荧光素酶报告基因
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• 如同萤火虫荧光素酶，海肾荧光素酶的活性也不需要翻译后修饰，一旦翻译 完成即可行使遗传报告基因的功能。海肾荧光素酶报告基因可以作为一种内 参系统或作为一种独立的检测系统来使用。
Gaussia分泌型荧光素酶报告基因
• Gaussia luciferase是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类动物的新型 荧光素酶。通过报告基因载体，Gaussia luciferase可用于哺乳动物细胞表 达。表达后的Gaussia luciferase为单条肽链的单体酶，其分子较小 （185aa），且具有分泌性信号肽，因此可通过内质网分泌到细胞外。该荧光 素梅催化底物腔肠素的氧化反应并且发光（480nm），该反应无需ATP参与。
RNA主要分三类，即tRNA（转运RNA），rRNA（核糖体RNA），mRNA（信 使 RNA ） 。 mRNA 是 合 成 蛋 白 质 的 模 板 ， 内 容 按 照 细 胞 核 中 的 DNA 所 转 录 ； tRNA是mRNA上碱基序列（即遗传密码子 ）的识别者和氨基酸的转运者； rRNA与核糖体蛋白质结合在一起，形成核糖体（ribosome），是蛋白质合成的 工作场所。
目的
1，知其然知其所以然 2，能让非专业人员理解 3，能够和专业人员基础交流 4，能跟上生产商的培训 5，做一名专业的销售
培训方式
1，原理 2，目的 3，应用 4，客户 5，竞争对手及优势
目的及流程
• 是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。 • 转录子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为
相互作用并与之相结合的过程。 启动子是基因转录起始所必需的一段DNA序列，是基因表达调控的上游顺式
作用元件之一。 真核细胞中的模板识别与原核细胞有所不同，需要一些转录调控因子（辅助
蛋白），RNA聚合酶才能识别启动子并形成转录前起始复合物（PIC）。
B. 转录起始 RNA聚合酶结合到启动子上以后，使启动子附近的DNA解旋并解链，形成转录
• 有辅酶A（CoA）存在时能提高反应效率，增加发光时间。萤火虫荧光素酶无 需翻译后修饰，即可表现出荧光素酶活性。因此可将萤火虫荧光素酶的基因 插入不同载体，作为报告基因，在细胞中表达。
海肾荧光素酶报告基因
• 海肾荧光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气条件下，可以催化腔肠 素（coelenterazine）氧化成coelenteramide，在腔肠素（coelenterazine） 氧化的过程中也会发出生物萤光。
• 启动子是基因（gene）的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度。 启动子是位于结构基因5ˊ端上游的一段DNA序列，能够指导全酶(holoenzyme)同模板正确结合， 活化RNA聚合酶，启动基因转录。
• 终止子 DNA分子中终止转录的核苷酸序列。而终止密码子是作为翻译终止的信号内含子是基 因内的间隔序列,不出现在成熟的RNA分子中,在转录后通过加工被切除。大多数真核生物的基 因都有内含子。
萤火虫荧光素酶报告基因
• 荧光素酶（Luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称，
• 萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的 条件下，可以催化荧光素（luciferin） [lu:'sɪfərɪn]氧化成氧化荧光素 （oxyluciferin）[ɒksɪlu:'sɪfərɪn] 。在荧光素（luciferin）氧化的过程中， 会发出生物萤光(bioluminescence) [ˌbaɪoʊlu:mɪˈnesns] 。
反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异 性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现 共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验 （luciferase assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重 要手段 • 1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因 质粒，如pGL3-basic等。 • （2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相 关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达， 荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。 • （3） 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检 测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启 动子片段有作用。
与其他荧光素梅相比，使用Gaussia luciferase作为报告基因有更多的优势： 分泌型荧光素酶，可直接取上清检测，无须裂解细胞 • 发光强度高，是其它荧光素酶的1千倍 • 反应无须ATP，不受ATP影响 • 稳定性高，对温度、PH值等耐受性强
应用
主要应用领域： 1、荧光素酶标记基因-潜在启动子/启动子核心区域检测； 2、潜在增强子/抑制子等调控子核心元件检测； 3、启动子区可能的转录因子结合位点检测； 4、启动子/增强子与转录因子的相互作用； 5、病毒/细胞相互作用-荧光素酶标记细胞； 6、药物等化学诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）； 7、射线等物理诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）； 8、荧光素酶标记微生物
• 内含子（intron）是真核生物细胞DNA中的间插序列。这些序列被转录在前体RNA中，经过剪 接被去除，最终不存在于成熟RNA分子Biblioteka Baidu。内含子和外显子的交替排列构成了割裂基因。在 前体RNA中的内含子常被称作“间插序列”。
• 外显子(expressed region)在剪接(Splicing)后仍会被保存下来，并可在蛋白质生物合成过程中被 表达为蛋白质。外显子是最后出现在成熟RNA中的基因序列，又称表达序列。既存在于最初 的转录产物中，也存在于成熟的RNA分子中的核苷酸序列。
参与反应： AUGC 模板 RNA聚合酶 其他蛋白质
转录的基本过程包括：模板的识别，转录起始，转录延伸，转录终止
转录特点： RNA按照5-3方向合成 以DNA双链中的反义链为模板 不需要引物 合成的RNA有与DNA编码链相同的序列A-U
A. 模板的识别 模板的识别阶段主要指RNA聚合酶与启动子DNA双链
• DNA即脱氧核糖核酸（英文Deoxyribonucleic acid的缩写）, 主要遗传物质。由双链结构，由脱 氧核糖核苷酸（成分为：脱氧核糖、磷酸及四种含氮碱基ATCG）组成
• RNA 核糖核酸。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子 由磷酸，核糖和碱基构成。ACGU
新生RNA链和RNA聚合酶将被释放下来。这即是转录终止。
启动子
启动子是一段位于结构基因5’端上游区的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使 之与模板DNA准确地结合，并具有转录起始的特异性。
转录因子
• 转录因子(transcription factor)是一群能与基因5`端上游特定序列专一性结合， 从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子。
泡以促使核糖核苷酸与模板DNA配对。 转录起始即是RNA链上第一个核苷酸键的产生。 无需引物。 起始后直到形成9个核苷酸的过程是通过启动子阶段，此时RNA聚合酶一直在启
动子处，之后进入正常延伸。 C. 转录延伸
转录延伸即是RNA聚合酶释放σ因子离开启动子后，核心酶沿着模板DNA移动并 使新生RNA链不断伸长的过程。
D. 转录终止
当RNA链延伸到终止位点时，RNA将停止合成，转录泡瓦解，DNA链复原，新 生RNA链和RNA聚合酶将被释放下来。这即是转录终止。
C. 转录延伸 转录延伸即是RNA聚合酶释放σ因子离开启动子后，核心酶沿着模板DNA移
动并使新生RNA链不断伸长的过程。 D. 转录终止 当RNA链延伸到终止位点时，RNA将停止合成，转录泡瓦解，DNA链复原，
• UTR（Untranslated Regions）即非翻译区，是信使RNA（mRNA）分子两端的非编码片段。
• 5'-UTR从mRNA起点的甲基化鸟嘌呤核苷酸帽延伸至AUG起始密码子，3'-UTR从编码区末端的 终止密码子延伸至多聚A尾巴（Poly-A）的前端。
转录
以DNA为模板合成RNA的过程
Gaussia分泌型荧光素酶报告基因
• Gaussia luciferase是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类动物的新型 荧光素酶。通过报告基因载体，Gaussia luciferase可用于哺乳动物细胞表 达。表达后的Gaussia luciferase为单条肽链的单体酶，其分子较小 （185aa），且具有分泌性信号肽，因此可通过内质网分泌到细胞外。该荧光 素梅催化底物腔肠素的氧化反应并且发光（480nm），该反应无需ATP参与。
RNA主要分三类，即tRNA（转运RNA），rRNA（核糖体RNA），mRNA（信 使 RNA ） 。 mRNA 是 合 成 蛋 白 质 的 模 板 ， 内 容 按 照 细 胞 核 中 的 DNA 所 转 录 ； tRNA是mRNA上碱基序列（即遗传密码子 ）的识别者和氨基酸的转运者； rRNA与核糖体蛋白质结合在一起，形成核糖体（ribosome），是蛋白质合成的 工作场所。
目的
1，知其然知其所以然 2，能让非专业人员理解 3，能够和专业人员基础交流 4，能跟上生产商的培训 5，做一名专业的销售
培训方式
1，原理 2，目的 3，应用 4，客户 5，竞争对手及优势
目的及流程
• 是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。 • 转录子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为
相互作用并与之相结合的过程。 启动子是基因转录起始所必需的一段DNA序列，是基因表达调控的上游顺式
作用元件之一。 真核细胞中的模板识别与原核细胞有所不同，需要一些转录调控因子（辅助
蛋白），RNA聚合酶才能识别启动子并形成转录前起始复合物（PIC）。
B. 转录起始 RNA聚合酶结合到启动子上以后，使启动子附近的DNA解旋并解链，形成转录
• 有辅酶A（CoA）存在时能提高反应效率，增加发光时间。萤火虫荧光素酶无 需翻译后修饰，即可表现出荧光素酶活性。因此可将萤火虫荧光素酶的基因 插入不同载体，作为报告基因，在细胞中表达。
海肾荧光素酶报告基因
• 海肾荧光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气条件下，可以催化腔肠 素（coelenterazine）氧化成coelenteramide，在腔肠素（coelenterazine） 氧化的过程中也会发出生物萤光。
• 启动子是基因（gene）的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度。 启动子是位于结构基因5ˊ端上游的一段DNA序列，能够指导全酶(holoenzyme)同模板正确结合， 活化RNA聚合酶，启动基因转录。
• 终止子 DNA分子中终止转录的核苷酸序列。而终止密码子是作为翻译终止的信号内含子是基 因内的间隔序列,不出现在成熟的RNA分子中,在转录后通过加工被切除。大多数真核生物的基 因都有内含子。
萤火虫荧光素酶报告基因
• 荧光素酶（Luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称，
• 萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的 条件下，可以催化荧光素（luciferin） [lu:'sɪfərɪn]氧化成氧化荧光素 （oxyluciferin）[ɒksɪlu:'sɪfərɪn] 。在荧光素（luciferin）氧化的过程中， 会发出生物萤光(bioluminescence) [ˌbaɪoʊlu:mɪˈnesns] 。
反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异 性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现 共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验 （luciferase assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重 要手段 • 1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因 质粒，如pGL3-basic等。 • （2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相 关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达， 荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。 • （3） 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检 测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启 动子片段有作用。
与其他荧光素梅相比，使用Gaussia luciferase作为报告基因有更多的优势： 分泌型荧光素酶，可直接取上清检测，无须裂解细胞 • 发光强度高，是其它荧光素酶的1千倍 • 反应无须ATP，不受ATP影响 • 稳定性高，对温度、PH值等耐受性强
应用
主要应用领域： 1、荧光素酶标记基因-潜在启动子/启动子核心区域检测； 2、潜在增强子/抑制子等调控子核心元件检测； 3、启动子区可能的转录因子结合位点检测； 4、启动子/增强子与转录因子的相互作用； 5、病毒/细胞相互作用-荧光素酶标记细胞； 6、药物等化学诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）； 7、射线等物理诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）； 8、荧光素酶标记微生物
• 内含子（intron）是真核生物细胞DNA中的间插序列。这些序列被转录在前体RNA中，经过剪 接被去除，最终不存在于成熟RNA分子Biblioteka Baidu。内含子和外显子的交替排列构成了割裂基因。在 前体RNA中的内含子常被称作“间插序列”。
• 外显子(expressed region)在剪接(Splicing)后仍会被保存下来，并可在蛋白质生物合成过程中被 表达为蛋白质。外显子是最后出现在成熟RNA中的基因序列，又称表达序列。既存在于最初 的转录产物中，也存在于成熟的RNA分子中的核苷酸序列。
参与反应： AUGC 模板 RNA聚合酶 其他蛋白质
转录的基本过程包括：模板的识别，转录起始，转录延伸，转录终止
转录特点： RNA按照5-3方向合成 以DNA双链中的反义链为模板 不需要引物 合成的RNA有与DNA编码链相同的序列A-U
A. 模板的识别 模板的识别阶段主要指RNA聚合酶与启动子DNA双链
• DNA即脱氧核糖核酸（英文Deoxyribonucleic acid的缩写）, 主要遗传物质。由双链结构，由脱 氧核糖核苷酸（成分为：脱氧核糖、磷酸及四种含氮碱基ATCG）组成
• RNA 核糖核酸。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子 由磷酸，核糖和碱基构成。ACGU
新生RNA链和RNA聚合酶将被释放下来。这即是转录终止。
启动子
启动子是一段位于结构基因5’端上游区的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使 之与模板DNA准确地结合，并具有转录起始的特异性。
转录因子
• 转录因子(transcription factor)是一群能与基因5`端上游特定序列专一性结合， 从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子。
泡以促使核糖核苷酸与模板DNA配对。 转录起始即是RNA链上第一个核苷酸键的产生。 无需引物。 起始后直到形成9个核苷酸的过程是通过启动子阶段，此时RNA聚合酶一直在启
动子处，之后进入正常延伸。 C. 转录延伸
转录延伸即是RNA聚合酶释放σ因子离开启动子后，核心酶沿着模板DNA移动并 使新生RNA链不断伸长的过程。
D. 转录终止
当RNA链延伸到终止位点时，RNA将停止合成，转录泡瓦解，DNA链复原，新 生RNA链和RNA聚合酶将被释放下来。这即是转录终止。
C. 转录延伸 转录延伸即是RNA聚合酶释放σ因子离开启动子后，核心酶沿着模板DNA移
动并使新生RNA链不断伸长的过程。 D. 转录终止 当RNA链延伸到终止位点时，RNA将停止合成，转录泡瓦解，DNA链复原，
• UTR（Untranslated Regions）即非翻译区，是信使RNA（mRNA）分子两端的非编码片段。
• 5'-UTR从mRNA起点的甲基化鸟嘌呤核苷酸帽延伸至AUG起始密码子，3'-UTR从编码区末端的 终止密码子延伸至多聚A尾巴（Poly-A）的前端。
转录
以DNA为模板合成RNA的过程