光皮木瓜多酚类的提取和清除DPPH的抗氧化活性

光皮木瓜多酚类的提取和清除DPPH的抗氧化活性

张 婷，糜漫天，唐 勇，赵 靖

（第三军医大学营养与食品卫生教研室，重庆市营养与食品安全重点实验室，重庆 400033）

【摘 要】目的：从光皮木瓜中提取多酚类物质，分析其成分含量并测定其多酚的抗氧化活性。方法：将光皮木瓜分为水提物和醇提物两部分，采用纤维素酶解方法处理原料，进行对比实验。在实验中以分光光度法测定其总多酚、单宁和黄酮类含量；薄层色谱定性分析其单体成分；DPPH自由基清除实验测定其抗氧化性能。结果：光皮木瓜提取物中的总多酚为1 801mg/100g FW，其中单宁935mg/100g FW，黄酮类294mg/100g FW，酶解有助于多酚含量的提高（P<0.05）；薄层色谱的定性分析显示含有儿茶素单体和绿原酸；DPPH自由基清除效应实验结果指出水提物清除自由基的活性较醇提物强，而且酶解后各部分的活性均增强。结论：光皮木瓜提取物中的多酚类物质含量较高并有较强的抗氧化活性。[营养学报，2007，29（5）：485－489 ]

关键词：光皮木瓜；多酚；单宁；黄酮类；DPPH自由基

中图分类号：R151.3 文献标识码：A 文章编号：0512－7955（2007）05-0485-05

THE EXTRACTION OF POLYPHENOL CONTENTS OF CHAENOMELES SINENSIS AND ITS

EFFECT ON SCAVENGING DPPH RADICAL

ZHANG Ting，MI Man-tian，TANG Yong，ZHAO Jing

（Institute of Nutrition and Food Hygeine of Third Military Medical University , Chongqing Key Laboratory of Nutrition and

Food Hygiene, Chongqing 400033, China）

【Abstract】Objective: To evaluate the antitoxidant activity of polyphenol extracted from Chaenomeles sinensis. Method：Total polyphenols, tannins and flavonoids were determined spectrophoto- metrically, after extraction of plant material with aqueous and ethanol extracts, adding cellulase during processing for contrast. TLC was used for quantitation of single polyphenols and DPPH free radical scavenging activity test for antitoxidant evaluation of the extracts. Results：The total polyphenols, tanins, and flavoniods of Chaenomeles sinensis extracts were 1 801, 935 and 294 mg/100gFW, and enzymatic process increased polyphenols contents（P<0.05）. TLC showed catechin and chlorogenic acid existed; and aqeous extract showed stronger DPPH free radical scavenging activity than ethanol extract, and adding cellulase could enhanc activity. Conclusion：Polyphenols contents in Chaenomeles sinensis extracts were high and showed great DPPH free radical scavenging activity.[ACTA NUTRIMENTA SINICA,2007,29(5)：485－489]

Key words: Chaenomeles sinensis; polypheols; tannins; flavonoids; DPPH free radical

木瓜为蔷薇科植物帖梗海棠[Chaenomeles speciosa（sweet）Nakai]的成熟果实，主要分为两大类：皱皮木瓜（川木瓜、云木瓜、藏木瓜、日本木瓜等）和光皮木瓜（山木瓜）,本实验所用材料为光皮木瓜[Chaenomeles sinensis(Touin) Koehne]属于木瓜同科植物榠楂，是我国做为传统的中药材。它具有祛风除湿、舒筋活络的功效[1]。光皮木瓜含有丰富的膳食纤维[2]和有机酸，特别是含有多量的酚类物质[3]和VC。近年来天然抗氧化剂特别是多酚类的研究较多，但国内外对光皮

收稿日期：2006-10-14

基金项目：重庆市科研基金（No.2005AC1023）

作者简介：张婷（1982－），女，硕士研究生，E-mail：zhtin0128@；通讯作者：糜漫天

木瓜中多酚类物质和抗氧化能力的报道很少[4]，本研究对比光皮木瓜水提物和醇提物的多酚类物质含量，并测定其抗氧化活性。

1材 料 与 方 法

1.1 材料

光皮木瓜（Chinese quince）购自綦江县打通木瓜基地。

1.2 试剂和仪器

试剂：DPPH（2,2-Diphenyl-1-picrylhy- drazyl ,二苯代苦味酰肼自由基, SIGMA 公司）；Folin-Ciocalteu试剂（第三军医大学生化教研室试剂中心）；干酪素（分析纯）；芦丁、槲皮素、绿原酸、没食子酸、儿茶素标准品（中国药品生物制品检定所）；原花青素标准品（天津尖峰天然产物公司）；其余试剂为分析纯。设备：聚酰胺薄层板；紫外分光光度计（北京普析通用设备公司）。

1.3 方法

1.3.1 原料提取：7月间新鲜采集光皮木瓜，洗净、去核、切成小块。称取两份相同重量（100 g）的木瓜分别加入2倍重量的水（200 ml）打浆，向其中1份匀浆加入1%纤维素酶，放入摇床中震摇酶解（45℃，30 min），将酶解和未酶解的匀浆冷冻离心，得上清液水提物C S和酶解上清液水提物CE S和沉淀，将沉淀用有机溶剂回流提取一定时间，过滤得醇提物C r和酶解醇提物CE r。

1.3.2 提取溶剂的确定：分别用50%、60%、70%、80%、90%、100%乙醇、无水甲醇和无水丙酮作为溶剂将沉淀按照以上工艺提取一次，过滤得滤液，定容至100 ml得待测液。用Folin-Ciocalteu 法测定滤液中总酚含量。

1.3.3 提取次数的确定：（1）称取5 g沉淀，量取25 ml 50%乙醇溶液，混合，85℃回流提取1 h；（2）过滤，无水乙醇定容至100ml（S）；（3）量取25 ml 95%乙醇溶液，与残渣混合，85℃回流提取 1 h；（4）过滤，合并两次滤液，无水乙醇定容至100 ml(D)；（5）量取25ml 95%乙醇溶液，与残渣混合，85℃回流提取1h；（6）过滤，合并三次滤液，无水乙醇定容至100 ml(T)。

单次提取按照步骤1～2，两次提取按照步骤1～4，三次提取按照步骤1～6。在第一次提取过程中，大部分的多酚类物质被提取，第二次和第三次提取采用更强极性的溶剂（95%乙醇）。得三种滤液S、D、T。用无水乙醇分别定容三种滤液至100 ml，隔夜，过滤，去沉淀，得滤液，用Folin-Ciocalteu法测滤液中多酚类总含量。 1.3.4 总多酚的测定：采用Folin-Ciocalteu法[5]并稍做改动。精密称取没食子酸30mg，溶于100 ml 无水乙醇中，制成0.3mg/ml的没食子酸标准溶液。分别吸取此溶液0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml（相当于没食子酸0，30，60，120，180，240，300 µg）于45ml带塞离心管中，蒸馏水定容至10 ml处，加入0.5 ml的Folin-Ciocalteu试剂，以7.5%无水碳酸钠溶液定容至20 ml，放置30min，于765nm处测定光吸收值。

分别吸取待测样品溶液C S、CE S、C r和CE r 0.1 ml于具塞离心管中，蒸馏水定容至10 ml，以后同标准曲线的制备。以100 g鲜果中没食子酸毫克当量（GAE）表示总多酚含量。实验均重复3次。

1.3.5 单宁测定[6]：用干酪素振摇吸附单宁后，用Folin-Ciocalteu法测定单宁含量。分别吸取0.1 ml待测样品C S、CE S、C r、CE r于15 ml离心管中，加水定容至10 ml后倾入100 ml三角瓶中，加入精密称取的100 mg干酪素，混匀，放入摇床中振摇后（150 r/min，45 min），取出过滤，得滤液照所述方法测未被吸附的多酚类物质含量，用总多酚含量减去干酪素吸附单宁后测得多酚类含量可得单宁含量。以100 g鲜果没食子酸毫克当量（GAE）表示单宁含量。实验均重复3次。

1.3.6 黄酮类的测定：采用中国药典2000年版一部附录VB并稍为改动。精密称取芦丁20mg，溶于100 ml无水乙醇中，制成0.2 mg/ml的芦丁标准溶液。分别吸取标准溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml（相当于芦丁0、20、40、80、120、160、200 µg）于25 ml容量瓶中，蒸馏水定容至6ml处，加入5%亚硝酸钠1 ml，摇匀，放置6 min，加入10%硝酸铝1 ml，摇匀，放置6 min，随后加入4%氢氧化钠10 ml，加水至刻度25 ml，摇匀，放置15 min后，于500 nm处测定吸光值。

分别吸取待的测样品溶液C S、CE S、C r、CE r 0.1 ml于45 ml具塞离心管中，蒸馏水定容至6 ml 处，以后步骤同标准曲线的制备。以100g鲜果中