核酸杂交
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
（Source: Courtesy Lifecodes Corporation, Stamford, CT.）
1探针 5探针
100人中的1人（10-2） 100亿人中的一人（10-10）
某些种族群体成员与某些探针匹配的可能性较高。 通常会有超过百万分之一的概率发生错误。
原位杂交：定位染色体中的基因
准确？
嫌疑人被指控袭击和强奸一名年轻女人，已经分析了各种来自嫌疑人和女人的DNA样本。 泳道1、5和9含有标记的DNA。泳道2含有来自嫌疑人A血细胞的DNA。 泳道3含有来自在女人的衣服上精液样本的DNA。泳道4含有嫌疑人B血细胞的DNA。 泳道6含有通过擦拭获得女人的阴道的DNA。泳道7含有来自女性血液的DNA细胞。 泳道8含有对照DNA。 泳道10是不含DNA的对照。 部分基于这一证据，怀疑B被判犯有罪。 注意他的DNA在泳道4与泳道3的分布和在第6泳道中阴道所拭精液中精子DNA片段的分布相匹配。
(Source: Courtesy Dr. David Ward, Science 247 (5 Jan 1990) cover. © AAAS.)
免疫印迹（Western印迹）
原理：Western印迹是指将蛋白质样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，然后转移至到固相载 体(例如硝酸纤维素薄膜)上，然后用抗体通过免疫学反应检测目的蛋白，分析基因的表达 程度。
接下来，用碱使DNA变性 并转移至膜上。
最后，Hale Waihona Puke Baidu印迹与标记的探 针杂交并通过放射自显影 或磷光成像检测标记的带。
DNA指纹图谱和DNA分型
• DNA指纹——基本序列重复模式的独特性
（Source: G. Vassart et al.,A sequence in M13 phage detects hypervariable minisatellites in human and animal DNA. Science 235 (6 Feb 1987) p. 683, f. 1. © AAAS.）
原理：用已知序列的标记探针与从细胞中扩散的染色体中部分变性的DNA单 链区域杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。
●染色体上人体肌糖原磷酸化酶基因的定位。 ①部分地进行人类染色体扩散变性以暴露可杂 交的单链区域。 ●二硝基苯酚（DNP）标记探针杂交的位点间 接检测如下：将兔抗DNP抗体与探针上的DNP 结合，然后将山羊抗兔抗体与荧光素异硫氰酸 酯（FITC）偶联，FITC发出黄色荧光。 探针杂交的染色体位点显示为红色背景的亮黄 色荧光斑点，其由染色体用荧光染料碘化丙啶 染色而产生。因而，将11号染色体鉴定为糖原 磷酸化酶基因的位点。
核酸杂交
杂交技术
①Southern印迹：识别特定的DNA片段
——DNA指纹图谱和DNA分型
②原位杂交：定位染色体中的基因 ③免疫印迹（Western印迹）
Southern印迹：识别特定的DNA片段
首先，使用限制酶切割 从生物体中分离的基因 组DNA。 其次，DNA片段进入琼 脂糖凝胶中电泳分离。
（a）免疫印迹首先通过SDS-PAGE分离蛋白质混合物。 （b）接下来，用虚线表示印迹到膜上的分离的蛋白质。 （c）用一抗检测印迹，特别针对印迹上的目的蛋白质。 在这里，抗体可与其中一个蛋白质条带（红色）反应，但反应到目前为止无法察觉。 （d）标记的二抗（或蛋白A）用于检测一抗以及目的蛋白质。这里，附着于一抗的二抗的存在是用 带颜色从红色到紫色的变化来表示，但是到目前为止，这种反应也是不可检测的。 （e）最后，使用X射线胶片或磷成像仪（如果标签是放射性的）检测标记的条带。
1探针 5探针
100人中的1人（10-2） 100亿人中的一人（10-10）
某些种族群体成员与某些探针匹配的可能性较高。 通常会有超过百万分之一的概率发生错误。
原位杂交：定位染色体中的基因
准确？
嫌疑人被指控袭击和强奸一名年轻女人，已经分析了各种来自嫌疑人和女人的DNA样本。 泳道1、5和9含有标记的DNA。泳道2含有来自嫌疑人A血细胞的DNA。 泳道3含有来自在女人的衣服上精液样本的DNA。泳道4含有嫌疑人B血细胞的DNA。 泳道6含有通过擦拭获得女人的阴道的DNA。泳道7含有来自女性血液的DNA细胞。 泳道8含有对照DNA。 泳道10是不含DNA的对照。 部分基于这一证据，怀疑B被判犯有罪。 注意他的DNA在泳道4与泳道3的分布和在第6泳道中阴道所拭精液中精子DNA片段的分布相匹配。
(Source: Courtesy Dr. David Ward, Science 247 (5 Jan 1990) cover. © AAAS.)
免疫印迹（Western印迹）
原理：Western印迹是指将蛋白质样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，然后转移至到固相载 体(例如硝酸纤维素薄膜)上，然后用抗体通过免疫学反应检测目的蛋白，分析基因的表达 程度。
接下来，用碱使DNA变性 并转移至膜上。
最后，Hale Waihona Puke Baidu印迹与标记的探 针杂交并通过放射自显影 或磷光成像检测标记的带。
DNA指纹图谱和DNA分型
• DNA指纹——基本序列重复模式的独特性
（Source: G. Vassart et al.,A sequence in M13 phage detects hypervariable minisatellites in human and animal DNA. Science 235 (6 Feb 1987) p. 683, f. 1. © AAAS.）
原理：用已知序列的标记探针与从细胞中扩散的染色体中部分变性的DNA单 链区域杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。
●染色体上人体肌糖原磷酸化酶基因的定位。 ①部分地进行人类染色体扩散变性以暴露可杂 交的单链区域。 ●二硝基苯酚（DNP）标记探针杂交的位点间 接检测如下：将兔抗DNP抗体与探针上的DNP 结合，然后将山羊抗兔抗体与荧光素异硫氰酸 酯（FITC）偶联，FITC发出黄色荧光。 探针杂交的染色体位点显示为红色背景的亮黄 色荧光斑点，其由染色体用荧光染料碘化丙啶 染色而产生。因而，将11号染色体鉴定为糖原 磷酸化酶基因的位点。
核酸杂交
杂交技术
①Southern印迹：识别特定的DNA片段
——DNA指纹图谱和DNA分型
②原位杂交：定位染色体中的基因 ③免疫印迹（Western印迹）
Southern印迹：识别特定的DNA片段
首先，使用限制酶切割 从生物体中分离的基因 组DNA。 其次，DNA片段进入琼 脂糖凝胶中电泳分离。
（a）免疫印迹首先通过SDS-PAGE分离蛋白质混合物。 （b）接下来，用虚线表示印迹到膜上的分离的蛋白质。 （c）用一抗检测印迹，特别针对印迹上的目的蛋白质。 在这里，抗体可与其中一个蛋白质条带（红色）反应，但反应到目前为止无法察觉。 （d）标记的二抗（或蛋白A）用于检测一抗以及目的蛋白质。这里，附着于一抗的二抗的存在是用 带颜色从红色到紫色的变化来表示，但是到目前为止，这种反应也是不可检测的。 （e）最后，使用X射线胶片或磷成像仪（如果标签是放射性的）检测标记的条带。