流式细胞研究分析和混合淋巴细胞反应实验中小鼠脾脏的摘取(图文解说)

流式细胞分析和混合淋巴细胞反应实验中小鼠脾脏的摘取（图文解说）

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准备眼科镊和眼科剪若干 （文中笔者使用眼科

流式细胞分析和混合淋巴细胞反应实验中

小鼠脾脏的摘取

最近老婆要提取脾脏细胞做流式，我就做个简单的解说，也顺便传到网上供菜鸟理解， 如果有大神看到这篇文章，也欢迎指导。大家一起讨论，把实验做得更好。

无论是做混合淋巴细胞反应或者流式细胞分析都要用到脾脏。小鼠的脾脏摘取颇为简 单，但有很多同学是第一次接触，所以在此做一个简单的图文讲解。在此讲解不甚详细，具 体步骤请同学参照网上已有各种

Protocol,本文重点在于图文解说，让大家对照图片和其他

Protocol 更好的理解脾脏的摘取。

小鼠处死后泡酒精 2-3分钟，泡久了细胞会缩水， 泡的时间短了起不到消毒杀菌的 作用

摆好小鼠体位，取右侧卧位。

沿着小鼠左侧肋骨走行方向做切口。

直镊3把，眼科剪2把）

四，向小鼠左后背方探查，在皮下很浅的地方可见深红色脾脏。脾脏走行向与肋骨方向近似平行

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五, 用镊子轻轻提起脾脏。脾脏下会连着许多结缔组织，轻轻把它们撕掉。

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放于培养皿中【事先在培养皿中放入 PBS （混淋）或红裂（流式）和200 白色的为后面要

用到的过滤

六，完整摘下脾脏， 目的铁丝网】 如下右图所示，银色的为本步骤中使用的铁丝网, 膜

七，一把新的眼科剪和一把新的眼科镊（新消毒过的。本文所用的为新高压的），把脾脏在培养皿里剪成小块。然后用 2.5ml或5ml注射器柄，把脾脏研磨成细胞。研磨过程

要轻柔，否则会损伤脾脏中的细胞。

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八, 研磨至培养皿中不见整块脾脏，只剩一些不能磨碎的结缔组织为止。

九，再加入4ml红细胞裂解液，冲洗铁丝网，注射器内芯，并用枪头吹打混匀，裂解5mi n

十，将液体一并转入15ml离心管中，400g,5min,离心

十^一, 弃去上清，加入5ml含10%FBS的1640 ,重悬，用装有200目的尼龙滤膜过滤(可过滤两次);尼龙滤膜就是第六步中右图的白色滤膜。

十二，滤液离心400g,5min,弃上清，加入1ml含10%FBS勺1640,重悬混匀，稀释50(20+980) 倍计数，；

至此，脾脏细胞就算提取完成了。后面几步没有上图，但做过实验的同学很容易就能理解是

怎么回事啦。