43特殊变异菌的筛选方法
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
营养缺陷型：经诱变产生的一些合成能力出现缺陷，而必 须在培养基内加入相应有机养分才能正常生长的变异菌 株。如：lys -， bio-
野生型：自然界分离到的任何微生物，在其发生营养缺陷 突变前的原始菌株，为该微生物的野生型。 如：lys + ; bio + ;
原养型 ：指营养缺陷型突变菌株回复突变或重组后产生的 菌株，与野生型的表型相同。
C B
D E
A H
F G
★缺陷型的应用
▪ 作为菌株的遗传标记：进行基因工程、诱变 育种、
研究代谢过程时用作亲本标记；
▪作为生产菌种：aa、核苷酸等生产菌种； ▪作为aa、维生素、碱基的测定菌株。
缺陷型的检出：
①逐个检出法：
②影印平板培养法
③夹层培养法
缺陷型的鉴定：
①生长谱法
• 方法简便； • 回变和污染不影响 结果
• 测定物质可为粉末 或纸片
测定一般应分两阶段：
➢ 第一阶段：测定是哪类物质的缺陷 型；
➢ 第二节段：根据第一阶段确定的范 围，进一步确定是哪种具体化合物 的缺陷型；
组合营养物法： 步骤（以氨基酸缺陷型的鉴定为例）：
★营养缺陷型诱变筛选步骤及方法 诱变处理 auxo的浓缩 auxo的检出 auxo的鉴定
缺陷型的浓缩：
①抗生素法
原理： 青霉素、制霉 菌素等抗生素作用于生 长着的微生物细胞，对 休止态细胞无作用。
方法：将菌培养在含抗 生素的MM基中
②菌丝过滤法
适用于：丝状（放线菌、 霉菌）
原理：基本培养基上只有 发育成菌丝；auxo孢子可 通过滤膜，野生型菌丝不 能通过。
a. 将多种营养因子编组；
b. 将组合液的纸片放在涂菌的基本培养基上培养；
c. 结果分析；
营养因子分组编排时注意；
1）每组内无重复的营
如： 一组：1 2 3 4 5 养因子 二组：2 6 7 8 9 2）每组中应包含只出 三组：3 7 10 11 12 现一次的因子 四组：4 8 11 13 14 3）每组中其他因子应
★与筛选营养缺陷型突变株有关的三类培养基
基本培养基（MM）[-]：凡是能满足野生型菌株 营养要求的最低成分的合成培养基。
完全培养基（CM）[+]：满足一切营养缺陷型菌 株生长的天然或半合成培养基。
补充培养基（SM）[x]：在MM中有针对性地加 入一或几种营养成分以满足相应营养缺陷型 菌株生长的合成培养基。
五组：5 9 12 14 15 分别出现二次
一组：1 2 3 4 5 二组：2 6 7 8 9 三组：3 7 10 11 12 四组：4 8 11 13 14 五组：5 9 来自百度文库2 14 15
②组合补充培养基法：
–将待测的菌点种到各种补充培养基上，逐个分析各菌的 缺陷类型，或快速分离出所需缺陷类型的菌株。
4.3 特殊变异菌的筛选方法：
4.3.2抗药性突变株的筛选
方法：梯度平板法（gradient plate）
抗药性突变株的应用： 作为菌株的遗传标记 作为生产菌种（结构类似物抗性变异株）
4.3.3抗生素抗性变异株的筛选：
4.3.4 营养缺陷型(auxotroph)的筛选
★与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体：
野生型：自然界分离到的任何微生物，在其发生营养缺陷 突变前的原始菌株，为该微生物的野生型。 如：lys + ; bio + ;
原养型 ：指营养缺陷型突变菌株回复突变或重组后产生的 菌株，与野生型的表型相同。
C B
D E
A H
F G
★缺陷型的应用
▪ 作为菌株的遗传标记：进行基因工程、诱变 育种、
研究代谢过程时用作亲本标记；
▪作为生产菌种：aa、核苷酸等生产菌种； ▪作为aa、维生素、碱基的测定菌株。
缺陷型的检出：
①逐个检出法：
②影印平板培养法
③夹层培养法
缺陷型的鉴定：
①生长谱法
• 方法简便； • 回变和污染不影响 结果
• 测定物质可为粉末 或纸片
测定一般应分两阶段：
➢ 第一阶段：测定是哪类物质的缺陷 型；
➢ 第二节段：根据第一阶段确定的范 围，进一步确定是哪种具体化合物 的缺陷型；
组合营养物法： 步骤（以氨基酸缺陷型的鉴定为例）：
★营养缺陷型诱变筛选步骤及方法 诱变处理 auxo的浓缩 auxo的检出 auxo的鉴定
缺陷型的浓缩：
①抗生素法
原理： 青霉素、制霉 菌素等抗生素作用于生 长着的微生物细胞，对 休止态细胞无作用。
方法：将菌培养在含抗 生素的MM基中
②菌丝过滤法
适用于：丝状（放线菌、 霉菌）
原理：基本培养基上只有 发育成菌丝；auxo孢子可 通过滤膜，野生型菌丝不 能通过。
a. 将多种营养因子编组；
b. 将组合液的纸片放在涂菌的基本培养基上培养；
c. 结果分析；
营养因子分组编排时注意；
1）每组内无重复的营
如： 一组：1 2 3 4 5 养因子 二组：2 6 7 8 9 2）每组中应包含只出 三组：3 7 10 11 12 现一次的因子 四组：4 8 11 13 14 3）每组中其他因子应
★与筛选营养缺陷型突变株有关的三类培养基
基本培养基（MM）[-]：凡是能满足野生型菌株 营养要求的最低成分的合成培养基。
完全培养基（CM）[+]：满足一切营养缺陷型菌 株生长的天然或半合成培养基。
补充培养基（SM）[x]：在MM中有针对性地加 入一或几种营养成分以满足相应营养缺陷型 菌株生长的合成培养基。
五组：5 9 12 14 15 分别出现二次
一组：1 2 3 4 5 二组：2 6 7 8 9 三组：3 7 10 11 12 四组：4 8 11 13 14 五组：5 9 来自百度文库2 14 15
②组合补充培养基法：
–将待测的菌点种到各种补充培养基上，逐个分析各菌的 缺陷类型，或快速分离出所需缺陷类型的菌株。
4.3 特殊变异菌的筛选方法：
4.3.2抗药性突变株的筛选
方法：梯度平板法（gradient plate）
抗药性突变株的应用： 作为菌株的遗传标记 作为生产菌种（结构类似物抗性变异株）
4.3.3抗生素抗性变异株的筛选：
4.3.4 营养缺陷型(auxotroph)的筛选
★与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体：