓶中，每瓶加入适量的培养基和10%

的F BS。

（5）将细胞培养瓶放置于37°C恒温培养箱中，进行培养。

（6）每2-3天更换一次培养基，保持细胞的健康生长。

3.细胞的传代与冻存

（1）当细胞达到80-90%的密度时，将培养瓶内的细胞用1×P BS缓

冲液洗涤。

（2）用胰酶对细胞进行消化，停止细胞的生长。

（3）加入适量的DME M/F12培养基，将细胞悬液转移到新的细胞培养

瓶中。

（4）将细胞培养瓶放置于恒温培养箱中继续培养。

4.脐带间充质干细胞的鉴定

（1）使用流式细胞仪对培养的小鼠脐带间充质干细胞进行免疫鉴定。

（2）选择适当的免疫标记物，如CD44，C D90，CD105和CD34等进

行细胞表面标记。

（3）根据免疫标记物的阳性率来评估细胞的纯度和有效性。

结论

小鼠脐间带充质干细胞是一种重要的研究资源，在生物医学领域具有

广泛的应用前景。本文介绍了小鼠脐间带充质干细胞的培养方法，从样品

处理、细胞的收获和培养、细胞的传代与冻存、以及细胞的鉴定等方面进

行了详细的介绍。希望这一方法能够帮助研究人员更好地利用小鼠脐间带

充质干细胞，推动生物医学的发展与进步。