流式细胞仪(Flow Cytometry) 原理简介
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总蛋白质 蛋白质分子间相互作用 抗原 细胞骨架成分 受体
功能属性： 酶活性 细胞凋亡 细胞坏死 细胞活性 氢硫基 凝血素结合位点
经验之谈：凡细胞内能进 行荧光标记的成分或者某 种变化，都可用流式细胞 仪进行检测。
药物动力学 ……………………..
细胞数
细胞周期分析
G1 S phase M
DNA 含量 G0/1
型号：BD FACSVantage SE 参数：分析10，000个/ 秒，分选7，000个/秒； 激光：488nm，UV；四 色荧光通道。 地点：1406 联系方式：电话 64839306 或 ： 64862503 电子邮件 lcc@moon.ibp.ac.cn
可以揭示细胞内部结构信息
流式细胞仪 多参数 量化的分布
蛋白胶 单参数 平均值
容易检测各个参数间的相关性
不容易
功能特点
（1）多参数定量分析每一个细胞；
（2）细胞分选； 高纯度：99%以上； 可分析小于1/10000比例的稀有细胞群； 单细胞克隆等。
（3）高通量（分析分选）． 分析150，000个/ 秒 分选100，000个/秒
G1
G2
1 DNA含量
2
1
Sቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
G2/M
细胞周期时相
染色体组型测定
2
1
白血病患者 1/3
4
5
3
Hoechst 33258 （AT）
6 X 13 8 Y 18 21 20 19 Ph 22
14 15 16 17
7 recip 9-22 9-12
Chromomycin A3
（GC）
生物物理所现有流式细胞仪
●
FCM的定义
流式细胞仪是指，使细胞（或其 他粒子）以单个方式依次高速通过激 发光束，采集细胞被光照时产生的各 种信号，对信号进行处理，幵对各参 数进行关联分析的一种仪器。
对比
流式细胞仪是一种特殊的显微镜
流式细胞仪
流动的细胞
数量大 高速分选
显微镜
静止的细胞样本
数量少 样本难以再利用
细胞群体特征量分布
侧向散射光(linear)
CD14 PE (log) 前向散射光 (linear) CD45 FITC (log)
R1=单核细胞 (CD14+ve) R2=淋巴细胞 (CD45>单核细胞) R3=中性粒细胞 (CD45<单核细胞)
细胞分选
流式细胞仪的测量对象
大小 悬浮在溶液中的相互离散颗粒。 大小范围：0.2uM-300uM。 对象类型 细胞类型： （1） 高等真核细胞； （2）酵母； （3）细菌； （4）多细胞的聚集体，如胰岛等。 非生命颗粒： 细胞核、染色体、和其它细胞器以及乳化微球等。
流式细胞仪（Flow Cytometer) 基础简介
中科院生物物理研究所 中国科学院蛋白质科学研究平台 2005年3月 刘春春
主要内容
流式细胞仪概要 流式细胞仪的工作原理 流式细胞仪测量的对象
什么是流式细胞仪
●
流式细胞仪实物
BD-Calibur
BD FACSVantage
流式细胞仪基本结构
非荧光信号
颗粒度
细胞大小
散射光信号区分裂解后的外周血细胞群
荧光信号
荧光染料被激发而发射的光信号。 定量染色 荧光信号大小 被标记组分含量的定量
多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量
PI＋Annexin－V细胞凋亡检测
DNA 含 量 -PI Annexin-V
PE＋FITC荧光标记检测外周 血裂解后细胞群
应用领域 疾病诊断 生物学基础研究 环境监测 海洋微生物研究 农业领域应用 等等
70年代美国为攻克癌症 而建造。 厂商：
Becton-Dickson
Coulter-Beckman DOCytomation
已成为一个几十亿美金 的产业
流式细胞仪工作原理
液流与光源
流动室
流体动力学聚焦
激光聚焦
探测光路聚焦
流式细胞仪能够检测的细胞属性和组分举例 1）不需染色： 大小，胞浆颗粒度，细胞自发荧光，色素，细胞精确计数。 2）需染色或标记： 细胞组分： 细胞膜：流动性，通透性，膜电位 细胞内离子：H+（可检测PH值），Na+，K+，Ca2+（结合的和 自由 的）。
核酸：DNA含量，DNA成分，DNA合成，RNA，染色质结构等
光信号收集
光信号分离，导向，各探测通道PMT 接收幵转化为电信号。
激光束
侧向散射 光，荧光
1
二色镜 2
3
细胞
前向 散射 光
收集透镜
带通滤波片 光电倍增管
数据处理
光信号
FSC SSC FL1 FL2 FL3
电信号
对数 线性 线性 线性 对数
脉冲处理，模数转换
（面积，峰高，宽度）
记录数据，显示结果
流式细胞仪产生的信号
功能属性： 酶活性 细胞凋亡 细胞坏死 细胞活性 氢硫基 凝血素结合位点
经验之谈：凡细胞内能进 行荧光标记的成分或者某 种变化，都可用流式细胞 仪进行检测。
药物动力学 ……………………..
细胞数
细胞周期分析
G1 S phase M
DNA 含量 G0/1
型号：BD FACSVantage SE 参数：分析10，000个/ 秒，分选7，000个/秒； 激光：488nm，UV；四 色荧光通道。 地点：1406 联系方式：电话 64839306 或 ： 64862503 电子邮件 lcc@moon.ibp.ac.cn
可以揭示细胞内部结构信息
流式细胞仪 多参数 量化的分布
蛋白胶 单参数 平均值
容易检测各个参数间的相关性
不容易
功能特点
（1）多参数定量分析每一个细胞；
（2）细胞分选； 高纯度：99%以上； 可分析小于1/10000比例的稀有细胞群； 单细胞克隆等。
（3）高通量（分析分选）． 分析150，000个/ 秒 分选100，000个/秒
G1
G2
1 DNA含量
2
1
Sቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
G2/M
细胞周期时相
染色体组型测定
2
1
白血病患者 1/3
4
5
3
Hoechst 33258 （AT）
6 X 13 8 Y 18 21 20 19 Ph 22
14 15 16 17
7 recip 9-22 9-12
Chromomycin A3
（GC）
生物物理所现有流式细胞仪
●
FCM的定义
流式细胞仪是指，使细胞（或其 他粒子）以单个方式依次高速通过激 发光束，采集细胞被光照时产生的各 种信号，对信号进行处理，幵对各参 数进行关联分析的一种仪器。
对比
流式细胞仪是一种特殊的显微镜
流式细胞仪
流动的细胞
数量大 高速分选
显微镜
静止的细胞样本
数量少 样本难以再利用
细胞群体特征量分布
侧向散射光(linear)
CD14 PE (log) 前向散射光 (linear) CD45 FITC (log)
R1=单核细胞 (CD14+ve) R2=淋巴细胞 (CD45>单核细胞) R3=中性粒细胞 (CD45<单核细胞)
细胞分选
流式细胞仪的测量对象
大小 悬浮在溶液中的相互离散颗粒。 大小范围：0.2uM-300uM。 对象类型 细胞类型： （1） 高等真核细胞； （2）酵母； （3）细菌； （4）多细胞的聚集体，如胰岛等。 非生命颗粒： 细胞核、染色体、和其它细胞器以及乳化微球等。
流式细胞仪（Flow Cytometer) 基础简介
中科院生物物理研究所 中国科学院蛋白质科学研究平台 2005年3月 刘春春
主要内容
流式细胞仪概要 流式细胞仪的工作原理 流式细胞仪测量的对象
什么是流式细胞仪
●
流式细胞仪实物
BD-Calibur
BD FACSVantage
流式细胞仪基本结构
非荧光信号
颗粒度
细胞大小
散射光信号区分裂解后的外周血细胞群
荧光信号
荧光染料被激发而发射的光信号。 定量染色 荧光信号大小 被标记组分含量的定量
多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量
PI＋Annexin－V细胞凋亡检测
DNA 含 量 -PI Annexin-V
PE＋FITC荧光标记检测外周 血裂解后细胞群
应用领域 疾病诊断 生物学基础研究 环境监测 海洋微生物研究 农业领域应用 等等
70年代美国为攻克癌症 而建造。 厂商：
Becton-Dickson
Coulter-Beckman DOCytomation
已成为一个几十亿美金 的产业
流式细胞仪工作原理
液流与光源
流动室
流体动力学聚焦
激光聚焦
探测光路聚焦
流式细胞仪能够检测的细胞属性和组分举例 1）不需染色： 大小，胞浆颗粒度，细胞自发荧光，色素，细胞精确计数。 2）需染色或标记： 细胞组分： 细胞膜：流动性，通透性，膜电位 细胞内离子：H+（可检测PH值），Na+，K+，Ca2+（结合的和 自由 的）。
核酸：DNA含量，DNA成分，DNA合成，RNA，染色质结构等
光信号收集
光信号分离，导向，各探测通道PMT 接收幵转化为电信号。
激光束
侧向散射 光，荧光
1
二色镜 2
3
细胞
前向 散射 光
收集透镜
带通滤波片 光电倍增管
数据处理
光信号
FSC SSC FL1 FL2 FL3
电信号
对数 线性 线性 线性 对数
脉冲处理，模数转换
（面积，峰高，宽度）
记录数据，显示结果
流式细胞仪产生的信号