流式细胞术发展和细胞组学新技术(贝克曼)
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humanity devices • Auto Setup with biological sample • Off-line compensation, LMD
compensation and More • FCS 3.0 format for Listmode files • Solvent protein detection
• 可以直接以LMD结果文件来获取新的样本 • 分析时不须预先打开方案，而可以直接打开LMD结果文件进行分析 • 可以重新进行补偿
可以减少高通量工作需要的烦杂的取样过程 适合于零成本绝对计数
创新 将您的注意力从操作中解放出来，而集中于思路的
.
8
从模拟信号到 先进的数字化信号
线性对对数查表 VS 普通对数放大
• 数字化信号转换 – 对数查表保证最优化的线性和稳定性 – 4次幂转换误差< 1%
• 光纤通讯 – 速度快 – 保真性高 – 实时获取数据和分析报告结果
放射自显影 细胞成像定量分析系统
分光高度计，荧光高 度计，干涉光高度计
细胞计数仪
流式细胞仪
大体荧光成像系统
???
.
3
• 形态学研究工具的发展历程
Confocal scanning system
High-eபைடு நூலகம்d automated HCS systems
Basic clinical scope
Research grade fluorescence scope
• 20比特未补偿的原始数据能提供LMD结果直接补偿 – 获取后通过滑调调节迅速重新补偿
• 20比特未补偿或补偿不好的原始数据可重新离线补偿 – 在相同电压条件下进行自动设置生成相应的补偿文件 – 利用补偿文件进行LMD结果的重新播放 – 可以进行单个文件和批处理文件的重新补偿
特别适用于三色以上补偿，准 确方便
• 20比特的数据，补偿数字化 – 全矩阵正反补偿 – 离线补偿
.
9
从相邻相邻相减到 减法全矩阵 到正反全矩阵数字化补偿方法
• 自动设置功能－实时自动补偿 – 每个通道电压自动调整 – 2-5 色全自动补偿 – 以细胞而不是微球进行自动荧光交叉和重叠的计算 – 可以根据不同的应用而分别设置
• 利用20比特的数据进行数字化补偿－实时手工补偿 – 全矩阵正反补偿
5-6 color cytometer – clinical / high-end res.
Simple cell counters & sizers
.
5
流式细胞仪新技术趋势
• Multi-color Analysis • Red sensitive PMTs • Excellent Sensitivity • New optics layout for Sharpness • Multi-platform sampling and
development (beads based assay)
• Multi-Laser, multi-power options for different use
• Large and Small particle sorting
• New technologies for high yield, high purity and high viability sorting
Simple optical microscope
.
4
Cell Lab Quanta
•细胞定量工具发展历程
6 color plus cytometer / sorter – high-end res.
Automated Cell viability
2-4 color cytometer – simple assays
流式细胞术发展和细胞组学新技术
游东生 美国贝克曼库尔特公司上海
.
1
以细胞为主要研究对象的课题数量变化
Past 5 years
Uncertain 6%
In Development
Cell-based 40%
Biochemical 60%
Biochemical 23%
Cell-based 71%
Source: Dr. Priya Kunapuli, Senior Research Scientist, Merck Research Laboratories; Dec. 2002
.
11
操作平台和结果输出的变化
• 从其它系统到Windows 系统 • 多种方式的图形重叠 • 点击将结果输出至WORD,PPT文件 • 点击将结果直接以EXCEL结果输出 • 点击将结果直接以PDF格式输出
.
12
LISTMODE文件格式数据量的变化
• FCS 3.0文件包含20比特的原始数据，10比特获取时经过补偿的数据和获取时 的方案
• 。。。
.
6
自动上样方式
• 32 支试管自动上样盘（MCL) • Walkaway 独立获取样本，减轻操作劳动
– MCL 自动模式. – MCL 手工模式. – 单管上样模式. – 暂停/转动功能可以方便地往试管加入刺激
剂或终止剂进行试验
• 每支试管检测前单独震动混匀，有利于均 匀获取细胞
.
7
• FC500 MPL – 24 孔 • 0.5 – 2.5 ml 每孔容量 – 96 标准孔和深孔反应板 • 250 ul 最小容量 – 40 支试管 (12x75mm) • 1ml 最小体积 – 可以固定体积上样检测 • 175 ul 吸样量
适用于三色以下补偿和提供多 色人工修正补偿的机会
对于分群明显但补偿不好的文 件可以在结果中直接补偿
对于稀有标本或复杂实验，发 现结果不好时不必进行实验的 重新操作而可以用离线补偿进 行抢救数据
.
10
FC500离线补偿界面
• 离线补偿后得到的补偿文件应用于LMD文件进行重新补偿
离线补偿自动设置后得到的设置文件应用于新样本的获取
Key takeaways: •Rapid movement to cell-based assays for contextual analysis
.
2
细胞水平研究的历史、现在和未来
18世纪，明视野显微镜发明
暗视野光镜，相差显微镜， 微分干涉对比显微镜，偏振
光显微镜，荧光显微镜
单光子共聚焦显微镜，多光 子共聚焦显微镜
compensation and More • FCS 3.0 format for Listmode files • Solvent protein detection
• 可以直接以LMD结果文件来获取新的样本 • 分析时不须预先打开方案，而可以直接打开LMD结果文件进行分析 • 可以重新进行补偿
可以减少高通量工作需要的烦杂的取样过程 适合于零成本绝对计数
创新 将您的注意力从操作中解放出来，而集中于思路的
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8
从模拟信号到 先进的数字化信号
线性对对数查表 VS 普通对数放大
• 数字化信号转换 – 对数查表保证最优化的线性和稳定性 – 4次幂转换误差< 1%
• 光纤通讯 – 速度快 – 保真性高 – 实时获取数据和分析报告结果
放射自显影 细胞成像定量分析系统
分光高度计，荧光高 度计，干涉光高度计
细胞计数仪
流式细胞仪
大体荧光成像系统
???
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3
• 形态学研究工具的发展历程
Confocal scanning system
High-eபைடு நூலகம்d automated HCS systems
Basic clinical scope
Research grade fluorescence scope
• 20比特未补偿的原始数据能提供LMD结果直接补偿 – 获取后通过滑调调节迅速重新补偿
• 20比特未补偿或补偿不好的原始数据可重新离线补偿 – 在相同电压条件下进行自动设置生成相应的补偿文件 – 利用补偿文件进行LMD结果的重新播放 – 可以进行单个文件和批处理文件的重新补偿
特别适用于三色以上补偿，准 确方便
• 20比特的数据，补偿数字化 – 全矩阵正反补偿 – 离线补偿
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9
从相邻相邻相减到 减法全矩阵 到正反全矩阵数字化补偿方法
• 自动设置功能－实时自动补偿 – 每个通道电压自动调整 – 2-5 色全自动补偿 – 以细胞而不是微球进行自动荧光交叉和重叠的计算 – 可以根据不同的应用而分别设置
• 利用20比特的数据进行数字化补偿－实时手工补偿 – 全矩阵正反补偿
5-6 color cytometer – clinical / high-end res.
Simple cell counters & sizers
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5
流式细胞仪新技术趋势
• Multi-color Analysis • Red sensitive PMTs • Excellent Sensitivity • New optics layout for Sharpness • Multi-platform sampling and
development (beads based assay)
• Multi-Laser, multi-power options for different use
• Large and Small particle sorting
• New technologies for high yield, high purity and high viability sorting
Simple optical microscope
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4
Cell Lab Quanta
•细胞定量工具发展历程
6 color plus cytometer / sorter – high-end res.
Automated Cell viability
2-4 color cytometer – simple assays
流式细胞术发展和细胞组学新技术
游东生 美国贝克曼库尔特公司上海
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以细胞为主要研究对象的课题数量变化
Past 5 years
Uncertain 6%
In Development
Cell-based 40%
Biochemical 60%
Biochemical 23%
Cell-based 71%
Source: Dr. Priya Kunapuli, Senior Research Scientist, Merck Research Laboratories; Dec. 2002
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操作平台和结果输出的变化
• 从其它系统到Windows 系统 • 多种方式的图形重叠 • 点击将结果输出至WORD,PPT文件 • 点击将结果直接以EXCEL结果输出 • 点击将结果直接以PDF格式输出
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12
LISTMODE文件格式数据量的变化
• FCS 3.0文件包含20比特的原始数据，10比特获取时经过补偿的数据和获取时 的方案
• 。。。
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自动上样方式
• 32 支试管自动上样盘（MCL) • Walkaway 独立获取样本，减轻操作劳动
– MCL 自动模式. – MCL 手工模式. – 单管上样模式. – 暂停/转动功能可以方便地往试管加入刺激
剂或终止剂进行试验
• 每支试管检测前单独震动混匀，有利于均 匀获取细胞
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• FC500 MPL – 24 孔 • 0.5 – 2.5 ml 每孔容量 – 96 标准孔和深孔反应板 • 250 ul 最小容量 – 40 支试管 (12x75mm) • 1ml 最小体积 – 可以固定体积上样检测 • 175 ul 吸样量
适用于三色以下补偿和提供多 色人工修正补偿的机会
对于分群明显但补偿不好的文 件可以在结果中直接补偿
对于稀有标本或复杂实验，发 现结果不好时不必进行实验的 重新操作而可以用离线补偿进 行抢救数据
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10
FC500离线补偿界面
• 离线补偿后得到的补偿文件应用于LMD文件进行重新补偿
离线补偿自动设置后得到的设置文件应用于新样本的获取
Key takeaways: •Rapid movement to cell-based assays for contextual analysis
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2
细胞水平研究的历史、现在和未来
18世纪，明视野显微镜发明
暗视野光镜，相差显微镜， 微分干涉对比显微镜，偏振
光显微镜，荧光显微镜
单光子共聚焦显微镜，多光 子共聚焦显微镜