第三章 细胞生物学研究方法

第三章细胞生物学研究方法
一．名词解释
1.福尔根反应：特异显示DNA分布的反应。

酸水解可除去RNA，仅保留DNA，冰出去DNA 上嘌呤脱氧核糖核苷键上的嘌呤，使脱氧核糖的醛基暴露。

所暴露的自由醛基与西夫试剂反应呈紫红色。

2.负染色：用重金属盐(如磷钨酸钠、醋酸铀等)对铺展在载网上的样品进行染色，使整个载网都铺上一层重金属盐，而有凸出颗粒的地方则没有染料沉积。

染色后，在电镜下观察时，被观察的对象为亮的，背景为暗的，反衬出样品中的生物大分子及其复合物的形态。

3.原位杂交：用标记的核酸探针通过分子杂交确定特意核苷酸序列在染色体上火细胞中的位置的方法。

4.原代培养：直接从动物体内获取细胞进行首次培养，称原代培养。

5.传代培养：原代培养的细胞在一个容器中增殖到一定的密度后，将细胞分散到多个容器中继续培养的方式称传代培养。

6.细胞株：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群，一般可顺利地传40-50代次，它保持染色体二倍体的数量及接触抑制行为。

7．细胞系：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，使其获得“不死性”特征，从而无限增殖，从正常组织或胚胎组织也可以建立细胞系，这是一个含有多个细胞谱系的混杂细胞群体。

8.探针：带有放射性同位素、生物素或其他活性物质标记的某种特定的DNA或RNA片段，用于核酸分子杂交技术以检出标本中待测核酸分子。

9.超薄切片：是一种主要的透射电子显微镜制样技术，利用超薄切片机将样品切成40-50nm 左右，穿透很弱的电子束才能透过。

其主要步骤为：固定、脱水、包埋、切片、染色。

二．填空
1、细胞生物学常用的光镜有相差显微镜、微分干涉显微镜、和荧光显微镜。

2、利用超速离心机对细胞组分进行分级分离的常用方法有差速离心和密度梯度离心。

3、单克隆抗体技术是将B淋巴细胞与无限繁殖的肿瘤细胞杂交的技术。

4、对电镜观察的生物样品有_要求样品很薄和保持样品的精细结构
5、贴壁生长的细胞具有三个特点：单侧生长、形态多变、接触抑制。

6、电镜样品制备常用的固定剂锇酸和戊二醛。

7、适于观察活细胞的光镜有普通光学显微镜、相差显微镜、和微分干涉显微镜等。

8、在同位素追踪技术中，用于研究DNA的同位素标记的前体物是胸腺嘧啶脱氧核苷。

9、分辨率是指显微镜能够分辩两个质点之间的最小距离。

10、电镜主要分为透射电镜和扫描电镜两类。

11、单克隆抗体是 B淋巴细胞细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇或灭活的病毒介导下发生融合的。

12、人眼的分辨率为0.2mm，光镜的分辨率为0.2um，电镜的分辨本领为0.2nm。

13、光学显微镜的分辨率由光源波长、物镜镜口角、介质折射率三种因素决定。

14、荧光显微镜是以紫外光为光源，电子显微镜则是以电子束作为光源。

15、对染色体上特异DNA序列进行分析的方法是原位杂交。

三．判断
1、亚显微结构就是超微结构。

（√）
2、相差显微镜可用来观察活细胞和未经染色的标本。

（√）
3、提高显微镜的分辨率, 可通过缩短波长, 或给标本染色。

（×）
4、透射或扫描电子显微镜不能用于观察活细胞，而相差或倒置显微镜则可以。

（√）
5、CsCl密度梯度离心法纯化样品时，样品要和CsCl混匀后分装，离心时，样品中不同组分的重力不同，停留在不同的区带中。

（√）
6、用带有标记的特定核酸分子作探针，测定与之互补的染色体DNA区段的位置，称为原位杂交。

（√）
7、对显微镜来说，最重要的性能参数是放大倍数。

（×）
8、普通光镜的应用原理：不同的染料对某种细胞组分有特异的吸附，形成足够的反差或产生不同波长的光普以区分细胞组分。

（√）
9、经过流式细胞仪分离出来的细胞不能继续进行培养。

（×）
10、经冷冻蚀刻技术处理后的样品，在电子显微镜下所观察到的图像是样品本身所形成的。

（×）
11、贴壁生长的细胞呈单层生长，而且有接触抑制现象。

（√）
12、投射或扫描电子显微镜不能用于观察活细胞，而相差或倒置显微镜可以用于观察活细胞。

（√）
四、填空
1、Feulgen反应是一种经典的细胞化学染色方法，常用于细胞内（C）
a 蛋白质的分布与定位
b 脂肪的分布与定位
c DNA的分布与定位
d RNA分布与定位
2、PAS可用来测定下列物质中的（a）
a 多糖
b 脂肪
c 蛋白质
d 核酸
3、体外培养细胞，从G1期到S期，用（b）研究细胞表面形态结构的变化。

a 超薄切片
b 扫描电镜
c 负染色
d 放射自显影
4、想要在细胞内部寻找一个含高浓度的钙离子的区域，下列（d）可以选择。

a 荧光显微镜
b 微分干涉显微镜
c 相差显微镜
d 透射电镜显微技术
5、研究表皮生长因子受体在细胞内分布的部位（c）
a 原位杂交
b 显微镜操作技术
c 免疫电镜
d 细胞融合
6、细胞内特异DNA或RNA序列的定性与定位通常采用的技术（c）
a 杂交瘤技术
b 放射自显影
c 原位杂交
d 胶体金技术
7、已克隆了人的rDNA，用（d）确定rDNA分布在人的那几条染色体上。

a 单克隆抗体技术
b 免疫荧光技术
c 免疫电镜技术
d 原位杂交技术
8、氚标记的尿嘧啶核苷可用于检测细胞的（c）
a 蛋白质合成
b DNA复制
c RNA转录
d 糖原合成
9、细胞培养液中一般都要加少量的小牛血清，最主要的原因是（c）
a 为细胞生长提供基本营养成分
b 将细胞连接处消化分散
c 有利于细胞贴壁生长和分裂
d 使细胞突变，转化成具有癌细胞的特点
10、某种抗癌药物的作用机制是阻止肿瘤细胞的DNA复制还是阻止蛋白质合成，用（b）证明。

a 电镜负染色技术
b 放射自显影
c 免疫荧光技术
d 免疫电镜技术
11、在光学显微镜样品制备试剂中，能特异显示DNA所在部位的试剂是（c）
a 伊红
b 美蓝
c 品红
d 醋酸柚
12、流式细胞术可用于测定（d）
a 细胞的大小和特定细胞类群的数量
b 分选出特定的细胞类群
c 细胞中的DNA、RNA或某种蛋白的含量
d 以上功能全是
五、简答
1、电子显微镜和光学显微镜的区别
电子显微镜是以电子束为光源，通过电子流对样品的投射或凡涉及电磁透镜的多级放大后在荧光屏上成像的大型仪器，而光学显微镜则是利用可见光照明，将微小物体放大影像的光学仪器。

（1）照明源不同电镜-电子枪发出的电子束；光镜-可见光
（2）透镜不同电镜-电磁透镜；光镜-玻璃磨成的光学透镜
（3）成像原理不同电镜-作用于被检样品的电子束经电磁透镜放大后反映到荧光屏上成像或作用于感光胶片成像；光镜-被检样品的不同结构吸收光线多少的不同而造成的。

（4）所用标本制备形式不同电镜-复杂而昂贵，超薄切片；光镜-制备简单。

2.如何从组织中分离出不同细胞？
（1）首先破坏细胞外基质和细胞连接，使组内的细胞变成单细胞。

（蛋白水解酶和钙螯合剂处理，再经轻度机械破坏，使之成为单细胞。

）
（2）常用以下几种方法从混合的细胞群中分离出不同类型的细胞。

A、根据细胞的不同物理性质，通过沉降和离心，可使大细胞与小细胞、重细胞与轻细胞分开。

B、利用一些细胞与玻璃或塑料有较强的吸附能力使之分开（层析）
C、利用抗原抗体特异性结合的特性使之分开（荧光显微镜）
3.为什么说电镜不可以完全取代光镜？
普通光学显微镜在科研中的地位是不可取代的。

（1）细胞生物学是在显微、亚显微、分子3个水平层次上研究细胞，在显微水平上研究需要用普通光学显微镜，在亚显微水平上需要用电子显微镜，缺一不可。

（2）普通光学显微镜样品易制备，而电镜对样品的要求很高。

（3）电镜不能观察活细胞及其动态变化
（4）普通光学显微镜操作简单，对环境和设备的要求没有电镜高。