临床检验基础
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临床检验基础
第一章 血液一般检验
皖北卫生职业学院 王玲玲
第一节 血液标本采集与处理
一 血液标本类型
二
血液标本抗凝剂与添加剂
三
血液标本采集
四
血液标本运送、保存与处理
一、血液标本类型
静脉全血 动脉全血 末梢全血
1．全血
2．血浆 主要用于化学和凝血项目检测等。 3．血清 主要用于化学和免疫学等项目检测。
（一）皮肤采血法
（3）简要操作
材料准备 选择采血部位 按摩 消毒 针刺 吸血
止血
（一）皮肤采血法
（4）注意事项：
①采血时必须注意严格消毒和生物安全防范。
②采血针应为一次性使用的“专用采血针”，针刺深度以2～3mm为宜。 ③取血时可稍加挤压，但切忌用力过大，以免使过多组织液混入血液中。 ④采血要迅速，防止流出的血液发生凝固。 ⑤手工法血液标本采集顺序为：
（二）静脉采血法
（2）采血部位：
• 通常采用肘部静脉。 • 当肘部静脉不明显时，可采用手背部、 手腕部和外踝部静脉。 • 幼儿可采用颈外静脉采血， • 其它：股静脉、大隐静脉及锁骨下静脉等。 肘部静脉
（二）静脉采血法
（3）简要操作
材料准备 选择静脉 扎压脉带 消毒 穿刺
抽血
止血 放血与混匀
（二）静脉采血法
直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先倒掉染液） 123
涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞 李 四
第二节 血涂片的制备与染色
3.pH值的影响 细胞各种成分均属蛋白质（两性电解质）
第二节 血涂片的制备与染色
染色所用玻片必须清洁，无酸碱污染。 • 配制瑞氏染液必须用优质甲醇。 • 稀释染液必须用缓冲液。 • 冲洗用水应近中性。
血清与血浆比较，主要是前者缺乏纤维蛋白原及某些凝血因子。
4．血细胞
二、血液标本抗凝剂与添加剂
血液标本添加剂
抗凝剂
促凝剂
分离胶
（一）抗凝剂
抗凝：采用物理或化学的方法
去除或抑制某种凝血因子的活性，
以阻止血液凝固的方法称为抗凝。 抗凝剂：能够阻止血液凝固的 化学物质称为抗凝剂（anticoagulant） 血细胞 或抗凝物质。 我是血浆， 还是血清呢？
皮肤采血法，又称毛细血管采血法，主要用于需要微量血液检验 项目和婴幼儿血常规检验。
1、采血针皮肤采血法 （1）主要器材： 一次性采血针、 一次性采血针
微量吸管、
消毒用品等。
（一）皮肤采血法
（2）采血部位： • 一般采用手指指端或耳垂，
• 婴幼儿可选择������趾或足跟内外侧缘。
世界卫生组织（WHO）推荐采血 部位为左手中指或无名指指端内侧。 • 选择皮肤完好处采血。
临床用途
真空采血管 颜色
）
血栓与止血检验（1:9） 蓝色 血沉测定（1:4） 黑色 血液保养液 全血细胞分析 血细胞比容测定 临床生化项目
乙二胺四乙酸 EDTA-K2/K3/Na2
紫色 绿色 灰色
肝素 草酸钠
血细胞比容、血细胞 计数、网织红细胞计 数等 （不常用）
（二）添加剂
其它常用添加剂
真空采血 管颜色
• 新鲜配制的染料偏碱，须在室温贮存一定时间，贮存 时间愈久，染色效果愈好。
DeamGilliland 等采用吸光度比值 作为瑞氏染液的质量 规格。
第三节 白细胞显微镜检查
一 白细胞计数
二
白细胞分类计数
三
白细胞形态检查
ຫໍສະໝຸດ Baidu
四
嗜酸性粒细胞计数
五
红斑狼疮细胞检查
第三节 白细胞显微镜检查
血浆
红细胞 血细胞 白细胞 血小板
添加剂
原理
激活纤维蛋白酶，使可溶性纤维蛋白 变成不可溶性的纤维蛋白聚体，进而 形成稳定的纤维蛋白凝块 离心后固化在血清与血块之间形成隔 离层，使血清和血细胞完全分离
临床用途
促凝剂
急诊化学检查
红色
分离胶
生化、血库、 血清学等相关检验
黄色
三、血液标本采集
皮肤采血法
血液标本采集
静脉采血法
动脉采血法
（一）皮肤采血法
穿刺针端穿刺
（二）静脉采血法
（4）注意事项：
①使用前切勿松动或拔除采血管的胶塞头盖。 ②刺塞针端的乳胶套能防止拔除采血试管后继续流血污染周围环境，达到封闭采 血防止污染环境的作用，因此不可取下乳胶套。
③采血完毕后，先拔下刺塞针端的采血试管，后拔穿刺针端。
④一次采血，使用玻璃采血管多管采集血液标本的分配顺序为：血培养管、无抗 凝剂血清管、枸橼酸钠抗凝管、其他抗凝剂管； 使用塑料采血管分配顺序：血培养管（黄色）、枸橼酸钠抗凝管（蓝色）、加或 未加促凝剂或分离胶的血清管、加或未加分离胶的肝素管（绿色）、EDTA抗凝 管（紫色）、加葡萄糖分解抑制剂管（灰色） 。
• 血清：对未含促凝剂或分离胶采血管的血液标本置于37℃孵育， 待血液完全凝固后离心分离血清；
• 含促凝剂或分离胶采血管的血液标本可直接离心分离血清；
• 对于需要特定细胞的实验，应根据要求采用不同的细胞分离液 或分离技术分离细胞，同时尽量避免混入其他细胞。
四、血液标本运送、保存与处理
保存： 1．分离后标本 ①不能及时检验或需保留标本，一般应将标本置于4℃冰箱内保存。 ②标本需保存至少1个月时，放置于-20℃冰箱内保存。 ③标本需保存至少3个月时，分离后置于-70℃冰箱保存。 ④标本存放时需要密封，以免水分挥发而使标本浓缩。 ⑤标本应避免反复冻融。
（三）动脉采血法
1．主要器材 ：
2ml或5ml注射器 （准备l000U/ml无菌肝素生理盐水溶液，
以湿润注射器内腔、橡皮塞），
或一次性动脉采血针、消毒用品等。 2．采血部位 多选用桡动脉（最方便） 股动脉、肱动脉。 3．简要操作 桡动脉采血
（三）动脉采血法
4. 注意事项：
①隔绝空气：用于血气分析的标本，采集后先立即封闭针头斜面，再混匀标本。
（二）静脉采血法
2、负压采血法
又称为真空采血法 。
（1）主要器材：
负压采血系统 双向采血针
真空采血管
（2）采血部位： 同普通采血法。
套管式 一次性采血针
头皮静脉式 一次性采血针
（二）静脉采血法
（3）简要操作 材料准备 止血
选择静脉
扎压脉带 消毒
退出穿刺针端针头
混匀或不混匀血液 退出刺塞针端针头 刺塞针端刺入采血管
②立即送检：标本采集后应立即送检，否则应将标本置于2～6℃保存，
但保存时间不应超过2小时。
③防止血肿：采血完毕，拔出针头后，用消毒干棉签用力按压采血处止血，
以防形成血肿。
四、血液标本运送、保存与处理
运送
预处理与保存
血液标本
接受与拒收
检验后保存与处理
四、血液标本运送、保存与处理
唯一标识原则
（一） 血液标本运送
中性粒细胞
嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞
血液
淋巴细胞
单核细胞
一、白细胞计数
白细胞计数（white blood cell count）是指测定单位体积外周血中 各种白细胞的总数。 白细胞计数结果仅反映循环池中的细胞数量。
（一）方法 1．原理 白细胞显微镜计数法是将全血用稀酸溶液稀释一定倍数，使红细胞破坏后， 充入改良牛鲍（Neubauer）计数板内，在普通光学显微镜下计数一定范围 内的白细胞数，经换算求出每升血液内的白细胞总数。 2．白细胞稀释液 冰乙酸 亚甲蓝或结晶紫 蒸馏水 破坏红细胞，且使白细胞核固定清晰 使白细胞核略着色，便于识别
血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数及白细胞分类计
数、血型鉴定等。
其他，激光皮肤采血法
（二）静脉采血法
静脉采血法临床应用广泛，所采集的静脉血能准确反映全身血液的 真实情况，因其不易受气温和末梢循环变化的影响，更具有代表性。 普通采血法 负压采血法
1、普通采血法
即传统的静脉采血方法 。
（1）主要器材： 注射器、 试管、消毒用品等。
（4）注意事项：
①根据检验项目判断所需采血量，选择注射器。 ②严格执行无菌操作。 ③采血时切忌将针栓往回推，以免注射器中的空气进入血循环形成气栓。 ④为避免溶血，注射器和容器必须干燥，抽血时应避免产生大量气泡，抽血完毕
后应先拔下针头，然后将血液沿管壁徐徐注入容器，需要抗凝时应与抗凝剂轻轻
混匀，切忌用力振荡试管。 ⑤进行血小板功能试验，为了防止血小板激活，须使用塑料注射器或经硅化处理 后的玻璃试管或塑料试管。 ⑥采血一般取坐位或卧位，不能立位采血，因为体位影响水分在血管内外的分布， 影响被测血液成分的浓度。 ⑦压脉带捆扎时间不应超过1分钟，否则会使血液成分浓度发生改变。
③稀释倍数不准
④充池不当 ⑤白细胞计数不准确
第二节 血涂片的制备与染色
引起血涂片分布 不均的主要原因：
•推片边缘不整齐 •用力不均匀 •载片不清洁
第二节 血涂片的制备与染色
二、血涂片染色 (一)瑞氏染色法 (Wright's stain ) 1.瑞氏染料（复合染料） 酸性染料伊红 (E-) 碱性染料亚甲蓝 (M+，又名美蓝) 美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级 染料 (即天青) ， 甲醇的作用： ①溶解美蓝和伊红，解离为 M+和E- ； ②脱水作用，固定细胞形态，增强染色效果
第二节 血涂片的制备与染色
2 ．染色原理 是染料透入被染物并存留其内部的一种过程。
①物理的吸附作用
②化学的亲和作用
嗜酸性颗粒——碱性——与酸性染料——粉红色；
细胞核蛋白——酸性——与碱性染料——紫蓝色或蓝色； 中性颗粒——等电状态——与伊红和美蓝——染淡紫红色。
第二节 血涂片的制备与染色
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴 覆盖整个血膜1分钟 勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和 Ⅱ液充分混匀静置10分钟
2．立即送检标本
如血氨（密封送检）、红细胞沉降率、血气分析（密封送检）、 酸性磷酸酶、乳酸等标本。
四、血液标本运送、保存与处理
（四）血液标本检验后保存与处理
保 存
处 理
血液一般分析标本：室温24小时后处理， 一般生化检验项目：4℃存放7天后处理， 特殊检验项目：吸出血清或血浆-20℃冰 箱内保存1个月以上。 • 检验后废弃的血液标本处理严格按 照国家标准《实验室生物安全通用要 求》（GB19489-2004），由专人负 责处理，根据《医疗废物管理条例》 规定使用专用的容器或袋子包装，由 专人送到指定的地点集中处理。 • 检验后废弃的血液标本一般由专门 机构采用焚烧的办法处理。
• 保存检验标本时应包括标本信息的保
存， 且与分离的血浆或血清标本相对应。 • 保存原则是在有效的保存期内确保被 检测物质不会发生明显改变。
五、血液标本采集、运送与保存质量保证
（一）检验申请 （二）患者准备 （三）标本采集 （四）标本运送
第二节 血涂片的制备与染色
一
血涂片制备
二
血涂片染色
第二节 血涂片的制备与染色
将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚 薄取决于速度和角度：快、大(厚)。 慢、小（薄） 载玻片
推片
血液
一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明
涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号
B 123
李 四
第二节 血涂片的制备与染色
良好血液涂片标准
•厚薄要适宜，
•头体尾要明显， •细胞分布要均匀， •血膜边缘要整齐， •并留有一定的空隙。
一、白细胞计数
3．器材
（1）改良牛鲍计数板 （2）改良牛鲍计数板专用盖玻片（血盖片） （3）微量吸管 （4）显微镜
一、白细胞计数
Neubauer计数盘（牛鲍氏计数盘）
盖玻片
液面高度为 0.1 mm
血细胞计数板侧面观
大方格
中方格
小方格 每个大方格体积=1X1x0.1=0.1mm3= 0.1 μL
一、白细胞计数
4. 简要操作
0.38ml稀释液 20ul血液
混匀 充池、静置 镜下计数、计算
一、白细胞计数
计数：用低倍镜计数四个大方格内的白细胞数（N）。 计算：WBC/L=N/4 ×10 ×106 ×20
0.1μL — 1μL — 1L 稀释倍数
=N/20 X 109/L
一、白细胞计数
（二）质量保证 1．采血时间的影响 2．计数误差 （1）技术误差（technical errors） ①器材误差 ②采血与取血不当
（一）抗凝剂
常用抗凝剂
抗凝剂 枸橼酸钠 （柠檬酸钠 抗凝原理
与血液中的Ca2+结合形成可溶 性螯合物，使Ca2+失去凝血作 用，阻止血液凝固 与血液中的Ca2+结合形成螯合 物，使Ca2+失去凝血作用，阻 止血液凝固 加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活 丝氨酸蛋白酶作用 与血液中的Ca2+形成草酸钙沉 淀，阻止血液凝固
生物安全原则
及时运送原则
四、血液标本运送、保存与处理
溶血 转运条件不当
抗凝标本凝固
申请单和标本标识不一致
采集容器不当
（二） 血液标本拒收
标本污染、容器破损
采血量不足或错误
抗凝剂使用错误
四、血液标本运送、保存与处理
（三）血液标本预处理与保存
预处理： • 血常规检测：室温存放
• 血浆：可通过离心抗凝血获得血浆；
第一章 血液一般检验
皖北卫生职业学院 王玲玲
第一节 血液标本采集与处理
一 血液标本类型
二
血液标本抗凝剂与添加剂
三
血液标本采集
四
血液标本运送、保存与处理
一、血液标本类型
静脉全血 动脉全血 末梢全血
1．全血
2．血浆 主要用于化学和凝血项目检测等。 3．血清 主要用于化学和免疫学等项目检测。
（一）皮肤采血法
（3）简要操作
材料准备 选择采血部位 按摩 消毒 针刺 吸血
止血
（一）皮肤采血法
（4）注意事项：
①采血时必须注意严格消毒和生物安全防范。
②采血针应为一次性使用的“专用采血针”，针刺深度以2～3mm为宜。 ③取血时可稍加挤压，但切忌用力过大，以免使过多组织液混入血液中。 ④采血要迅速，防止流出的血液发生凝固。 ⑤手工法血液标本采集顺序为：
（二）静脉采血法
（2）采血部位：
• 通常采用肘部静脉。 • 当肘部静脉不明显时，可采用手背部、 手腕部和外踝部静脉。 • 幼儿可采用颈外静脉采血， • 其它：股静脉、大隐静脉及锁骨下静脉等。 肘部静脉
（二）静脉采血法
（3）简要操作
材料准备 选择静脉 扎压脉带 消毒 穿刺
抽血
止血 放血与混匀
（二）静脉采血法
直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先倒掉染液） 123
涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞 李 四
第二节 血涂片的制备与染色
3.pH值的影响 细胞各种成分均属蛋白质（两性电解质）
第二节 血涂片的制备与染色
染色所用玻片必须清洁，无酸碱污染。 • 配制瑞氏染液必须用优质甲醇。 • 稀释染液必须用缓冲液。 • 冲洗用水应近中性。
血清与血浆比较，主要是前者缺乏纤维蛋白原及某些凝血因子。
4．血细胞
二、血液标本抗凝剂与添加剂
血液标本添加剂
抗凝剂
促凝剂
分离胶
（一）抗凝剂
抗凝：采用物理或化学的方法
去除或抑制某种凝血因子的活性，
以阻止血液凝固的方法称为抗凝。 抗凝剂：能够阻止血液凝固的 化学物质称为抗凝剂（anticoagulant） 血细胞 或抗凝物质。 我是血浆， 还是血清呢？
皮肤采血法，又称毛细血管采血法，主要用于需要微量血液检验 项目和婴幼儿血常规检验。
1、采血针皮肤采血法 （1）主要器材： 一次性采血针、 一次性采血针
微量吸管、
消毒用品等。
（一）皮肤采血法
（2）采血部位： • 一般采用手指指端或耳垂，
• 婴幼儿可选择������趾或足跟内外侧缘。
世界卫生组织（WHO）推荐采血 部位为左手中指或无名指指端内侧。 • 选择皮肤完好处采血。
临床用途
真空采血管 颜色
）
血栓与止血检验（1:9） 蓝色 血沉测定（1:4） 黑色 血液保养液 全血细胞分析 血细胞比容测定 临床生化项目
乙二胺四乙酸 EDTA-K2/K3/Na2
紫色 绿色 灰色
肝素 草酸钠
血细胞比容、血细胞 计数、网织红细胞计 数等 （不常用）
（二）添加剂
其它常用添加剂
真空采血 管颜色
• 新鲜配制的染料偏碱，须在室温贮存一定时间，贮存 时间愈久，染色效果愈好。
DeamGilliland 等采用吸光度比值 作为瑞氏染液的质量 规格。
第三节 白细胞显微镜检查
一 白细胞计数
二
白细胞分类计数
三
白细胞形态检查
ຫໍສະໝຸດ Baidu
四
嗜酸性粒细胞计数
五
红斑狼疮细胞检查
第三节 白细胞显微镜检查
血浆
红细胞 血细胞 白细胞 血小板
添加剂
原理
激活纤维蛋白酶，使可溶性纤维蛋白 变成不可溶性的纤维蛋白聚体，进而 形成稳定的纤维蛋白凝块 离心后固化在血清与血块之间形成隔 离层，使血清和血细胞完全分离
临床用途
促凝剂
急诊化学检查
红色
分离胶
生化、血库、 血清学等相关检验
黄色
三、血液标本采集
皮肤采血法
血液标本采集
静脉采血法
动脉采血法
（一）皮肤采血法
穿刺针端穿刺
（二）静脉采血法
（4）注意事项：
①使用前切勿松动或拔除采血管的胶塞头盖。 ②刺塞针端的乳胶套能防止拔除采血试管后继续流血污染周围环境，达到封闭采 血防止污染环境的作用，因此不可取下乳胶套。
③采血完毕后，先拔下刺塞针端的采血试管，后拔穿刺针端。
④一次采血，使用玻璃采血管多管采集血液标本的分配顺序为：血培养管、无抗 凝剂血清管、枸橼酸钠抗凝管、其他抗凝剂管； 使用塑料采血管分配顺序：血培养管（黄色）、枸橼酸钠抗凝管（蓝色）、加或 未加促凝剂或分离胶的血清管、加或未加分离胶的肝素管（绿色）、EDTA抗凝 管（紫色）、加葡萄糖分解抑制剂管（灰色） 。
• 血清：对未含促凝剂或分离胶采血管的血液标本置于37℃孵育， 待血液完全凝固后离心分离血清；
• 含促凝剂或分离胶采血管的血液标本可直接离心分离血清；
• 对于需要特定细胞的实验，应根据要求采用不同的细胞分离液 或分离技术分离细胞，同时尽量避免混入其他细胞。
四、血液标本运送、保存与处理
保存： 1．分离后标本 ①不能及时检验或需保留标本，一般应将标本置于4℃冰箱内保存。 ②标本需保存至少1个月时，放置于-20℃冰箱内保存。 ③标本需保存至少3个月时，分离后置于-70℃冰箱保存。 ④标本存放时需要密封，以免水分挥发而使标本浓缩。 ⑤标本应避免反复冻融。
（三）动脉采血法
1．主要器材 ：
2ml或5ml注射器 （准备l000U/ml无菌肝素生理盐水溶液，
以湿润注射器内腔、橡皮塞），
或一次性动脉采血针、消毒用品等。 2．采血部位 多选用桡动脉（最方便） 股动脉、肱动脉。 3．简要操作 桡动脉采血
（三）动脉采血法
4. 注意事项：
①隔绝空气：用于血气分析的标本，采集后先立即封闭针头斜面，再混匀标本。
（二）静脉采血法
2、负压采血法
又称为真空采血法 。
（1）主要器材：
负压采血系统 双向采血针
真空采血管
（2）采血部位： 同普通采血法。
套管式 一次性采血针
头皮静脉式 一次性采血针
（二）静脉采血法
（3）简要操作 材料准备 止血
选择静脉
扎压脉带 消毒
退出穿刺针端针头
混匀或不混匀血液 退出刺塞针端针头 刺塞针端刺入采血管
②立即送检：标本采集后应立即送检，否则应将标本置于2～6℃保存，
但保存时间不应超过2小时。
③防止血肿：采血完毕，拔出针头后，用消毒干棉签用力按压采血处止血，
以防形成血肿。
四、血液标本运送、保存与处理
运送
预处理与保存
血液标本
接受与拒收
检验后保存与处理
四、血液标本运送、保存与处理
唯一标识原则
（一） 血液标本运送
中性粒细胞
嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞
血液
淋巴细胞
单核细胞
一、白细胞计数
白细胞计数（white blood cell count）是指测定单位体积外周血中 各种白细胞的总数。 白细胞计数结果仅反映循环池中的细胞数量。
（一）方法 1．原理 白细胞显微镜计数法是将全血用稀酸溶液稀释一定倍数，使红细胞破坏后， 充入改良牛鲍（Neubauer）计数板内，在普通光学显微镜下计数一定范围 内的白细胞数，经换算求出每升血液内的白细胞总数。 2．白细胞稀释液 冰乙酸 亚甲蓝或结晶紫 蒸馏水 破坏红细胞，且使白细胞核固定清晰 使白细胞核略着色，便于识别
血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数及白细胞分类计
数、血型鉴定等。
其他，激光皮肤采血法
（二）静脉采血法
静脉采血法临床应用广泛，所采集的静脉血能准确反映全身血液的 真实情况，因其不易受气温和末梢循环变化的影响，更具有代表性。 普通采血法 负压采血法
1、普通采血法
即传统的静脉采血方法 。
（1）主要器材： 注射器、 试管、消毒用品等。
（4）注意事项：
①根据检验项目判断所需采血量，选择注射器。 ②严格执行无菌操作。 ③采血时切忌将针栓往回推，以免注射器中的空气进入血循环形成气栓。 ④为避免溶血，注射器和容器必须干燥，抽血时应避免产生大量气泡，抽血完毕
后应先拔下针头，然后将血液沿管壁徐徐注入容器，需要抗凝时应与抗凝剂轻轻
混匀，切忌用力振荡试管。 ⑤进行血小板功能试验，为了防止血小板激活，须使用塑料注射器或经硅化处理 后的玻璃试管或塑料试管。 ⑥采血一般取坐位或卧位，不能立位采血，因为体位影响水分在血管内外的分布， 影响被测血液成分的浓度。 ⑦压脉带捆扎时间不应超过1分钟，否则会使血液成分浓度发生改变。
③稀释倍数不准
④充池不当 ⑤白细胞计数不准确
第二节 血涂片的制备与染色
引起血涂片分布 不均的主要原因：
•推片边缘不整齐 •用力不均匀 •载片不清洁
第二节 血涂片的制备与染色
二、血涂片染色 (一)瑞氏染色法 (Wright's stain ) 1.瑞氏染料（复合染料） 酸性染料伊红 (E-) 碱性染料亚甲蓝 (M+，又名美蓝) 美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级 染料 (即天青) ， 甲醇的作用： ①溶解美蓝和伊红，解离为 M+和E- ； ②脱水作用，固定细胞形态，增强染色效果
第二节 血涂片的制备与染色
2 ．染色原理 是染料透入被染物并存留其内部的一种过程。
①物理的吸附作用
②化学的亲和作用
嗜酸性颗粒——碱性——与酸性染料——粉红色；
细胞核蛋白——酸性——与碱性染料——紫蓝色或蓝色； 中性颗粒——等电状态——与伊红和美蓝——染淡紫红色。
第二节 血涂片的制备与染色
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴 覆盖整个血膜1分钟 勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和 Ⅱ液充分混匀静置10分钟
2．立即送检标本
如血氨（密封送检）、红细胞沉降率、血气分析（密封送检）、 酸性磷酸酶、乳酸等标本。
四、血液标本运送、保存与处理
（四）血液标本检验后保存与处理
保 存
处 理
血液一般分析标本：室温24小时后处理， 一般生化检验项目：4℃存放7天后处理， 特殊检验项目：吸出血清或血浆-20℃冰 箱内保存1个月以上。 • 检验后废弃的血液标本处理严格按 照国家标准《实验室生物安全通用要 求》（GB19489-2004），由专人负 责处理，根据《医疗废物管理条例》 规定使用专用的容器或袋子包装，由 专人送到指定的地点集中处理。 • 检验后废弃的血液标本一般由专门 机构采用焚烧的办法处理。
• 保存检验标本时应包括标本信息的保
存， 且与分离的血浆或血清标本相对应。 • 保存原则是在有效的保存期内确保被 检测物质不会发生明显改变。
五、血液标本采集、运送与保存质量保证
（一）检验申请 （二）患者准备 （三）标本采集 （四）标本运送
第二节 血涂片的制备与染色
一
血涂片制备
二
血涂片染色
第二节 血涂片的制备与染色
将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚 薄取决于速度和角度：快、大(厚)。 慢、小（薄） 载玻片
推片
血液
一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明
涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号
B 123
李 四
第二节 血涂片的制备与染色
良好血液涂片标准
•厚薄要适宜，
•头体尾要明显， •细胞分布要均匀， •血膜边缘要整齐， •并留有一定的空隙。
一、白细胞计数
3．器材
（1）改良牛鲍计数板 （2）改良牛鲍计数板专用盖玻片（血盖片） （3）微量吸管 （4）显微镜
一、白细胞计数
Neubauer计数盘（牛鲍氏计数盘）
盖玻片
液面高度为 0.1 mm
血细胞计数板侧面观
大方格
中方格
小方格 每个大方格体积=1X1x0.1=0.1mm3= 0.1 μL
一、白细胞计数
4. 简要操作
0.38ml稀释液 20ul血液
混匀 充池、静置 镜下计数、计算
一、白细胞计数
计数：用低倍镜计数四个大方格内的白细胞数（N）。 计算：WBC/L=N/4 ×10 ×106 ×20
0.1μL — 1μL — 1L 稀释倍数
=N/20 X 109/L
一、白细胞计数
（二）质量保证 1．采血时间的影响 2．计数误差 （1）技术误差（technical errors） ①器材误差 ②采血与取血不当
（一）抗凝剂
常用抗凝剂
抗凝剂 枸橼酸钠 （柠檬酸钠 抗凝原理
与血液中的Ca2+结合形成可溶 性螯合物，使Ca2+失去凝血作 用，阻止血液凝固 与血液中的Ca2+结合形成螯合 物，使Ca2+失去凝血作用，阻 止血液凝固 加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活 丝氨酸蛋白酶作用 与血液中的Ca2+形成草酸钙沉 淀，阻止血液凝固
生物安全原则
及时运送原则
四、血液标本运送、保存与处理
溶血 转运条件不当
抗凝标本凝固
申请单和标本标识不一致
采集容器不当
（二） 血液标本拒收
标本污染、容器破损
采血量不足或错误
抗凝剂使用错误
四、血液标本运送、保存与处理
（三）血液标本预处理与保存
预处理： • 血常规检测：室温存放
• 血浆：可通过离心抗凝血获得血浆；