免疫学实验课 沉淀反应

+
1 3
2 4
-
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电场力 电渗力
Ab
pH8.6 合力 移动方向
Ag
pI～7.5
pI～4.8
琼脂糖：在pH8.6的缓冲液中带负电
与琼脂糖接触的可移动液体：带正电
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对流免疫电泳
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双向免疫扩散实验 (操作)
1 6 Ag
2 3 6
1
2
1. 琼脂板的制备 (35ml) ； 2. 打孔； 3. 加样； 4. 湿盒扩散；37C， Note 24h
沉淀原，沉淀素。 环状法、絮状法、琼脂扩散法
类型： ★单向免疫扩散 ★双向免疫扩散 ★对流免疫电泳 ★免疫比浊法
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抗原抗体反应的特点（比例合适!） 1. 特异性 2. 可见性 3. 可逆性
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(三) 影响抗原抗体反应的因素 1.温度： 一般最适温度为37℃ 4℃，过夜
2.电解质：常用生理盐水 离子强度，盐析
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实验室规则－要点
实验课要求
遵守上述规则 必备物品：实验指导、实验报告、红蓝铅笔、白 大褂 注意保护自己、爱惜实验室仪器和设施


按照实验要求，认真完成实验并如实记录实验报 告 实验结束后整理本组的台面 实验废弃物分类（污染/潜在污染物、普通废弃物） 放置； 在确认普通废弃物没有着火隐患后，倒入垃圾桶 3
3.pH：一般最适pH6-8 电荷，等电点
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(1)单向免疫扩散
• 抗原的定量技术 • Method: Ab- in gel Ag- in well
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该方法常用于患者血样中IgG、IgM以及C3含量的检测 Q: 如使用单向免疫扩散试验检测患者血样中的IgG，那 么患者血样是放在琼脂糖胶中，还是放入孔中？
Ag
5 4
3
5
4
中央孔加抗AFP血清， 1、4孔加阳性对照， 2、3、5、6孔加待检
1块玻片上打2套孔，选较好的进行后续试验； 注意检查加样样品是否正确，加样时勿溢出； 将玻片的左上切去一小角，按上图顺序加样； 加样时注意检查试管和吸管标识，勿将吸管放错。
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(2)双向免疫扩散
• 抗原或抗体的定性、组成和两种抗原的相关性分析。 • 抗原抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向四周扩散 ;两者相遇时在比例合适处形成沉淀线。
抗体
抗原
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双向琼脂扩散试验
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(3)对流免疫电泳检测血清中AFP
• 1、3孔加抗AFP抗 体 • 2孔，AFP阳性对照 血清 • 4孔，待检血清 pH 8.6巴比妥缓冲液
免疫学诊断、沉淀反应
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实验室规则－要点
实验室安全－门窗、水、电、火源
实验结束后关闭门窗、水、电、火源 酒精灯和易燃物的使用注意事项；棉塞着火须报 告老师 电源－空气开关 水的使用
实验室安全－生物安全
白大褂的穿着要求 不得将实验无关物品带入实验室 不得在实验室内饮食 不得擅自开UV灯 污染及潜在污染物品须进行消毒处理


实验室规则－要点
值日生的职责：
检查实验台面的整理 整理实验室及垃圾 关闭所有非必需的电器和电源 逐一检查并确认水槽水龙头的关闭 关闭窗、门 最后离开实验室
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本次实验内容
1. 录像 2. 双向免疫扩散试验（操作）
3. 对流免疫电泳（示教）
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沉淀反应:
可溶性抗原（血清蛋白质、细胞裂解液、组织浸液、微生 物蛋白等）与相应抗体，在一定的抗原抗体比例下，在一定离 子浓度的缓冲体系中，发生结合后出现沉淀物称沉淀反应。