血小板抗原血清学的检验方法及临床意义

血小板抗原血清学的检验方法及临床意义

发表时间：2014-08-01T09:08:36.107Z 来源：《医药前沿》2014年第7期供稿作者：孙红霞

[导读] 血小板血型抗原是一种通过同种免疫抗体检测而来的血小板表面抗原，一种为血小板特异性抗原和血小板非特异性抗原。孙红霞

（黑龙江省大庆市让胡路区疾病预防控制中心 163000）

【关键词】血小板血清学检验

【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）07-0148-02 血小板血型抗原是一种通过同种免疫抗体检测而来的血小板表面抗原，一种为血小板特异性抗原和血小板非特异性抗原。血清学定型方法要求抗血清对待抗原要有活性。目前，在许多实验室中，抗体检测相关抗原的表型定型方法是较实用的血清学方法[1]。使用整个血小板进行实验比较易于操作。但是，当HLA类抗原在血小板定型时出现强表达时，要用氯喹或酸进行预处理，去除血小板上的HLA抗原。此

方法操作简易、方便、特异性和敏感性较强，下面以简易致敏红细胞血小板血清学试验为例介绍血清学检测方法。

1.原理

SEPSA试验在U型孔微量反应板上进行，将血小板抗原固定在U型孔壁上，与被检血清反应后洗净，以抗IgG(或抗IgM)细胞指示反应结果。如果血小板上结合了抗血小板抗体，则致敏在指示细胞上的抗IgG(抗IgM)与血小板抗体结合，指示细胞向孔底移动被阻滞，广泛覆盖在固定的血小板单层上，为阳性结果[2]。如果血小板上无抗体，则指示细胞向孔底移动不受阻，聚集在孔底中央，呈扣状，为阴性结果。

2.操作

2.1直接测定法：即测定血小板表面结合的血小板抗体。受检者血小板固定于反应孔底。各孔加入25μl抗IgG致敏红细胞。反应板置于湿盒内，室温静置3h以上或次日观察结果。

2.2间接测定法：即测定受检血清中的血小板抗体。弃去受检者血小板孔内的生理盐水，各孔加入pH7.2、0.05%吐温-PBS 25μl。各孔加入受检血清25μl，并加入LISS(低离子溶液)、pH6.7、25μl，置湿盒37℃孵育30min，再用pH7.2、0.05%吐温-PBS洗涤5次。各孔加入pH7.2、0.05%吐温-PBS，25μl及抗IgG指示细胞25μl，室温湿盒静置3 h以上或次日观察结果[3]。

2.3交叉配血试验：用以选择配合的血小板供体。将所需筛选的献血者血小板分别再反应板孔中固定后，把受检者血清25μl加入各孔中，并加入LISS(低离子溶液)，pH6.7、25μl,置湿盒37℃孵育30min，然后用pH7。2、0.05%吐温-PBS洗涤5次，各孔加入pH 7.2、0.05%吐温-PBS，25μl及抗IgG指示细胞25μl，室温湿盒静置3 h以上或次日观察结果。也可以反应1 h，2 000r/min离心10 min，观察结果。选择反应阴性的血小板为献血者，给受者输注。

2.4质量控制：每份试验均作阴、阳性对照以进行质量控制，在间接测定法中，以正常人AB血清为阴性对照，已知阴性血清为阳性对照；在直接测定法中，以正常人血小板为阴性对照，已知阳性血小板为阳性对照，被检血小板必须重复测定2个孔。

3.方法学评价与注意事项

SEPSA方法简易、快速、敏感、特异性强，应用范围广，特别在血小板交叉配合试验中是一种较为有效的方法。它不需要特殊的仪器设备，适合我国国情，正在全国各医院血库、临床实验室推广应用。检查前将被检血。清4 000 r/min(2 800g)离心10 min，以去除沉淀。被检标本不能使用血浆。被检血清不需要灭能。为了防止静电干扰，宜在室温湿润状态下操作。

4.临床意义

SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法，是众多免疫组织化学方法的一种。SABC是一种行之有效的检测血小板相关抗体的方法，SABC能同时检测泔血小板表面相关抗体或抗原和血清游离的相关抗体，方法简单，微量，快速，敏感性，特异性，重复性好，便于推广，为血小板硪少症提供了可靠的辅助诊断指标。SABC法实验只需取患者的血清，需分离血小板.且血清可在-20℃保存,方法快捷方便，因此SABC法实验重复性好。阳性率较高且特异性强，可以检测出血中的多种抗体。采取相应的抗原阴性的供体血小板.即配合型输血等不同的处理措施。可预防和减少血小板免疫性输血反应，避免反复输血患者引起同种免疫反应而导致血小板输注无效。对病人的治疗和预后有重要的临床意义。

血小板具有一个十分复杂的免疫结构，血小板抗原抗体系统主要包括同种抗原抗体和自身抗原抗体，而这里所述的相关抗体还包括血中各类免疫球蛋白和血小板内含有的免疫球蛋白在血小板表面和血小板总免疫球蛋白量上的反映。因此是一种血小板抗体的总体评价，也包含了机体其他因素引起的免疫反应对血小板的影响。

参考文献

[1] 田兆嵩，祝瑞泉，李忠平.献血者健康检查标准.世界卫生组织《安全输血与血液制品》远程教育教材补充教材，2002，7.

[2] Rachel JM, Sinor LT, Tawfik OW, et al . A solidphade red cell adherence test for platelet crossmatching. Med Lab Sci ,1985,42..194.

[3] 成红星;闫桂香;胡荣花;陈玫;;同种免疫致新生儿血小板减少性紫癜1例[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年.

[4] 吴霞;刘子生;孙小明;李小玲;赵慧仁;;变态反应性疾病血清总IgE水平的临床观察[J];黑龙江医药科学;1989年03期.

[5] 林飞卿,秦慧莲,章谷生;人淋巴细胞的E花环Ⅲ.稳定性E花环形成的条件与临床意义[J];复旦学报(医学版);1980年01期.