药敏试验纸片法的抑菌范围解释标
药敏试验纸片法的抑菌范围解释标准
杭州微生物试剂有限公司
抗生素
针对病原菌纸片含量
ug/片
抑菌环直径
抗生素
针对病原菌
纸片含量
ug/片
抑菌环直径
敏感S
耐药R 中介1 耐药R 中介1 敏感S
性内酰胺类头抱氨苄（先锋W）30 <14 15-17 >18
青霉素类头抱唑啉（先锋V）30 <14 15-17 >18
氨苄西林10 头抱拉定（先锋W）30 <14 15-17 >18
测肠杆菌科细菌<13 14-16 >17 头抱克罗（希刻劳）30 <14 15-17 >18
测葡萄求菌<28 -- >29 测嗜血杆菌<16 17-19 >20
测肠球菌<16 -- >17 头抱羟唑30 <14 15-17 >18
测产单核李斯特<19 -- >20 头抱吡肟（马斯平）30 <14 15-17 >18
测嗜血杆菌<18 19-21 >22 测嗜血杆菌-- -- >26
测伕溶血性链球菌<18 19-25 >26 测淋病奈瑟菌-- -- >31
阿洛西林（Azlocillin ）75 头抱克肟（世福素） 5 <15 16-18 >19
测铜绿假单胞菌<17 -- >18 测嗜血杆菌-- -- >26
羧苄西林
100
测淋病奈瑟菌-- -- >31
测铜绿假单胞菌<13 14-16 >17 头抱美唑30 <12 13-15 >16
测其他革兰氏阴性杆菌<19 20-22 >23 头抱哌酮（先锋必）75 <15 16-20 >21
美洛西林75 头抱噻肟（凯福隆）30 <14 15-22 >23
测铜绿假单胞菌<15 -- >16 测嗜血杆菌-- -- >26
测其他革兰氏阴性杆菌<17 18-20 >21 测淋病奈瑟菌-- -- >31
苯唑西林
1
测其他链球菌<25 26-27 >28
测葡萄球菌<10 11-12 >13 头抱西丁30 <14 15-17 >18
测凝固酶阴性葡萄球菌<17 -- >18 测淋病奈瑟菌<23 24-27 >28
测肺炎链球菌-- -- >20 头抱他啶（复达欣）30 <14 15-17 >18
青霉素10U 测嗜血杆菌-- -- >26
测葡萄球菌<28 -- >29 测淋病奈瑟菌-- -- >31
测肠球菌<14 -- >15 头抱唑肟（盖保世灵）30 <14 15-19 >20
测产单核李斯特菌<19 -- >20 测嗜血杆菌-- -- >26
测淋病奈瑟菌<26 27-46 >47 测淋病奈瑟菌-- -- >38
测其他链球菌<19 20-27 >28 头抱三嗪（菌必治）<13 14-20 >21
哌拉西林钠（氧哌嗪）
100
测嗜血杆菌-- -- >26
测铜绿假单胞菌<17 -- >18 测淋病奈瑟菌-- -- >31
测其他革兰氏阴性杆菌<17 18-20 >21 测肺炎链球菌
替卡西林75 以外的其他链球菌<25 25-26 >27
测铜绿假单胞菌<14 -- >15 头抱肤肟酯（口服）30 <14 15-22 >23
测其他革兰氏阴性杆菌<14 15-19 >20 头抱肤肟（西力欣）30 <14 15-22 >23
性内酰胺类/ 3内酰酶抑制剂
阿莫西林/克拉维酸20/10
测葡萄球菌<19 -- >20
测其他菌<13 14-17 >18
测嗜血杆菌<19 -- >20
哌拉西林/他唑巴坦（特治
星）
100/10
测铜绿假单胞菌<17 -- >18
测其他革兰氏阴性杆菌<17 18-20 >21
测葡萄球菌<17 -- >18
氨苄西林/舒巴坦（优立新）10/10
测革兰氏阴性肠道菌
和葡萄球菌<11 12-14 >15
测嗜血杆菌<19 -- >20
替卡西林/克拉维酸（特美
汀）
75/10
测铜绿假单胞菌<14 -- >15
测其他革兰氏阴性杆菌<14 15-19 >20
测葡萄球菌<22 -- >23
头抱类（包括头抱菌素，头霉素，碳头抱烯类和氧头抱烯
类）
头抱噻吩（先锋I）30 <14 15-17 >18
抗生素纸片含量抑菌环直径
针对病原菌ug/片耐药R 中介敏感S 庆大霉素
测肠球菌高水平耐药120 6 7-9 >10 测其他细菌10 <12 13-14 >15 卡那霉素30 <13 14-17 >18 乙基西梭霉素（奈替米星）30 <12 13-14 >15 链霉素
测肠球菌高水平耐药300
6
7-9 >10 测其他细菌10 <11 12-14 >15
妥布霉素
10 <12 13-14 >15 大观霉素
测淋病奈瑟菌100 <14 15-17 >18 新霉素30 <12 13-16 >17 大环内酯类
阿齐霉素15 <13 14-17 >18 测嗜血杆菌-- -- >12 测肺炎链球菌以外的
其他链球菌<13 14-17 >18 测嗜血杆菌
测淋病奈瑟菌
<16 17-19 >20
>38 氯碳头抱30 <14 15-17 >18 拉氧头抱（噻吗灵）30 <14 15-22 >23
碳青霉烯类
亚胺培南
10
<13 14-15 >16 单酰胺菌素类
氨曲南（单环菌素）30 <15 16-21 >22 测嗜血杆菌-- -- >26 糖肽类
壁霉素（替考拉宁）30 <10 11-13 >14 万古霉素30
测肠球菌<14 15-16 >17 测其他链球菌-- -- >17 测其他革兰氏阳性球菌<910-11 >12 杆菌肽10U <89-12 >13 氨基糖疳类
丁胺卡那（阿米卡星）30 <14 15-16 >17 抗生素纸片含量抑菌环直径
针对病原菌ug/片耐药R 中介1 敏感S 氟罗沙星 5 <15 16-18 >19
测淋病奈瑟菌<27 28-32 >33
左旋氧氟沙星 5 <13 14-16 >17
测肺炎链球菌<13 14-16 >17
洛美沙星18 <10 19-21 >22
测淋病奈瑟菌-- -- >36
萘啶酸30 <13 14-18 >19
诺氟沙星（氟哌酸）10 <12 13-16 17
氧氟沙星（奥复星） 5 <12 13-15 >16
测淋病奈瑟菌-- -- >31
测肺炎链球菌和3-
溶血型链球菌<12 13-15 >16
氯霉素30 <12 13-17 >18
测嗜血杆菌<25 26-28 >29
测肺炎链球菌<20 -- >21
测其他链球菌<17 18-20 >21
克林霉素（氯洁霉素） 2 <14 15-20 >21
克拉霉素15 <13 14-17 >18 测链球菌<15 16-18 >19
测嗜血杆菌<10 11-12 >13 呋喃妥因300 <14 15-16 >17
测链球菌<16 17-20 >21 呋喃唑酮（痢特灵）300 <14 15-16 >17
红霉素15 <13 14-22 >23 利福平 5 <16 17-19 >20
测链球菌<15 16-20 >21 测嗜血杆菌<16 17-19 >20
麦迪霉素30 <13 14-17 >18 测肺炎链球菌<16 17-18 >19
四环素类磷霉素
200
四环素30 <14 15-18 >19 测肠球菌<12 13-15 >16
测嗜血杆菌<25 26-28 >29 磺胺250 或300 <12 13-16 >17 测淋病奈瑟菌<30 31-37 >38 甲氧卞胺嘧啶（TMP ) 5 <10 11-15 >16
测链球菌<18 19-22 >23 新生霉素30 <12 13-16 >17
多西环素（强力霉素）30 <12 13-15 >16 多粘菌素B 300 <8 8-11 >12 二甲胺四环素（美满霉素）30 <14 15-18 >19 加替沙星 5
喹诺酮类测葡萄球菌<19 20-22 >23
环丙沙星 5 <15 16-20 >21 测肠杆菌<14 15-17 >18
测嗜血杆菌-- -- >21 嗜血杆菌>18 敏感
测淋病奈瑟菌-- -- >36 头抱匹胺75 <15 16-20 >21
依诺沙星（氟啶酸）10 <14 15-17 >18 交沙霉素15 <13 14-22 >23
测淋病奈瑟菌-- -- >32 氟苯尼考30 <12 13-17 >18
测嗜血杆菌<25 26-28 >29
测肺炎链球菌<20 -- >21
测其他链球菌<17 18-20 >21 抗菌药物名称含量ug/片大肠杆菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌ATCC25922 ATCC25923 ATCC27853
阿莫西林
10
19-25 28-36 —
舒普深（先锋必/舒巴坦）75/75 28-34 24-33 23-29
吉他霉素（柱晶白霉素）15 —22-30 —
罗红霉素15 —22-30 —
乙酰螺旋霉素30 —22-30 —
磺胺甲基异恶唑（磺胺嘧啶）250/300 5-23 24-32
—
—
—
复方新诺明SMZ/TMP 3.75/1.25 24-32 24-32 粪链ATCC29212 或33186 24-32
吡哌酸30 22-28 —
—
—
—
洁霉素（林可霉素）
2
24-30
二性霉素B 30 白念15-25
制霉菌素100 白念15-25
灭滴灵（甲硝唑 5 >16mm 敏感
庆大霉素（高浓度）120 粪肠球菌S> 10mm RC6mm
0/129 （二氨基二异丙基喋啶）10 气单胞菌R w 16mm （耐药）邻单胞菌S> 18mm （敏感）弧菌属S 150有抑菌环出现即为敏感
奥普托欣（乙基氢化羟基宁） 5 肺炎链球菌+ >15mm 草链—
0NPG 80 肺克+ 宋内氏+ 伤寒一鼠伤寒一美罗培南10 18-34 29-37 27-33
伊曲霉素8 白念15-25
28-36 22-28 22-28
恩诺沙星
10
(推荐)纸片扩散法药敏试验
纸片扩散法药敏试验 纸片扩散法（K-B法）药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片，培养一段时间后测量抑菌圈大小，并根据相关解释标准进行结果分析，从而得出受试菌株药物敏感性的结论。 中文名 纸片扩散法药敏试验 临床意义 得出受试菌株药物敏感性的结论 目录 .1试验原理 .2试验步骤 .3结果分析 .4注意事项 基本信息 中文名 纸片扩散法药敏试验 临床意义 得出受试菌株药物敏感性的结论 试验原理 纸片扩散药敏试验的原理：将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过抗菌药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。 试验步骤
1. 待测菌株接种物制备 （1）通用情况：从过夜孵育的平板，优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。 （2）特殊情况：嗜血杆菌属（本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌）：从过夜孵育的HTM平板，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。 2.接种平板 （1）调整好悬液的浊度后，用无菌棉签浸入悬液内，紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体，但也应适度。 （2）用拭子划线整个琼脂表面，从平板顶部到底部，均匀涂布，重复两次此过程（一共三次）每次旋转平板约60度，确保每次接种菌液均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈，防止有流动的菌悬液，并使菌液涂布于整块平板的每个角落。 （3）涂布菌液完成的平板，可在室温放置一会（3-5分钟），以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分，但放置时间不应超过15分钟。 3.放置测试药敏纸片 根据测试菌的不同，按照预先设定的分组，将抗菌药物纸片贴于已接种细菌的琼脂表面，每个纸片必须压下以确保与琼脂表面完全接触无论是单独放置的纸片或有纸片分配设备纸片必须分布均匀，两纸片之间圆心的距离不少于24mm，纸片边缘距离琼脂边缘不少于15mm。我室使用的MH平板直径为90mm，放置不超过5块纸片。由于一些药物几乎是瞬间扩散的，因此，一旦纸片与琼脂表面接触就不能再移动位置，若位置不佳可在琼脂的另一个位置重新放置一个纸片。 4.孵育 （1）通用情况：在放置好纸片后，15分钟内，将MH琼脂倒置于号孵箱（35℃）中，孵育16～18小时（除外下面列出的需要延长孵育时间的情况）。嗜血杆菌属、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌和链球菌KB纸片法测试平板应放置于含有5% CO2的环境进行孵育。 （2）延长时间培养：①测试苯唑西林、头孢西丁对葡萄球菌的敏感性时，孵育时间必须达到24h，才能满足对结果判断的要求。②测试万古霉素对金黄色葡萄球菌及肠球菌属的敏感性，孵育时间必须达到24小时。 5.抑菌环直径测量 （1）通用情况：35℃，经过16～18小时的孵育后，将贴有纸片的MH平板置于黑色不反光的背景上，采用游标卡尺，来测量抑菌环的直径（完全抑制区的直径），可以从平板的背面，利用反射光，用肉眼观测，读取最接近的毫米数（读取一个整数）。没有肉眼可见的明显的生长的部位即是抑菌环的边缘。一般情况下，在抑菌环边缘出现只能在放大镜下观察到的微小菌落，可以忽略不计。 MH平板上的抑菌环呈均匀的圆形，测试菌株在平板上呈现融合生长菌苔，若出现单个菌落稀疏生长的情况，则说明接种时调制的菌液浓度过稀，需要寻找可能的原因，并重新再一次进行测试。 （2）特殊情况：①苯唑西林对葡萄球菌的抑菌环：抬起平皿，对向光源，利用透射光观察苯唑西林纸片周围的抑菌环中是否有任何细微的菌落生长，若是出现任何可以辨别的生长，均应判定苯唑西林耐药。②利奈唑胺对葡萄球菌的抑菌环：利用透射光，用游标卡尺读取抑菌环的数值。③复方新诺明的抑菌环：MH平板中存在一定量叶酸抑制剂的拮抗剂，会导致测试菌轻微的生长，因此，在测量复方新诺明的抑菌环直径时应当忽略细微的生长情况（约20%），而将明显出现生长的地方作为抑菌环的边界进行测量。 结果分析
药敏试验方法1
药敏试验方法： K-B法： 1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。 2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。 3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。 4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。 5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。 6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。 说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法. 肺炎链球菌胶乳凝集测定法 1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。 2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidexpneumo-kit)于室温。 3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。 4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。 5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。 注：R3为阳性对照。 药敏纸片的选择 1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科） 头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ） 氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN） 头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM） 庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA） 头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB） 奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ） 亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC） 2、铜绿假单孢菌/不动杆菌 妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT） 头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟 头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ） 左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦 3、金黄色葡萄球菌 苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN） 红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP） 万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦 头孢噻吩（CF） 4 、肠球菌 氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP） 庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL） 5、除肺炎链球菌外链球菌 氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素
纸片法药敏试验相关知识
纸片法药敏试验相关数据 表一纸片法药敏试验纸片含药量和结果解释（肠杆菌科、铜绿假单胞菌）抗菌药物纸片含药量抑菌圈直径(mm) 耐药中介敏感青霉素G 10unit ≤28 －≥29 氨苄青霉素30ug ≤13 14～16 ≥17 苯唑青霉素1ug ≤10 11～12 ≥13 氧哌嗪青霉素100ug ≤17 －≥18 先锋Ⅵ* 30ug ≤14 15~17 ≥18 先锋Ⅴ30ug ≤14 15~17 ≥18 复达欣30ug ≤14 15～17 ≥18 阿莫西林* 100ug ≤19 20～22 ≥23 氨苄西林/舒巴坦10/10ug ≤11 12～14 ≥15 丁胺卡那霉素30ug ≤14 15～16 ≥17 庆大霉素10ug ≤12 13～14 ≥15 复方新诺明 1.25/23.75ug ≤10 11～15 ≥16 万古霉素* 30ug －－≥17 诺氟沙星10ug ≤12 13～16 ≥17 安灭菌20/10ug ≤13 14～17 ≥18 克林霉素2ug ≤14 15～20 ≥21 克拉霉素15ug ≤13 14～22 ≥23 氯霉素30ug ≤12 13～17 ≥18 表二纸片法药敏试验纸片含药量和结果解释（葡萄球菌）抗菌药物纸片含药量抑菌圈直径(mm) 耐药中介敏感青霉素G 10unit ≤28 －≥29 氨苄青霉素30ug ≤28 －≥29 苯唑青霉素1ug ≤10 11～12 ≥13 氧哌嗪青霉素100ug ≤17 －≥18 先锋Ⅵ* 30ug ≤14 15~17 ≥18 先锋Ⅴ30ug ≤14 15~17 ≥18 复达欣30ug ≤14 15～17 ≥18 阿莫西林* 100ug ≤19 20～22 ≥23 氨苄西林/舒巴坦10/10ug ≤11 12～14 ≥15 丁胺卡那霉素30ug ≤14 15～16 ≥17 庆大霉素10ug ≤12 13～14 ≥15 复方新诺明 1.25/23.75ug ≤10 11～15 ≥16 万古霉素30ug －－≥15 诺氟沙星10ug ≤12 13～16 ≥17 安灭菌20/10ug ≤19 －≥20 克林霉素2ug ≤14 15～20 ≥21 克拉霉素15ug ≤13 14～17 ≥18 氯霉素30ug ≤12 13～17 ≥18
药敏纸片的制备完整版
药敏纸片的制备 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】
药敏纸片的制备及药敏试验方法 抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。 一. 药敏纸片的制备 1.材料 抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等 2．方法 PBS的配制 A.制备L储备液 LNa 2HPO 4 ： +1000 mL蒸馏水 或 +1000 mL蒸馏水 L NaH 2PO 4 : +1000 mL蒸馏水 或 +1000 mL蒸馏水 B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用 L磷酸缓冲液的配制
抗菌药物原液的配制和保存期限 －20℃4℃抗菌药物溶剂浓度 （?g/mL） 青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周 PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸 盐 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉 素 12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再 用 PBS 1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再 用 PBS 12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用 PBS 万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周 12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺 溶解，再用蒸馏水 1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸 馏水稀释 各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期
纸片扩散法药物敏感试验
纸片扩散法药物敏感试验 若只根据是否出现抑菌环而不考虑抑菌环的直径大小来判断细菌是否对抗菌药物敏感的实验方法，其结果是不正确的。而纸片扩散法试验是应用标准的方法学原理，根据抑菌环直径大小与最低抑菌浓度的相关性，结合临床上已知敏感或耐药菌株的状态，其结果是可靠的。WHO推荐K-B法，其目的在于技术的简单和可重复性。本法特别适用于肠杆菌科细菌，也可用于快速生长的致病菌，但不适用于其他细菌，如嗜血杆菌、奈瑟菌、专性厌氧菌及酵母样菌等。 无论用哪种方法接种，只要质控菌株的抑菌环在预期范围内，均可按同一解释标准报告结果。但并非从感染患者分离到的微生物都必须做敏感试验，对于污染、机体共生的正常细菌群和那些与感染无关的细菌，可不必做敏感试验，只有那些被认为引起感染的微生物，应先分离提纯、鉴定菌种后再做敏感试验。 试验方法： 一、试验材料： (一)培养基： Kirby-Bauer法指定用Mueller-Hinton琼脂。多年大量的有关敏感试验的方法学研究，均采用该培养基；维持细菌正常发育，绝大多数细菌在此培养基上生长良好。此培养基不拮抗抗菌药物活性以及商品的批次间差异等方面均优于其他培养基。若检测肺炎链球菌的敏感性
时，须在培养基中加5％的脱纤维羊血，制成血平板。测嗜血杆菌及淋病奈瑟菌的敏感性时，在培养基中须加入1％血红素和 2.5mg/ml 辅酶I后应校正pH 7.2～7.4。 制备MH琼脂平板应用直径90cm平皿。在水平的实验台上倾制。琼脂厚为4mm，允许误差为土1mm。琼脂凝固后，应测一下pH。琼脂于板应放4℃保存，在7日内用完。若当天不用，用塑料袋密封包装贮藏于冰箱（2-8℃）。 每批平板都应抽样，在30-50℃下培养24h或更长时间检查是否被感染。 MH琼脂培养基配方(1L)： Beef Extract 2.0g Acid Hydrolysis of Casein 17.5g Starch 1.5g Agar 17.0g Final PH 7.3 at 25℃ 高压灭菌后立即水浴冷却至45-50℃。 (二)药物纸片 抗菌药物纸片直径约为6.00～6.35mm，每片的吸水量约20μl。采用K-B法，纸片的药物含量必须与该法规定的一致，不得任意更改。药物纸片可以购买，也可自制，用前必须做质量鉴定。用以下两个指标判定纸片的质量： 1、片间差：是衡量不同纸片含药是否均一的指标。 测定方法：以质控菌株接种M-H琼脂平板，一块平板上贴6张相同的纸片。35C过夜培养后，记录6个抑菌环直径，其最大和最小之
纸片法 KB 药敏实验原理及实际操作方法
纸片扩散药敏试验的原理：将含药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。药敏试验根据美国临床标准委员会 (NCCLS) 推荐的 K–B 琼脂法进行。本实验通过纸片药敏试验法观察多酸化合物对细菌有无抑制作用，为试管二倍稀释法提供有效基础数据。 用无菌棉拭子蘸取已经校正的 0.5 麦氏比浊浓度的菌液，挤掉多余菌液。用棉拭子涂布整个 MH 培养基表面，每次将平板旋转 60°，涂抹三次，最后沿周边擦绕两圈，以保证菌液涂抹均匀。待平板上的水分被琼脂完全吸收后贴含药纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴后不可再拿起。每个平板贴 5 张纸片，纸片间距不少于 24 mm，纸片中心距平皿边缘不少于 15 mm。在菌接种后 15 min内贴完纸片。将平板反转，37℃恒温孵育 18~24 h 后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，由平板背面测量最接近的整数毫米数并记录，每个平板各设三个平行组平板，测量抑菌直径时，应取三个平板的平均值为最终结果。抑菌环边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。 每次药敏试验用大肠杆菌 ATCC25922 和金黄色葡萄球菌 ATCC25923 做质控。药敏判读标准根据 CLSI 标准 (2009 年) 所载受试药对质控菌的抑菌环直径范围作为实验质控标准（判读标准见表 5-2）[84]。 表5-2 纸片扩散法－用质控菌株抑菌环直径(mm)允许范围监测抗菌药物敏感性试验准确性Table 5-2 Disc diffusion test － according the admissible range of quality-control strain’s inhibition zone diameter to monitor the accuracy of antibiotics susceptibility test (mm) 抗菌药物纸片含药量 （μg） 抑菌环直径(mm) S I R 大肠埃希菌 ATCC25922 金黄色葡萄球菌 ATCC25923 KF 30 ≥1815–17 ≤1416–22 27–35 AMP 10 ≥1714–16 ≤1328–35 27–28 CIP 5 ≥2116–20 ≤1530–40 22–30 NOR 5 ≥1713–16 ≤1215–21 29–37
药敏试验实验报告
药敏试验： 用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test 法），和自动化仪器等。 体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。 根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。 抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物
疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。 纸片扩散法 该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，而抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。 稀释法 稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.
纸片法抗菌药物敏感实验操作标准
纸片法抗菌药物敏感实验操作标准 4.３标准比浊管 用硫酸钡比浊管(０、5麦氏比浊标准),标定接种菌液浓度。比浊管制备方 法如下:(１)0、048mｏl/L BaＣｌ 2,(１、175% w／v BaＣｌ 2 ·2H 2 O)0、５ml, 加到99、5ml的０、18 mol/Ｌ(0.3６N)H 2SＯ 4 (1％v/ｖ)溶液中,制成比浊管;(2) 用光径为1cｍ的分光光度计测定光吸收来标定比浊管。0、5麦氏标准比浊管在６25nｍ波长的吸收光度应为0、0８-0、1;(3)选管径与制备菌液试管相同的螺口试管,每管分装4-6ml;(4)将试管帽拧紧,放室温暗处保存;(5)用前,将比浊管在旋转振荡器上混匀。如出现大颗粒,应更换;(6)每个月更换比浊管或复检比浊管的浊度。 ５操作步骤 5、1 制备接种菌液 5、1、１增菌法步骤如下:(1)选琼脂平板上形态相同的菌落至少4-5个,用接种环挑其顶部,移至4－5ml肉汤或大豆酪蛋白消化液中;(２)置35℃培养至菌液浓度达到或超过比浊管浓度(一般需2－6小时),浓度约1－２×10８CFU/ml;(３)用生理盐水或肉汤校正菌液浓度,与比浊管相同。可用光电比浊。目测比浊须在适当光照下以黑色线条为反衬。 5、１、2 直接菌悬液法步骤如下:(1)做常规药敏试验,可直接用过夜培养的菌落(必须用无选择性培养基平板,如普通琼脂培养基)在盐水或肉汤中制备接种菌液。菌液浓度调至0、5麦氏管;(2)此法适用于在肉汤培养基中生长不好的细菌如嗜血杆菌、淋病奈瑟氏菌与链球菌及葡萄球菌的甲氧苯青霉素或苯唑青霉素的耐药试验;(３)当用此法做复方磺胺药的试验时,从平板上直接挑菌落时会携带相当量的拮抗剂,造成敏感菌株的抑菌环内出现轻微的生长菌膜。 ５.2 接种平板步骤如下:(1)校正的菌液须在15分钟内使用。用一无菌棉试子蘸取菌液并在上端管壁旋转挤压几次,去掉过多的菌液;(2)用试子涂布整个琼脂平板表面,反复涂布几次,每次将平皿旋转60度,保证涂布均匀。(3)将平皿盖打开3-5分钟,使培养基表面的水份吸收掉。然后贴药敏纸片;(4)注意:避免用过浓的菌液,禁用未经稀释菌或其她不标准菌液接种平板。 5、３贴纸片 (1)接种平板后,贴上药敏纸片。用镊子或针尖压一下纸片使其与培养基表面贴牢。纸片要贴得均匀,纸片与纸片中心距离不得小于24mm。原则上,直径150ｍm得平板贴１2张纸片,直径100mm平板贴5张纸片。纸片贴后不应再移动,因为有些药物会立即扩散;(2)贴上纸片15分钟内,须把平板倒放在35℃恒温箱中。因为抑菌环解释标准就是在普通环境中标定的,所以除嗜血杆菌与淋病 奈瑟氏菌外,平板不可放在高CO ２的环境中。ＣO 2 与某些因素作用可使抑菌环增 大。 5、4 读取结果 (１)经16-18小时培养后,观察结果。菌液浓度适合且涂得好,抑菌环规则,细菌呈融合生长。如果出现单个菌落,说明接种量小,需重做试验,测量抑菌环直径须包含纸片直径:手持平皿从背面目测检查每块平板,借反射光(黑色无放光背景),用卡尺、普通尺或特制的模板量取抑菌环直径,单位为毫米。培养基中如果加了血液,须打开平皿盖,借反射光,从正面量抑菌环。如果就是葡萄球菌或肠球菌,须培养２4小时后,经投射光检查苯唑青霉素与万古霉素的抑菌
纸片法抗菌药物敏感实验操作标准
纸片法抗菌药物敏感实验操作标准 4.3 标准比浊管 用硫酸钡比浊管（0.5麦氏比浊标准），标定接种菌液浓度。比浊管制备方法 如下：（1）0.048mol/L BaCl 2，（1.175% w/v BaCl 2 ·2H 2 O）0.5ml，加到99.5ml 的0.18 mol/L（0.36N）H 2SO 4 （1％v/v）溶液中，制成比浊管；（2）用光径为1cm 的分光光度计测定光吸收来标定比浊管。0.5麦氏标准比浊管在625nm波长的吸收光度应为0.08-0.1；（3）选管径与制备菌液试管相同的螺口试管，每管分装4－6ml；（4）将试管帽拧紧，放室温暗处保存；（5）用前，将比浊管在旋转振荡器上混匀。如出现大颗粒，应更换；（6）每个月更换比浊管或复检比浊管的浊度。 5 操作步骤 5.1 制备接种菌液 5.1.1 增菌法步骤如下：（1）选琼脂平板上形态相同的菌落至少4－5个，用接种环挑其顶部，移至4－5ml肉汤或大豆酪蛋白消化液中；（2）置35℃培养至菌液浓度达到或超过比浊管浓度（一般需2－6小时），浓度约1－2×108CFU/ml；（3）用生理盐水或肉汤校正菌液浓度，与比浊管相同。可用光电比浊。目测比浊须在适当光照下以黑色线条为反衬。 5.1.2 直接菌悬液法步骤如下：（1）做常规药敏试验，可直接用过夜培养的菌落（必须用无选择性培养基平板，如普通琼脂培养基）在盐水或肉汤中制备接种菌液。菌液浓度调至0.5麦氏管；(2)此法适用于在肉汤培养基中生长不好的细菌如嗜血杆菌、淋病奈瑟氏菌和链球菌及葡萄球菌的甲氧苯青霉素或苯唑青霉素的耐药试验；（3）当用此法做复方磺胺药的试验时，从平板上直接挑菌落时会携带相当量的拮抗剂，造成敏感菌株的抑菌环内出现轻微的生长菌膜。 5.2 接种平板步骤如下：（1）校正的菌液须在15分钟内使用。用一无菌棉试子蘸取菌液并在上端管壁旋转挤压几次，去掉过多的菌液；（2）用试子涂布整个琼脂平板表面，反复涂布几次，每次将平皿旋转60度，保证涂布均匀。（3）将平皿盖打开3－5分钟，使培养基表面的水份吸收掉。然后贴药敏纸片；（4）注意：避免用过浓的菌液，禁用未经稀释菌或其他不标准菌液接种平板。 5.3 贴纸片（1）接种平板后，贴上药敏纸片。用镊子或针尖压一下纸片使其与培养基表面贴牢。纸片要贴得均匀，纸片与纸片中心距离不得小于24mm。原则上，直径150mm得平板贴12张纸片，直径100mm平板贴5张纸片。纸片贴后不应再移动，因为有些药物会立即扩散；（2）贴上纸片15分钟内，须把平板倒放在35℃恒温箱中。因为抑菌环解释标准是在普通环境中标定的，所以除嗜血杆菌和淋病 奈瑟氏菌外，平板不可放在高CO 2的环境中。CO 2 与某些因素作用可使抑菌环增大。 5.4 读取结果（1）经16－18小时培养后，观察结果。菌液浓度适合且涂得好，抑菌环规则，细菌呈融合生长。如果出现单个菌落，说明接种量小，需重做试验，测量抑菌环直径须包含纸片直径：手持平皿从背面目测检查每块平板，借反射光（黑色无放光背景），用卡尺、普通尺或特制的模板量取抑菌环直径，单位为毫米。培养基中如果加了血液，须打开平皿盖，借反射光，从正面量抑菌环。如果是葡萄球菌或肠球菌，须培养24小时后，经投射光检查苯唑青霉素和万古霉素的抑菌环内有无耐药菌株的生长。抑菌环内有任何生长的表现都表明是耐药菌株。（2）肉眼见不到细菌明显生长的区域为抑菌环边缘，有很难辨认的细小菌落不
SOP纸片法药敏实验
纸片法药敏试验 1）目的本操作规程依据WS/T 125-1999，规定了临床抗菌药物敏感试验标准（纸片法）内容做必要的细化和补充，规范纸片法药敏检测方法。 2）适用范围本细则适用于适用于多种动物细菌病药物筛选。 3）职责 检测人员：负责按照本细则对被检样品进行检测。 复核人员：负责对检测操作是否符合规范以及检测结果是否准确进行复核。 4）方法原理纸片法药敏试验由快速生长的致病菌标定，适合肠杆菌科、葡萄球菌、肠球菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌。经适当改动可用来测定嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌。对于使用培养基不同、孵育环境不同或生长率不同的菌类，不能用纸片法做药敏试验。 5）仪器设备恒温培养箱、冰箱等。 6）试剂与材料普通琼脂培养基、药敏片。 7）环境条件操作环境温度22~28℃、湿度40~80%、电源220V。 8）检测步骤 8.1 制备接种菌液 8.1.1 增菌法 选琼脂平板上形态相同的菌落至少4~5个，用接种环挑其顶部，移至4~5ml肉汤或大豆酪蛋白消化液中。放置35℃培养至菌液浓度达到或超过比浊管浓度（一般需2~6h），浓度约1~2×108cfu/ml。用生理盐水或肉汤校正菌液浓度至与麦氏单位标准比浊管相同。可用光电比浊。 8.1.2 直接菌悬液法 可直接用过夜培养的菌落（必须用无选择性培养基，如血平板）在盐水或肉汤中制备接种菌液。菌液浓度调至0.5麦氏单位标准比浊管。此法亦适用于在肉汤培养基中生长不好的细菌如嗜血杆菌、淋病奈瑟菌及葡萄球菌的甲氧西林或苯唑西林的药敏试验。 8.2 接种平板 校正的菌液须在15 min内使用。用一无菌棉拭子蘸取菌液，并在上端管壁旋转挤压几次，去掉过多的菌液。用拭子涂布整个琼脂平板表面。Mueller-Hinton 琼脂平板用前应烘干。反复涂布几次，每次将平皿旋转60度，保证涂布均匀。 8.3 贴纸片 接种平板后，贴上药敏纸片。用镊子或针尖压一下纸片使其与培养基表面贴牢。纸片要贴得均匀，纸片与纸片中心距离不得小于24㎜。原则上，直径150㎜的平板贴12张纸片，直径100㎜平板贴6张纸片。贴上纸片15min内，须把平板倒放在35℃孵箱中。 8.4 测量抑菌环 经16~18h培养后，观察结果。菌液浓度合适且涂得好，抑菌环规则，细菌呈融合生长。手持平皿从背面目测检查每块平板，借反射光（黑色无反光背景），用卡尺、普通尺或特制的模板量取抑菌环直径，测量抑菌环直径须包含纸片直径，单位为毫米。培养基中如果加了血液，须打开平皿盖，借反射光，从正面量抑菌环。葡萄球菌和肠球菌，须培养24h后，经透射光检查苯唑西林和万古霉素的抑菌环内有无耐药菌株的生长。抑菌环内有任何生长都判断为耐药。 肉眼见不到细菌明显生长的区域为抑菌环边缘，有很难辨认的细小菌落者不算。如抑菌环内有大菌落长出，须再移种出来，重新鉴定，重新做敏感试验。变形菌在某些抗菌药物纸片周围可弥漫生长到抑菌的区域内，但抑菌环边缘清楚，弥漫生长不算。甲氧
纸片法KB药敏实验原理及实际操作方法
纸片法K B药敏实验原 理及实际操作方法 Document number【980KGB-6898YT-769T8CB-246UT-18GG08】
纸片扩散药敏试验的原理：将含药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。药敏试验根据美国临床标准委员会(NCCLS) 推荐的 K–B 琼脂法进行。本实验通过纸片药敏试验法观察多酸化合物对细菌有无抑制作用，为试管二倍稀释法提供有效基础数据。 用无菌棉拭子蘸取已经校正的麦氏比浊浓度的菌液，挤掉多余菌液。用棉拭子涂布整个 MH 培养基表面，每次将平板旋转60°，涂抹三次，最后沿周边擦绕两圈，以保证菌液涂抹均匀。待平板上的水分被琼脂完全吸收后贴含药纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴后不可再拿起。每个平板贴 5 张纸片，纸片间距不少于 24 mm，纸片中心距平皿边缘不少于 15 mm。在菌接种后 15 min内贴完纸片。将平板反转，37℃恒温孵育 18~24 h 后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，由平板背面测量最接近的整数毫米数并记录，每个平板各设三个平行组平板，测量抑菌直径时，应取三个平板的平均值为最终结果。抑菌环边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。 每次药敏试验用大肠杆菌 ATCC25922 和金黄色葡萄球菌 ATCC25923 做质控。药敏判读标准根据 CLSI 标准 (2009 年) 所载受试药对质控菌的抑菌环直径范围作为实验质控标准（判读标准见表 5-2）[84]。 表5-2 纸片扩散法－用质控菌株抑菌环直径(mm)允许范围监测抗菌药物敏感性试验准确性Table 5-2 Disc diffusion test － according the admissible range of quality-control strain’s inhibition zone diameter to monitor the accuracy of antibiotics susceptibility test (mm) 抗菌药物纸片含药量 （μg） 抑菌环直径(mm) S I R 大肠埃希菌 ATCC25922 金黄色葡萄球菌 ATCC25923 KF30≥1815–17≤1416–2227–35 AMP10≥1714–16≤1328–3527–28 CIP5≥2116–20≤1530–4022–30 NOR5≥1713–16≤1215–2129–37
纸片法(KB)药敏实验原理及实际操作方法
. .. 纸片扩散药敏试验的原理：将含药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。药敏试验根据美国临床标准委员会 (NCCLS) 推荐的 K –B 琼脂法进行。本实验通过纸片药敏试验法观察多酸化合物对细菌有无抑制作用，为试管二倍稀释法提供有效基础数据。 用无菌棉拭子蘸取已经校正的 0.5 麦氏比浊浓度的菌液，挤掉多余菌液。用棉拭子涂布整个 MH 培养基表面，每次将平板旋转 60°，涂抹三次，最后沿周边擦绕两圈，以保证菌液涂抹均匀。待平板上的水分被琼脂完全吸收后贴含药纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴后不可再拿起。每个平板贴 5 张纸片，纸片间距不少于 24 mm ，纸片中心距平皿边缘不少于 15 mm 。在菌接种后 15 min 内贴完纸片。将平板反转，37℃ 恒温孵育 18~24 h 后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，由平板背面测量最接近的整数毫米数并记录，每个平板各设三个平行组平板，测量抑菌直径时，应取三个平板的平均值为最终结果。抑菌环边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。 每次药敏试验用大肠杆菌 ATCC25922 和金黄色葡萄球菌 ATCC25923 做质控。药敏判读标准根据 CLSI 标准 (2009 年) 所载受试药对质控菌的抑菌环直径范围作为实验质控标准（判读标准见表 5-2）[84]。 表5-2 纸片扩散法－用质控菌株抑菌环直径(mm)允许范围监测抗菌药物敏感性试验准确 性 Table 5-2 Disc diffusion test － according the admissible range of quality-control strain’s inhibition zone diameter to monitor the accuracy of antibiotics susceptibility test (mm) 抗菌 药物 纸片含药量（μg ） 抑菌环直径(mm) S I R 大肠埃希菌ATCC25922 金黄色葡萄球菌ATCC25923 KF 30 ≥18 15–17 ≤14 16–22 27–35 AMP 10 ≥17 14–16 ≤13 28–35 27–28 CIP 5 ≥21 16–20 ≤15 30–40 22–30 NOR 5 ≥17 13–16 ≤12 15–21 29–37 KF: 头孢噻吩；AMP: 氨苄西林；CIP: 环丙沙星；NOR: 诺氟沙星；S: 敏感；I: 中介；R: 耐药
药敏试验纸片法的抑菌范围解释标
药敏试验纸片法的抑菌范围解释标准 杭州微生物试剂有限公司 抗生素 针对病原菌纸片含量 ug/片 抑菌环直径 抗生素 针对病原菌 纸片含量 ug/片 抑菌环直径 敏感S 耐药R 中介1 耐药R 中介1 敏感S 性内酰胺类头抱氨苄（先锋W）30 <14 15-17 >18 青霉素类头抱唑啉（先锋V）30 <14 15-17 >18 氨苄西林10 头抱拉定（先锋W）30 <14 15-17 >18 测肠杆菌科细菌<13 14-16 >17 头抱克罗（希刻劳）30 <14 15-17 >18 测葡萄求菌<28 -- >29 测嗜血杆菌<16 17-19 >20 测肠球菌<16 -- >17 头抱羟唑30 <14 15-17 >18 测产单核李斯特<19 -- >20 头抱吡肟（马斯平）30 <14 15-17 >18 测嗜血杆菌<18 19-21 >22 测嗜血杆菌-- -- >26 测伕溶血性链球菌<18 19-25 >26 测淋病奈瑟菌-- -- >31 阿洛西林（Azlocillin ）75 头抱克肟（世福素） 5 <15 16-18 >19 测铜绿假单胞菌<17 -- >18 测嗜血杆菌-- -- >26 羧苄西林 100 测淋病奈瑟菌-- -- >31 测铜绿假单胞菌<13 14-16 >17 头抱美唑30 <12 13-15 >16 测其他革兰氏阴性杆菌<19 20-22 >23 头抱哌酮（先锋必）75 <15 16-20 >21 美洛西林75 头抱噻肟（凯福隆）30 <14 15-22 >23 测铜绿假单胞菌<15 -- >16 测嗜血杆菌-- -- >26 测其他革兰氏阴性杆菌<17 18-20 >21 测淋病奈瑟菌-- -- >31 苯唑西林 1 测其他链球菌<25 26-27 >28 测葡萄球菌<10 11-12 >13 头抱西丁30 <14 15-17 >18 测凝固酶阴性葡萄球菌<17 -- >18 测淋病奈瑟菌<23 24-27 >28 测肺炎链球菌-- -- >20 头抱他啶（复达欣）30 <14 15-17 >18 青霉素10U 测嗜血杆菌-- -- >26 测葡萄球菌<28 -- >29 测淋病奈瑟菌-- -- >31 测肠球菌<14 -- >15 头抱唑肟（盖保世灵）30 <14 15-19 >20 测产单核李斯特菌<19 -- >20 测嗜血杆菌-- -- >26 测淋病奈瑟菌<26 27-46 >47 测淋病奈瑟菌-- -- >38 测其他链球菌<19 20-27 >28 头抱三嗪（菌必治）<13 14-20 >21 哌拉西林钠（氧哌嗪） 100 测嗜血杆菌-- -- >26 测铜绿假单胞菌<17 -- >18 测淋病奈瑟菌-- -- >31 测其他革兰氏阴性杆菌<17 18-20 >21 测肺炎链球菌 替卡西林75 以外的其他链球菌<25 25-26 >27 测铜绿假单胞菌<14 -- >15 头抱肤肟酯（口服）30 <14 15-22 >23 测其他革兰氏阴性杆菌<14 15-19 >20 头抱肤肟（西力欣）30 <14 15-22 >23
药敏试验结果分析
6种抗生素类药物对大肠杆菌的体外抑菌试验 xxx （山东农业大学） 摘要:研究6种抗生素药物对大肠杆菌体外抑菌的作用。通过在琼脂平皿上贴药敏片，测量抑菌圈的直径来确定抑菌作用。结果表明大肠杆菌对青霉素、头孢他啶表现中度敏感，其他表现为高度敏感 关键词:抗生素；大肠杆菌；抑菌 文献综述： 大肠杆菌是肠杆菌科埃希菌属中具有代表性的菌种，主要寄居在人和动物肠道中，其特性为革兰氏阴性，对营养要求不高，在普通培养基上就能很好的生长，并广泛分布于水、土壤或腐败物中。禽大肠杆菌病是由埃希氏大肠杆菌引起的多种病的总称，包括大肠杆菌性肉芽肿、腹膜炎、输卵管炎、脐炎、滑膜炎、气囊炎、眼炎、卵黄性腹膜炎等疾病，对养禽业危害严重。大肠杆菌病的发生，常与许多不利的外界条件密切相关。发生时具备如下特点：发病率高，死亡率高，复发率高；各日龄均易感染，症状典型；混合感染严重；传播途径较多：呼吸道、消化道（包括滥用药物引起的肠道菌群失调）、垂直传播；治疗困难。多年来，随着抗生素的大量应用致使大肠杆菌病的耐药菌株越来越多，耐药谱也越来越广。本实验通过6种临床常用抗生素对大肠杆菌的药敏试验，检测临床常用的六种抗生素对大肠杆菌的敏感性以便准确有效的利用药物进行治疗。 1 药敏实验简介 抗菌药物敏感性试验（AST，简称药敏试验）：用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。常用最低抑菌浓度（MIC）表示，即体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度。通常根据MIC结合常用剂量时体内该药所能达到的血药浓度，划定细菌对各种抗生素敏感或耐药的界限，给出S（敏感）、I（中介）、R（耐药）等定性的结果来分别表示实验菌对抗菌药物的敏感性。高度敏感（s ）表示用某种药物治疗某种细菌引起的感染常用剂量就有效，或者说常规剂量达到的平均血药浓度超过该药对细菌的MIC 的5 倍以上；中度敏感（I ）表示用某种药物治疗某种细菌引起的感染仅在高剂量时才有效，或者说常规剂量达到的血药浓度相当于或略高于对细菌的MIC ; 耐药（R ）表示药物对某一细菌的MIC（最
药敏试验方法及药敏试纸的选择
（信息来源：https://www.360docs.net/doc/ab13238723.html,/）药敏试验方法及药敏试纸的选择 关键字： 青霉素葡萄球菌头孢噻肟球菌内酰胺酶链球菌耐药肺炎链球菌肠杆菌科内酰 胺类 摘要：头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB）奥格门丁（AMX/CA）哌拉 西林/三唑巴坦（PIP/TZ）亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC）2、铜绿假单 孢菌/不动杆菌妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT）头孢哌酮（CFP）哌 拉西林（PIP）头孢匹肟头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ）左旋氧 氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦3、金黄色葡萄球菌苯唑西林（OX）青 霉素G（P）头孢唑林（ K-B法： 1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。 2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。 3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。 4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。 5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。 6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。 说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照N CCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法. 肺炎链球菌胶乳凝集测定法 1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。 2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidex pneumo-kit)于室温。 3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。 4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。 5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。 注：R3为阳性对照。