分解尿素的细菌分离与计算

专题2 微生物的培养与应用

课题2 分解尿素的细菌的分离与计算

一、课时重难点

【重点】对土样的选取和选择培养基的配制。

【难点】对分解尿素的细菌的计数。

二、典型例题：

1．下列关于分解尿素的细菌，说法正确的是（）

A．以尿素作为唯一碳源B．能分解尿素的原因是能合成并分泌蛋白酶

C．环境中含有大量的尿素诱导该细菌产生了分解尿素的特性

D．以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后不会使酚红指示剂变红

2．原油含有大量致癌的“多环芳烃”，分子结构十分稳定，有些细菌可以利用原油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解圈。某小组以如何筛选出能降解原油的菌株并投入除污为课题设计了有关实验。有关说法正确的是

A．用于筛选目的菌株的培养基其主要特点是以原油（多环芳烃）为唯一碳源

B．培养基配制完成之后需进行消毒处理

C．在选择培养基上形成的菌落，即为能分解多环芳烃的目的菌种

D．筛选出目的菌种后，可用平板划线法在培养基上进行接种和计数

3．关于生物技术实践中的有关检验，不正确的是（）

A．在果酒制作实验结束时要检验是否有酒精产生，正确的操作步骤是先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入硫酸和重铬酸钾的混合液

B．在微生物培养中，检验培养基是否被污染的方法是用一组不接种或接种无菌水的培养基与接种培养物的培养基一起培养

C．检验以尿素为唯一氮源的培养是否分离出了分解尿素的细菌，方法是在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，则说明分离成功

D．检验胡萝卜素纯度的方法是纸层析法，原理是不同的色素分子在层析液中的溶解度不同，故随层析液在滤纸上扩散的速度不同，若样品中有杂质，则会出现不同的色素点（带）

4．尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制选择培养基时（）

A．葡萄糖在培养基中越多越好B．尿素分解菌有固氮能力，故培养基中只需无机氮

C．尿素在培养基中越少越好D．尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素为化合态氮

5．下列生物学实验操作，能够顺利达到实验目的的是

A．将果泥和果胶酶分装在不同试管中恒温处理后再混合，以探究果胶酶的最适温度

B．洗涤红细胞时，需要加入五倍体积的蒸馏水

C．土壤浸出液接种于牛肉膏蛋白胨培养基上以筛选出能分解尿素的细菌

D．根据SDS—凝胶电泳的结果可判断蛋白质的分子量大小

6．下列有关生物技术实践的叙述，不正确

．．．的是

A．制作果醋时应不断通入无菌空气

B．在土壤中分解尿素的细菌的分离和计数实验中，应采用平板划线法

C．通过比色法来检测亚硝酸盐含量需要制备标准显色液

D．饥饿时，胰高血糖素分泌量上升，促进肝糖原和肌糖原分解

7．下列是以酵母菌为材料进行的实验，有关叙述错误的是（）

A．探究酵母菌的呼吸方式，可用溴麝香草酚蓝检测产生的CO2

B．用酵母菌发酵酿制果酒，选择酸性重铬酸钾检测产生的酒精

C．探究酵母菌种群数量变化，应设空白对照排除无关变量干扰

D．用稀释涂布平板法培养计数，应选择有30～300菌落数的平板

8．【生物—选修1：生物技术实践】

有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。

（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力。（4）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和。无菌技术要求实验操作应在附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

9．人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：

（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，培养基常用的灭菌方法有。

（2）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。在稀释土壤溶液的过程每一步都要在

旁进行操作。接种后的培养皿于37℃的中培养。

（3）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于培养基。

若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的使pH升高，酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力。

（4）与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数。

A．多 B．少 C．相等 D．几乎为零

10．[生物－选修I生物技术实践](15分)

尿素是一种重要的农业肥料，经微生物分解后能更好的被植物利用。某生物兴趣小组试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计实验并成功筛选到能高效分解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示。将表中物质溶解后，用蒸馏水定容到100mL。实验过程如右图所示:

回答下列问题:

(1)该培养基能筛选出目的菌的原因是。

(2)图中将细菌转到固体培养基上接种时，可采用的方法是。初步筛选出来的菌种还

需要进一步的鉴定：在培养基中加入指示剂，接种并培养初步筛选的菌种，若指示剂变成色，则可说明该菌种能够分解尿素。

(3)在实验中，下列材料或用具需要灭菌的是，需要消毒的是（填序号）。

①培养细菌的培养基与培养皿②玻棒、试管、锥形瓶和吸管③实验操作者的双手

(4)在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而其他同学只选择出

大约20个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有（填序号）。

①所取土样不同②培养基被污染③接种操作错误④没有设置对照实验

(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行处理后，才能倒掉。

11．[生物—选修1生物技术实践]（15分）

请回答下列生物技术方面的问题：

（1）在传统发酵技术中，果醋的制作往往在果酒制作基础上进行，请用相关反应式表示：。（2）腐乳制作主要菌种是________它能产生___________两种酶将水豆腐中两种主要大分子有机物分解成