纸片法药敏试验相关知识

纸片扩散法药敏试验

纸片扩散法药敏试验一、原理纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯度。

在药物扩散的同时，纸片周围抑菌浓度范围内的测试菌不能生长，而抑菌浓度范围外的菌株则继续生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈。

不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速率的影响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小。

二、进行药敏实验指征为保证治疗效果，对引起感染的任何病原菌，若不能从该菌的种属特征可靠地推知其对抗菌药物的敏感性，就需要进行药敏试验。

尤其当病原菌属于对常用抗菌药物能产生耐药时，就更需进行药敏试验。

若感染是公认的对某一高效抗菌药物敏感的微生物引起的，就很少需要进行药敏试验了。

三、标本要求参加药敏试验的菌株包括从临床标本中分离的常见的、快生长的菌株，如肠杆菌科菌、葡萄球菌、肠球菌、非发酵糖菌；还包括某些苛养的病原菌，如流感嗜血杆菌、肺炎链球菌及其他链球菌、淋病奈瑟菌等。

标本内的正常菌群，通常不作药敏。

对每一种可能致病的细菌进行敏感试验时，使用的单个菌落都应选自原始的琼脂平板，鉴定种属的过程常与此同时进行。

不同菌种的混合物不能在同一药敏平皿上进行试验。

除非在临床急症患者的标本（如阳性血培养物）经涂片革兰染色提示单一的病原菌，一般应避免直接用临床标本（如无菌体液和尿液）做药敏试验。

若用临床标本作了直接药敏试验，也必须按标准方法重复第二次药敏。

四、选药原则详见临床实验室标准化研究所（CLSI）对各种非苛养菌和苛养菌进行常规药敏试验和报告时的选药指南表。

表中的抗菌药物可满足绝大多数临床实验室的常规需要，在此表中各种抗菌药物针对具体的菌种或菌群被分成许多纵列，每一列又根据不同的选择要求分成A、B、C、U等不同的组，其中A组药物用于常规和首选试验，其结果也应常规报告。

药敏试验

判定标准
清晰无细菌生长的试管对应的药物浓度为该药
的MIC；
以MIC前2支试管液体涂培养基
培养菌落少于5个的试管对应的药物浓度为该药的MBC。
试材
试管、移液管、营养琼脂和营养肉汤
方法
（1）制备药液、菌液、培养基; （2）向第1支试管中加入0.9mL营养肉汤、其余各试管中加入0.5mL；（3）向第1支试管中加0.1mL药液取0.5mL 加到第2支试管中……至13支试管，取0.5mL涂平板向1-14试管中各加0.5mL菌液培养。
耐药：直径＜10mm液、牛津杯、钢管放置器、陶瓦盖步骤（1）制备菌液：106-7 （2）制备药液：1280μg/mL （3）制备培养基（4）涂菌液（5）放置牛津杯（6）加菌液（7）盖陶瓦盖（8）培养（9）量直径
三、液体试管二倍稀释法
药敏实验
一、药敏纸片法
试材
培养皿、培养基、菌种（病料）、药敏片、培养箱
方法
（1）制备药敏片（2）制备培养基：营养琼脂、营养肉汤（3）涂菌：菌液105 CFU （4）贴药敏片（5）培养:37℃ 24小时（6）量直径：
判定标准
敏感：直径＞15mm
中度敏感： 10~15mm

纸片扩散法药敏试验(KB法)

纸片扩散法药敏试验(KB法)纸片扩散法药敏试验，又称为KB法，是一种广泛应用于临床微生物实验室的抗生素敏感性检测方法。

通过该方法，可以快速、准确地评估病原菌对抗生素的敏感性，为临床医生提供治疗选择的依据。

纸片扩散法药敏试验的基本原理是将含有定量抗生素的纸片贴在接种有病原菌的培养基上，抗生素在培养基中扩散形成浓度梯度，抑制病原菌的生长。

通过测量纸片周围形成的抑菌圈直径，可以判断病原菌对抗生素的敏感性。

抑菌圈直径越大，表示病原菌对该抗生素越敏感。

纸片扩散法药敏试验具有操作简便、成本低廉、结果易于判读等优点，是目前临床上使用最广泛的药敏试验方法之一。

然而，该方法也存在一定的局限性，如受环境因素影响较大，结果受操作人员技术熟练程度影响等。

1. 选择合适的培养基：纸片扩散法药敏试验需要使用含有适量营养物质的培养基，以保证病原菌的生长。

2. 控制接种量：接种量过多或过少都会影响试验结果，因此需要严格控制接种量。

3. 选择合适的抗生素纸片：根据病原菌的种类和临床需求，选择合适的抗生素纸片进行试验。

4. 观察抑菌圈：在规定时间内观察抑菌圈的形成情况，测量抑菌圈直径，判断病原菌对抗生素的敏感性。

5. 结果报告：根据抑菌圈直径，按照相应的标准判断病原菌对抗生素的敏感性，并将结果报告给临床医生。

纸片扩散法药敏试验(KB法)是一种简单、实用的抗生素敏感性检测方法，在临床微生物实验室中具有广泛的应用。

通过规范操作，可以提高试验结果的准确性，为临床治疗提供有力支持。

纸片扩散法药敏试验(KB法)的进一步探讨我们需要了解KB法的基本操作步骤。

将含有特定抗生素的纸片贴在已经接种了细菌的琼脂平板上。

随着时间的推移，抗生素会从纸片中扩散到琼脂中，形成抗生素浓度梯度。

如果细菌对该抗生素敏感，那么在纸片周围就会形成一个无细菌生长的区域，即抑菌圈。

抑菌圈的大小与抗生素的浓度和细菌的敏感性有关。

KB法的准确性受到多种因素的影响。

纸片的抗生素含量必须准确，以保证试验的重复性。

药敏试验纸片扩散法操作步骤

药敏试验纸片扩散法操作步骤
药敏试验纸片扩散法是一种常用的检测细菌对抗生素敏感性的方法，其操作步骤如下：
1. 准备培养基：根据需要选择合适的培养基，如Mueller-Hinton（MH）琼脂（常用于细菌药敏试验）。

按照制造商的
说明溶解固体培养基，并加入适当量的琼脂（通常为2%），
将其加热溶解，然后用无菌盘口装好。

2. 菌液制备：从培养基上的细菌菌落中接种一根病菌棒，将其浸入含有3-5毫升无菌盐水的试管中。

3. 菌液浓度调整：将试管中的细菌菌液用比例稀释至合适的浓度（通常为0.5麦克百尼尔/毫升）。

4. 纸片扩散：用无菌的棉签将稀释后的菌液均匀地涂抹在一块布拉格琼脂平板上，然后在琼脂上按要求摆放敏感纸片（一般为阿莫西林、头孢菌素等常用抗生素），注意要与纸片相距一定距离。

5. 培养：将布拉格琼脂平板反面朝上，用无菌培养皿盖好，然后放入恒温培养箱中进行孵育。

通常在35-37°C条件下培养
24小时。

6. 结果录入和解读：观察纸片周围的细菌生长情况，通过测量纸片周围形成的抑制圈直径来评估细菌对不同抗生素的敏感性。

根据抑制圈的直径大小，将细菌的敏感性分为敏感、中等和耐
药三个等级。

注意事项：
- 操作过程需要严格无菌，以免细菌的外源污染影响结果。

- 确保培养皿紧闭，避免细菌的空气传播。

- 操作前后要做好清洁，避免微生物交叉感染。

- 移栽过程要注意避光，避免紫外线对细胞的破坏。

实验6：纸片扩散法测定微生物的药敏性

实验6 抗生素等对细菌的药敏性检测antimicrobial susceptibility testing in vitro（圆盘滤纸片法disc diffusion test）一、实验目的：1、了解抗生素及化学试剂对微生物生长的影响2、掌握不同化学试剂的作用原理、常用浓度及使用方法二、实验原理许多微生物可以产生抗生素，能选择性的抑制或杀死其他微生物。

凡是抗菌谱即抗菌范围不广泛的抗生素称为窄谱抗生素，如青霉素只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，而对革兰氏阴性菌、结核菌、立克次体等均无疗效，故青霉素就属于窄谱抗生素。

原来窄谱的抗生素如青霉素经过改造，产生了许多半合成的青霉素，扩大了原来的抗菌范围，如氨苄青霉素，不但对革兰氏阳性菌有效，而且对革兰氏阴性菌也很有效，对伤寒杆菌、痢疾杆菌效果也不错。

不同化学药品或同一化学药品对不同微生物的杀菌能力不同，此外，试剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果也不同。

应用前需进行试验，灵活选择。

三、实验器材1、菌种：培养24~28 h大肠杆菌、金黄色葡萄球菌斜面菌种。

2、培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨培养基，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液3、仪器与其他用品：无菌平皿，无菌吸管（1ml），酒精灯，接种环，涂布棒，无菌滤纸片，无菌镊子，记号笔, 消毒棉球和培养箱。

四、实验步骤（以金黄色葡萄球菌操作为例）（1）菌液制备：将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。

以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。

（2）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀，倒3套平板。

（平板厚度均匀，滤纸片大小一致）（3）涂平板：无菌操作，用无菌棉棒儿蘸取菌液（金葡）。

将多余菌液在液面上方管壁内轻轻旋转挤出，涂布在MH琼脂平板整个平面三次，每次旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。

kb纸片法药敏实验名词解释

kb纸片法药敏实验名词解释
KB纸片法是一种常见的药敏实验方法，用于测试细菌对抗生素的敏感性。

这项实验通常用于临床医学和微生物学领域。

下面我将从多个角度来解释这些名词。

首先，KB纸片法是指Kirby-Bauer纸片法，是一种半定量的抗生素敏感试验方法。

在这个方法中，细菌培养物被均匀涂布在琼脂平板上，然后在表面放置含有不同抗生素的纸片。

细菌在培养基上生长形成菌落，如果细菌对某种抗生素敏感，它们就不会在靠近含有该抗生素的纸片的区域生长，形成所谓的抑制圈。

通过测量这些抑制圈的直径，可以判断细菌对抗生素的敏感性。

其次，药敏实验是指药物敏感性试验，用于评估细菌或其他微生物对抗生素或其他药物的敏感性。

这项实验对于选择治疗感染性疾病的最佳药物非常重要，因为它可以帮助医生确定哪种药物对特定的病原体最有效。

综上所述，KB纸片法药敏实验是一种通过测量细菌对抗生素的敏感性来评估药物治疗效果的方法，它在临床医学和微生物学领域有着广泛的应用。

希望这些解释能够帮助你更好地理解这些名词。

纸片扩散法药敏试验原理

纸片扩散法药敏试验原理
嘿，朋友们！今天咱来唠唠纸片扩散法药敏试验原理这档子事儿。

你说这药敏试验就像是一场细菌和药物的大作战！咱得想办法知道哪种药物能把那些捣乱的细菌给收拾得服服帖帖呀。

想象一下，咱把含有药物的小纸片就像一个个小战士一样，整整齐齐地放在涂满了细菌的培养基上。

这些小纸片就开始发挥它们的魔力啦！药物会从纸片里慢慢扩散出来，就像孙悟空画的那个圈圈一样，形成一个药物浓度逐渐变化的区域。

这时候细菌们可就面临考验啦！有的细菌比较弱，一碰到稍微厉害点的药物浓度就不行啦，直接被打败，这周围就变得干干净净，没它们的影儿啦。

可有的细菌比较顽固，还能在药物浓度不那么高的地方顽强抵抗呢。

这不就跟咱生活中一样嘛，遇到困难有的人一下子就被打倒了，有的人还能撑一会儿。

那通过观察这些小纸片周围细菌的生长情况，咱不就清楚哪种药物对这些细菌最有效啦！这多重要啊，就像医生治病得找对药一样，不然那不就白折腾啦！
你看，这纸片扩散法药敏试验不就是这么个道理嘛！它就像是一个神奇的魔法，能帮我们找到制服细菌的法宝。

而且操作起来也不难呀，只要咱细心点，按照步骤来，就能得到准确的结果。

咱可别小瞧了这个试验，它可是为了咱的健康保驾护航呢！医生们能根据这个结果来给病人开药，让病人能快点好起来。

这就像是在黑暗中找到了一盏明灯，给人指明了方向。

所以啊，这纸片扩散法药敏试验原理真的是太实用啦！它就像一个默默无闻的英雄，在背后为我们的健康默默付出呢！大家说是不是呀！。

细菌药敏试验

【试验意义】
2 药敏试验的意义 • 1. 可预测抗菌治疗的效果 • 2. 指导临床选择使用抗生素。 • 3. 提供所选择药物的依据； • 4. 监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握
耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐药菌感染的发生和流行。
【实验材料】
1.菌种：大肠杆菌肉汤培养物 1 管/组
2.各种药敏片：市售商品药敏片（或自制）1套（4～5种）/人。
[问题与思考]
• 1.纸片药敏试验操作时应注意哪些事项? • 2.试述纸片扩散法药敏试验的原理及临床
意义。 • 3.纸片药敏试验的步骤及结果判定是什么？
≥18
≤14
15～17
≥18
≤12
13～17
≥18
≤13
13-15
≥18
≤12
13～14
≥15
【注意事项】
• 影响因素药敏试验结果的因素 1、培养基：培养基质量和pH值。pH过低会导致
氨基糖苷类，大环内酯类失效，而青霉素活力增强。 2、药敏纸片的质量，含药量和保存方式 3、接种菌量。 4、试验操作质量：接种细菌后贴片时5～15 分钟； 5、培养时间：不超过24 h 。
细菌药敏试验（纸片扩散法）
【学习目标】
1.掌握药敏试验的基本原理。 2.掌握药敏试验-纸片法的操作方法及判定。
3.了解药敏试验在实际生产中的指导意义。
【试验原理】
• 1 纸片扩散法原理
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

纸片扩散法药敏试验

纸片扩散法药敏试验纸片扩散法（K-B法）药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片，培养一段时间后测量抑菌圈大小，并根据相关解释标准进行结果分析，从而得出受试菌株药物敏感性的结论。

中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论目录.1试验原理.2试验步骤.3结果分析.4注意事项基本信息中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论试验原理纸片扩散药敏试验的原理：将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过抗菌药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。

药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。

试验步骤1. 待测菌株接种物制备（1）通用情况：从过夜孵育的平板，优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。

（2）特殊情况：嗜血杆菌属（本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌）：从过夜孵育的HTM平板，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。

2.接种平板（1）调整好悬液的浊度后，用无菌棉签浸入悬液内，紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体，但也应适度。

（2）用拭子划线整个琼脂表面，从平板顶部到底部，均匀涂布，重复两次此过程（一共三次）每次旋转平板约60度，确保每次接种菌液均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈，防止有流动的菌悬液，并使菌液涂布于整块平板的每个角落。

（3）涂布菌液完成的平板，可在室温放置一会（3-5分钟），以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分，但放置时间不应超过15分钟。

纸片扩散法药敏试验

纸片扩散法药敏试验纸片扩散法（K-B法）药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片，培养一段时间后测量抑菌圈大小，并根据相关解释标准进行结果分析，从而得出受试菌株药物敏感性的结论。

中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论目录.1试验原理.2试验步骤.3结果分析.4注意事项基本信息中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论试验原理纸片扩散药敏试验的原理：将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过抗菌药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。

药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。

试验步骤1. 待测菌株接种物制备（1）通用情况：从过夜孵育的平板，优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。

（2）特殊情况：嗜血杆菌属（本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌）：从过夜孵育的HTM平板，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。

2.接种平板（1）调整好悬液的浊度后，用无菌棉签浸入悬液内，紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体，但也应适度。

（2）用拭子划线整个琼脂表面，从平板顶部到底部，均匀涂布，重复两次此过程（一共三次）每次旋转平板约60度，确保每次接种菌液均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈，防止有流动的菌悬液，并使菌液涂布于整块平板的每个角落。

（3）涂布菌液完成的平板，可在室温放置一会（3-5分钟），以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分，但放置时间不应超过15分钟。

药敏试验纸片法的抑菌范围解释标准

药敏试验纸片法的抑菌范围解释标准下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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纸片法药敏试验

纸片法药敏试验纸片法药敏试验是将含有一定量的抗菌药物吸取到特定的纸片中，然后置于已接种检测菌的固体培养基上，纸片中的药物通过吸收培养基内水分而向外扩散，抑制敏感菌的生长，从而出现抑菌圈。

由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，故可根据抑菌圈的大小，判断细菌对药物的敏感性。

目前，我院常用于病原菌尚未确定的急、重症感染和混合感染以及延缓细菌耐药性的产生中。

由于，纸片法药敏试验具有操作简便、容易掌握等特点而逐渐被广大医务工作者所认可，并以药敏试验的结果指导临床用药，在医疗中发挥了巨大的作用。

然而，纸片法药敏试验只是一种药物敏感性定性试验，在实验中容易受到诸多因素的影响，很难通过抑菌圈的大小准确判断细菌对药物的敏感程度。

笔者根据多年的工作经验就影响该试验的主要因素如药物、培养基、菌种、试纸片、培养条件及操作质量等逐一加以说明，供同行参考。

1 药物药物影响纸片法药敏试验结果的因素主要有：药物的理化性质及作用特点等［3］。

1.1 药物的理化性质包括药物的溶解性、稳定性等。

1.1.1 药物的溶解性临床中使用的抗菌药物有的易溶于水，有的不溶或极微溶于水。

对于易溶于水的药物制成药敏纸片后在培养上很容易吸收水分而均匀扩散，而不溶或极微溶于水的药物制成药敏纸片后在培养基上很难完全溶解于培养基水分中扩散。

因此药物试纸片放置到培养基上之后，不同溶解性的药物在规定的培养时间内扩散到培养基中的程度是不相同的，有的能完全扩散到培养基中，而有的却不能完全扩散，这必然导致该药物的抑菌效果低于真实值。

所以，药物溶解性的高低影响了药敏试验结果的真实性。

如氨基糖苷类药物的盐类（硫酸阿米卡星等）易溶于水，而红霉素难溶于水。

1.1.2 药物的稳定性临床中常用的药敏试纸片一般是事先加工好的，极少是现用现做的，所以试纸片中药物含量必然受到其稳定性的影响。

有些药物稳定性差，易受光照、溶剂、pH值、温度以及保存时间等诸多因素的影响而致抗菌活性降低。

纸片扩散法药物敏感试验

纸片扩散法药物敏感试验若只根据是否出现抑菌环而不考虑抑菌环的直径大小来判断细菌是否对抗菌药物敏感的实验方法，其结果是不正确的。

而纸片扩散法试验是应用标准的方法学原理，根据抑菌环直径大小与最低抑菌浓度的相关性，结合临床上已知敏感或耐药菌株的状态，其结果是可靠的。

WHO推荐K-B法，其目的在于技术的简单和可重复性。

本法特别适用于肠杆菌科细菌，也可用于快速生长的致病菌，但不适用于其他细菌，如嗜血杆菌、奈瑟菌、专性厌氧菌及酵母样菌等。

无论用哪种方法接种，只要质控菌株的抑菌环在预期范围内，均可按同一解释标准报告结果。

但并非从感染患者分离到的微生物都必须做敏感试验，对于污染、机体共生的正常细菌群和那些与感染无关的细菌，可不必做敏感试验，只有那些被认为引起感染的微生物，应先分离提纯、鉴定菌种后再做敏感试验。

试验方法：一、试验材料：（一）培养基：Kirby-Bauer法指定用Mueller-Hinton琼脂。

多年大量的有关敏感试验的方法学研究，均采用该培养基；维持细菌正常发育，绝大多数细菌在此培养基上生长良好。

此培养基不拮抗抗菌药物活性以及商品的批次间差异等方面均优于其他培养基。

若检测肺炎链球菌的敏感性时，须在培养基中加5％的脱纤维羊血，制成血平板。

测嗜血杆菌及淋病奈瑟菌的敏感性时，在培养基中须加入1％血红素和2.5mg/ml辅酶I后应校正pH 7.2〜7.4。

制备MH 琼脂平板应用直径90cm 平皿。

在水平的实验台上倾制。

琼脂厚为4mm,允许误差为土1mm。

琼脂凝固后，应测一下pH。

琼脂于板应放4C 保存，在7日内用完。

若当天不用，用塑料袋密封包装贮藏于冰箱（2-8C）。

每批平板都应抽样，在30-50C下培养24h或更长时间检查是否被感染。

MH 琼脂培养基配方（1L）：Beef Extract 2.0g Acid Hydrolysis of Casein 17.5gStarch 1.5g Agar 17.0gFinal PH 7.3 at 25C高压灭菌后立即水浴冷却至45-50 C。

纸片琼脂扩散法检测抗菌药物敏感试验方法分析

纸片琼脂扩散法检测抗菌药物敏感试验方法分析抗菌药物敏感试验(AST)是指在体外测定药物抑制或杀死细菌能力的试验，纸片琼脂扩散法又称K－B法，是将含有一定量抗菌药物的纸片贴在已接种待测菌的琼脂平板表面，药物将在培养基中由纸片往周围扩散，且浓度递减。

在抑菌浓度范围内待测菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。

根据抑菌圈的大小可判断待测菌对测定药物的敏感程度[1]。

该法操作简便、选药灵活，适用于快速生长的需氧菌及兼性厌氧菌。

1 实验材料抗菌药物纸片选择直径6.35mm，吸水量20μL的专用药敏纸片，灭菌后，经逐片加样或浸泡的方法使每片的含药量相当于所示浓度。

纸片冷冻干燥后储藏于密封瓶内，－20℃保存。

日常工作用的少量纸片可保存于4℃冰箱内，1周内使用。

培养基水解酪蛋白(M－H)培养基是CLSI推荐采用的需氧菌和兼性厌氧菌药敏试验标准培养基，pH7.2～7.4，溶化后倾注平板(琼脂厚度为4 mm)。

使用前应将琼脂平板放入35℃孵育至表面干燥。

药敏试验菌液：浓度应为0.5麦氏比浊标准。

①生长法：挑取已分离纯化的菌落4～5个，接种于3～5mLM－H肉汤中，35℃孵育4h，用生理盐水或肉汤校正菌液浓度至0.5麦氏比浊标准。

②直接调制法：用接种环挑取纯菌落数个，混悬于生理盐水或肉汤中，充分混匀并调整浓度为0.5麦氏比浊标准[1]。

2 实验方法2.1接种以无菌棉拭子蘸取试验菌液，在管内壁旋转挤压除去多余的菌液后，涂布于整个M－H琼脂平板表面，涂布3次，每次旋转平板60°，最后沿平板边缘涂抹1圈。

盖上表面皿盖，置室温放置3～5min，使平皿表面稍干。

2.2 贴放药物纸片：用无菌镊子或纸片分配器将含药纸片平整地贴于平板表面，稍加按压使纸片贴紧。

注意纸片分布均匀，各纸片中心相距24mm以上，纸片距平板内缘应大于15mm。

纸片贴牢后切勿移动，否则会影响抑菌圈的形状。

2.3培养：贴好纸片后，须于15min内将平板置于35℃培养箱中，孵育至规定时间(一般为18～24h)。

药敏试验的原理以及方法

药敏试验的原理以及方法一、药敏试验的概述药敏试验（Antimicrobial susceptibility testing），简称AST，是指通过对微生物感染株与抗生素药物进行体外相互作用研究，以评价抗生素对细菌的活性和有效浓度。

药敏试验广泛应用于临床和研究工作中，对指导临床治疗和控制抗感染药物的使用具有重要意义。

二、药敏试验的原理药敏试验的原理是通过确定抗生素与细菌之间的相互作用，评估细菌对抗生素的敏感性或耐药性。

常用的药敏试验方法包括： 1. 纸片法（Disk diffusion method）：将已知浓度的抗生素制剂由特定的纸片载体上释放，与培养基中的细菌相互作用。

2. 麦克法（Microbroth dilution method）：通过在微量培养基中加入不同浓度的抗生素，观察细菌生长的情况来确定最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）。

3. E测试法（E-test method）：通过将具有抗生素梯度的试纸放置在含有细菌的琼脂平板上，观察细菌生长与抑制的交界处，确定MIC。

三、药敏试验的方法1. 药敏试验前的准备•培养细菌：选取目标细菌进行预培养，并利用常规方法进行纯化。

•制备试验培养基：根据需要的培养基配制，包括含有不同浓度抗生素的培养基。

•准备抗生素：选择待测抗生素，制备不同浓度的抗生素试液。

2. 纸片法1.在琼脂平板上均匀涂布待测菌株，使其在琼脂表面生长。

2.在琼脂平板表面放置含有不同抗生素的纸片，使其药物逐渐扩散到琼脂中，与菌株相互作用。

3.培养平板在恰当条件下孵育。

4.观察细菌的生长情况，测量药物扩散的直径。

3. 麦克法1.在96孔板中，加入逐个减少浓度的抗生素试液，每个孔位加入一定浓度细菌悬液。

2.培养孔板在适宜条件下孵育。

3.观察不同浓度抗生素对菌落生长的影响，确定细菌耐药性。

4. E测试法1.将E-test试纸放置在含有细菌的琼脂平板表面。

药敏试验纸片法的抑菌范围解释标1

药敏试验纸片法的抑菌范围解释药敏试验纸片法是一种常用的药敏试验方法，其主要用于检测细菌对不同抗生素的敏感性，是抗生素治疗的指南之一。

在进行这种试验时，需要根据不同的抗生素种类，为细菌培养基上接种不同的试验纸片，观察它们对细菌的抑菌作用。

那么，这种试验纸片的抑菌范围是怎样解释的呢？抑菌范围的定义抑菌范围指试验纸片的抗生素浓度对细菌生长所产生的影响。

可以通过抑制菌落的数量或直接观察菌落形态来确定抗生素的抑菌效果。

通常，抑菌范围被定义为一组不同浓度抗生素所能抑制的最小和最大菌落直径之间的区间。

抑菌范围的解释抑菌范围的解释是基于对试验纸片抗生素浓度的了解。

对于不同种类的细菌和抗生素，需要根据其最佳浓度范围来确定试验纸片的浓度范围。

一般来说，试验纸片的抗生素浓度在最小抑菌浓度（MIC）以下，细菌可以在培养基上生长。

而在MIC以上，抗生素的浓度越高，细菌对抗药性越强，抑菌效果也越明显。

因此，抑菌范围是该试验纸片所能达到的最大和最小抗生素浓度之间的区间。

抑菌范围的影响因素抑菌范围不但受试验纸片抗生素浓度的影响，还受到以下因素的影响：1.细菌类型：不同种类的细菌对抗生素具有不同的敏感性和耐受性。

因此，在使用试验纸片时，需要根据不同细菌类型来确定正确的抗生素浓度范围。

2.抗生素类型：不同种类的抗生素在不同浓度下对细菌的抑菌效果也是不同的。

因此，需要选择对应的抗生素种类和浓度，来使试验纸片的抑菌效果最佳。

3.使用时间：如果试验纸片放置时间过长，抗生素的浓度可能会降低，影响试验结果。

因此，及时使用试验纸片是十分重要的。

4.库存条件：试验纸片需要在干燥、阴凉的环境中存放，以保证其抗生素浓度稳定，降低试验误差。

药敏试验纸片法是一种简单且可靠的抗生素敏感性检测方法。

抑菌范围是该试验纸片所能达到的最大和最小抗生素浓度之间的区间，其受到细菌类型、抗生素类型、使用时间和库存条件等因素的影响。

在使用试验纸片进行药敏试验时，需要充分考虑这些因素，来保证试验结果的准确性和可靠性。

纸片法抗菌药物敏感实验操作重点标准

纸片法抗菌药物敏感实验操作原则4.3 原则比浊管用硫酸钡比浊管（0.5麦氏比浊原则），标定接种菌液浓度。

比浊管制备措施如下：（1）0.048mol/L BaCl2，（1.175% w/v BaCl2·2H2O）0.5ml，加到99.5ml旳0.18 mol/L（0.36N）H2SO4（1％v/v）溶液中，制成比浊管；（2）用光径为1cm旳分光光度计测定光吸取来标定比浊管。

0.5麦氏原则比浊管在625nm波长旳吸取光度应为0.08-0.1；（3）选管径与制备菌液试管相似旳螺口试管，每管分装4－6ml；（4）将试管帽拧紧，放室温暗处保存；（5）用前，将比浊管在旋转振荡器上混匀。

如浮现大颗粒，应更换；（6）每月更换比浊管或复检比浊管旳浊度。

5 操作环节5.1 制备接种菌液5.1.1 增菌法环节如下：（1）选琼脂平板上形态相似旳菌落至少4－5个，用接种环挑其顶部，移至4－5ml肉汤或大豆酪蛋白消化液中；（2）置35℃培养至菌液浓度达到或超过比浊管浓度（一般需2－6小时），浓度约1－2×108CFU/ml；（3）用生理盐水或肉汤校正菌液浓度，与比浊管相似。

可用光电比浊。

目测比浊须在合适光照下以黑色线条为反衬。

5.1.2 直接菌悬液法环节如下：（1）做常规药敏实验，可直接用过夜培养旳菌落（必须用无选择性培养基平板，如一般琼脂培养基）在盐水或肉汤中制备接种菌液。

菌液浓度调至0.5麦氏管；(2)此法合用于在肉汤培养基中生长不好旳细菌如嗜血杆菌、淋病奈瑟氏菌和链球菌及葡萄球菌旳甲氧苯青霉素或苯唑青霉素旳耐药实验；（3）当用此法做复方磺胺药旳实验时，从平板上直接挑菌落时会携带相称量旳拮抗剂，导致敏感菌株旳抑菌环内浮现轻微旳生长菌膜。

5.2 接种平板环节如下：（1）校正旳菌液须在15分钟内使用。

用一无菌棉试子蘸取菌液并在上端管壁旋转挤压几次，去掉过多旳菌液；（2）用试子涂布整个琼脂平板表面，反复涂布几次，每次将平皿旋转60度，保证涂布均匀。