新药研究与开发 ——青蒿素..

（3）抗吸血虫作用 （4）抗心律失常 （5）增加免疫功能
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毒理学
2.1 小鼠的急性毒性
用体重18~22克的小鼠分组.以不同剂量的青篙素混悬液一次灌胃,记 录三天内死亡数.按Burn一Karbe氏法计算半数致死量,LD50=4530士 672.7mg/kg。 不同种类动物大剂量单次注射双氢青蒿素的急性症状有：动物懒动、 发抖，运动失调，呼吸缓慢，感觉迟钝及反正反应消失。鸽子、豚鼠、兔 、猫及狗可表现出痉挛性和强直性的惊厥，死前均有频繁抽搐，先呼吸停 止然后心跳停止。鸽子对双氢青蒿素的毒性对敏感，大鼠最耐受。存活动 物一般在10h~24h后逐渐恢复正常。
工艺流程
工艺原理：
利用CO2超临界流体的可调溶解性能，选择性地提取青蒿素。通过硅胶柱色谱，进一步 提高青蒿素的收率。
方法二、大孔吸附树脂法 实验步骤：
1.渗漉提取：黄花蒿粗粉加60%乙醇室温浸泡6小时，渗漉，收集渗漉液。 2.大孔吸附树脂分离：渗漉液经活性炭脱色，抽滤，滤液上ADS-17树脂柱，水洗后用30% 的乙醇洗脱，收集洗脱液。 3.回收溶剂-重结晶：将洗脱液于60℃减压浓缩，回收乙醇，静置得青蒿素粗品，再经70% 的乙醇重结晶，制得青蒿素。
历经380多次鼠疟筛选，1971年10月取得中药青蒿素筛 选的成功。1972年从中药青蒿素中分离得到抗疟有效单体， 命名为青蒿素，对鼠疟、猴疟的原虫抑制率达到100%。 1973年经临床研究取得与实验室一致的结果，抗黄花蒿 疟新药青蒿素由此诞生。 1981年10月在北京召开的由世界卫生组织主办的“青蒿 素”国际会议上，中国《青蒿素的化学研究》的发言，引起 与会代表极大的兴趣，并认为“这一新的发现更重要的意义 是在于将为进一步设计合成新药指出方向”。 1986年，青蒿素获得新一类新药证书，双氢青蒿素也获 一类新药证书。这些成果分别获得国家发明奖和全国十大科 技成就奖。 2011年9月23日，青蒿素的研究者屠呦呦获得美国纽约 拉斯克奖，这是中国科学家首次获得这一国际医学大奖。 2011年11月15日，中国中医科学院在京举行“2011年科 技工作大会”。会上授予屠呦呦中国中医科学院杰出贡献奖 ，奖励青蒿素研究团队100万元人民币。 2012年7月4日，上海交通大学宣布，在世界上首次实现 了抗疟药物——青蒿素的常规人工化学合成。
二、实验方案
方法一、CO2超临界流体萃取法 实验步骤：
1、粉碎-装料：将黄花蒿粉碎成中粉，装入料筒中，在整体装入萃取釜中。 2、CO2超临界流体萃取：CO2经热交换器冷却进入贮罐；冷CO2经压缩机压缩至 20MPa，再经热交换器加热至50℃进入萃取釜中；两萃取釜间歇交替工作，每个萃取釜萃 取4个小时后切换，保证萃取液连续从萃取釜中抽出；萃取液先通过过滤器除去可能夹带出 的固体颗粒，然后经热交换器加热至60℃，进入一级分离釜，萃取液析出部分杂质后进入 另一热交换器，调节温度至所需值，再进入二级分离釜析出青蒿素等溶质。分离釜采用两 组并联，当一组解析溶质时，另一组放空取出提取物。 3、硅胶柱净化：从二级分离釜出来的CO2带有少量的溶质和水分，经热交换器将温 度调至预设值后进入硅胶柱。硅胶柱采用两柱并联操作，一个硅胶柱进行吸附操作时；另 一个硅胶柱进行再生。净化后的CO2 经热交换器进入贮罐，完成一次循环操作。 4、补充新鲜CO2：由于萃取釜卸料、分离釜放料以及硅胶柱再生等过程都需要放空 ，不可避免的会损失，故需要不断补充。
青蒿素片的研发过程
姓名：XXX 学号：........... 专业：@@@@@@@@@@@@@
Contents
研 究 历 史 实 验 方 案
1 1
2018/2/1
临 床 前 研 究
2 3 2
临 床 ห้องสมุดไป่ตู้ 验
政 府 审 批
4 3 5
上 市 后 研 究
6 4
一、研究历史
青蒿素的故事原来始于中国文化大革命和援越抗美 战争时期。当年在越南战争的战场上，由于疟疾的流 行，作战双方的士兵纷纷感染疟疾，严重地影响了部 队战斗力。抗氯喹的恶性疟原虫 (Plasmodium falciparum) 的出现更成为当时疟疾防治的主要难题. 1967年5月23日，在毛泽东主席和周恩来总理的指 示下，一项具有国家机密性质、代号为“523项目”的 计划就此启动了。项目短期的目标是要尽快研制出能 在战场上有效控制疟疾的药物 ，而它的长远目标是通 过筛选合成化合物和中草药药方与民间疗法来研发出 新的抗疟药物。 1969年1月，屠呦呦被任命为北京中药研究所523 课题组的组长,领导对传统中医药文献和配方的搜寻与 整理。
工艺原理：
青蒿素在大孔吸附树脂的表面吸附和氢键吸附的作用下，吸附量大，易解析。
三、临床前研究
药 理 学
毒 理 学
药 代 动 力 学
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药理学
（1）抗疟作用
实验证明：青蒿素对红细胞内期疟原虫无性体有较强杀灭作用。对抗氯喹和奎宁 的疟原虫有良好的疗效。但对原发性和继发性红细胞外期及蚊体内的孢子增殖无影响 。本品的抗疟作用与叶酸代谢无关，也不像氯喹等抗疟药那样干扰DNA的复制，其抗 疟作用主要是破坏疟原虫滋养体的膜系结构，干扰疟原虫的表膜-线粒体功能，使原 虫体无法摄取宿主红细胞内的营养物质而发生肿胀、死亡，并不断排出体外。 青蒿素被疟原虫体内的铁催化, 其结构中的过氧桥裂解, 产生自由基, 与疟原虫蛋 白发生络合, 形成共价键, 使疟原虫蛋白失去功能, 从而死亡李锐等认为青蒿素及其衍 生物通过抑制细胞色素氧化酶, 干扰原虫膜系线粒体功能, 阻止原虫消化酶分解宿主的 血红蛋白成为氨基酸, 使疟原虫无法得到供给自身蛋白质的原料, 而迅速形成自噬泡, 导致虫体瓦解死亡。Steven 等认为青蒿素与原虫内的氯化高铁血红素反应导致副产 物活性氧的产生, 而活性氧的产生导致疟原虫膜系统的损害, 从而原虫代谢功能紊乱直 至死亡。
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药理学
（2）抗癌作用
青蒿素可显著降低急性白血病K562细胞端粒酶活性，抑制癌细胞生长和诱导 细胞凋亡。端粒酶是一种特殊的核糖核蛋白多聚酶。端粒酶活性增加与肿瘤的发 生、发展密切相关，大量研究资料表明，造血系统的恶性肿瘤均表现高端粒酶活 性，其活性的高低对判断白血病的疗效、恶性程度、预后及复发均有重要的临床 意义。故抑制端粒酶的活性，不仅可增加肿瘤细胞凋亡，还可增加其他化疗物质 的疗效。