K_ras基因点突变在非小细胞肺癌中的意义

KEY WORDS: NSCL C; P CR; K ras mut atio n 癌基因突变和肿瘤的发生有密切的关系。通过 癌基因的检测有可能早期发现肿瘤 , 判断预后, 并为 治疗方案提出依据。作者应用聚合酶链反应结合限 制性片段长度多态性分析检测了 41 例非小细胞肺癌
收稿日期 : 2004 09 14 修回日期 : 2005 02 10 作者简介 : 张健杰 ( 1962 ) , 男 ( 汉 族 ) , 山西 运城人 , 副主任 医师 , 从 事 呼吸专 业 . T el: ( 0755) 61385430; E mail: zh angj ianji e@ m edmail. com. cn
Conclusion
T he K r as codo n 12 po int
muta tio n play s an impo r tant ro le in the pro cess o f N SC L C. I t c ould be a n inde pendent f actor that has an adver se impact on the pro gno sis o f lung cancer. C ig are tte smoking is an impo rta nt f acto r that causes K r as mutation in adenocar cinoma of the lung.
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西 安 交 通 大 学 学 报 ( 医 学 版 )
第 26 卷
1 对象与方法 1. 1 研究对象 41 例 NSCLC 患者, 包括肺腺癌 22
吸烟组 ( P < 0. 05, 表 2) 。比较肺腺癌中不同吸烟指 数和 K r as 基因点突变关系未见显著性差异( 表 3) 。
表 1 K ras 基因点突变与 NSCL C 临 床特征的关系 T able 1 T he relationship between K r as mut ation and clinical v ariables in N SCLC
2
n 28 13
Po sit ive 6 4
Neg ative Percent age 22 9 21. 42
P
30. 76 > 0. 05 > 0. 05 14. 28 29. 60 > 0. 05 > 0. 05
41 53.6( 47~ 73) 54. 9(38~ 69) 14 27 28 2 8 5. 43 12 19 5. 32
T o e xplo re the clinical sig nif icance of K r as mut atio n in non sma ll cell lung cancer .
A K ra s codon 12 po int m utatio n w as de tected by r estr ictio n fr agment length po lym or phisms co mbined
710004;
应用聚合酶链 反应结合 限制性片段 长度多
态性分析技术检测 41 例非小细胞肺癌 ( N SCL C) , 21 例肺癌癌旁正常肺组织和 21 例肺癌支 气管旁淋巴结组织 中 K ras 基因第 12 位密码子点突变。 结果 41 例 NSCL C 中有 10 例 K r as 基因点突变 , 发生率为 24. 39% 。 K ras 基因 点突变 同患者性别、 年龄、 肿瘤大小、 分化程度、 临床分期和肿瘤 类型无 明显关 系 , 吸 烟组 K r as 基因 点突变 率高于 非吸烟 组 , 但统计学处理无显著性差异 , 进一步分层 比较发现肺腺癌 K r as 基因 点突变 与吸烟 有密切关 系 , 但与吸烟 量大小 及时 间长短无关。 21 例肺癌支气管旁淋巴结组织中检出 4 例 K ras 基因 点突变 , 均为转移 淋巴结。 K ras 基 因突变组 死亡 率明显高于非突变组 , 统计学处理有显著 性差异( P < 0. 05) 。 结论 关键词 : 非小细胞肺癌 ; 聚合酶链反应 ; K r as 基因点突变 中图分类号 : R734. 2 文献标识码 : A 文章编号 : 1671 8259( 2005) 04 0349 03 K r as 基因 第 12 位密码 子点突 变在 NSCL C 的发 病机制中起重要作用 , 是影响肺癌预后的 独立因素。吸烟是肺腺癌中 K ras 基因点突变的一个重要因素。
张健杰 , 杨德昌 , 吉昌华 , 何积银
( 1. 深圳 铁路医院内科 , 广东深圳 3. 第四军医大学生物化学 教研室 , 陕西西安 摘要 : 目的 探讨 K r as 基因点突变在非小细胞肺癌中的临床意义。 方法
1 2 3 2
518001; 2. 西安交通 大学第二医院呼吸内科 , 陕西西安 710033)
( no n small cell lung cancer, N SCL C) , 21 例肺癌癌 旁正常肺组织和 21 例肺癌支气管旁淋巴结组织中的 K ras 基因第 12 位密码子点突变, 并结合临 床进行 了分析 , 重点探讨了吸烟在肺癌发病机制中与 K ras 基因点突变的关系和 K r as 基因点突变作为检测肺 癌肿瘤微转移标记物的可能性。
Variable Male Female Age* Nonsmo ker Smoker Tum or dim ension( cm ) *
* * *
例, 肺鳞癌 18 例 , 大细胞肺癌 1 例。其中男性 28 例, 女性 13 例。平均年龄( 58 16) 岁。有吸烟史 27 例, 无吸烟史 14 例。 1. 2 标本采集 均为手术切除和纤维支气管镜下活 检取材的新 鲜肿 瘤组织 标本。手术 切除 标本中 有 21 例取得癌旁正常肺组织和肺癌支气管旁淋巴结组 织。癌旁正常肺组织为距肿瘤边缘 5 cm 以外经病理 检查证实无癌细胞浸润的肺组织。 1. 3 DNA 提 取 取米粒 大小组 织块剪 碎后 放入 50 L DNA 抽 提液 中 ( 含 10 mmo l/ L T r is H Cl, 10 mmo l/ L EDT A, 20 m g/ L 胰 RNA 酶, 200 mg/ L 蛋白酶 K, 加 100 g/ L SDS 至终浓度 5 g/ L ) 。 55 ! 水浴 2 h 以上, 酚- 氯仿抽提, 无水乙醇沉淀。 1. 4 P CR 扩增反应 扩增引物由上海生物工程中 心合成, 其序列如下 : 正链引物 5∀T AA ACT T GT AGT T GGAGCC3∀ 负链引物 5∀T CT AT T GT T GGAT CAT AT T C3∀ PCR 反应总体积 30 L , 内含引物各 0. 2 mol/ L , dNT P 各 200 mo l/ L , T aq DNA 聚合 酶 1. 0 u 及 DNA 模板 2 L 。分 别按 93 ! 50 s, 65 ! 1 m in, 72 ! 1 min 三个步骤反复循环 35 次。 1. 5 PCR RF L P 法检测 K ras 基因第 12 位密码子 点突变 PCR 反应终产物用无水乙醇沉淀, T E 液溶 解, 加入 10 u M spI 和 10 # 酶解缓冲液, 37 ! 消化 4 h 至过夜。酶解产物用 20 g/ L 琼脂糖凝胶电泳分离鉴 定, 溴化乙锭染色, 紫外线灯下观察结果。 1. 6 统计学处理 计量资料采用 t 检验, 计数资料 采用 2 结 2. 1
第 26 卷第 4 期 2 0 0 5年 8月
西 安 交 通 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) Jo ur nal of X i an Jiao to ng U niv ersity ( M edical Scie nce s)
V ol. 26 N o. 4 A ug. 2005
K ras 基因点突变在非小细胞肺癌中的意义
Correlation between K ras gene mutation and non small cell lung cancer
Zhang Jianjie 1 , Yang Dechang 2 , Ji Chang hua 3 , H e Jiyin 2 ( 1. Depart ment of Int ernal M edicine, Railw ay H o spit al, Shenzhen 518001; 2. Depart ment of Respirat ion, Seco nd H ospit al o f Xi an Jiaot ong U niv er sit y, Xi an 710004; 3. Depart ment of Biochemist ry , T he Fo urt h M ilitary M edical U niv er sit y, Xi an 710033, China) ABSTRACT: Objective Methods
with polymer ase chain r eaction in 41 tissues f ro m non sm all cell lung c ancer ( N SCL C) , 21 no rma l tissue s fr om near by tumo r and 21 lymph nodes f ro m near by bro nchi.
Results
K ras muta tio n was de tected in 10 o f 41 N SCL C
( 24. 39% ) . T her e wa s no r elationship be tween K r as mutation a nd the age, sex , diffe rentiation o f tumo r , tumo r vo lume, histo log ic ty pe and tum or stage . K ras m uta tio n w as mo r e c omm on in smo king g ro up than in no n smo king gr oup, but the statistical co mpariso n w as not significant. T here w as a str ong link betw een cig ar ette smo king and K r as po int muta tio n in lung adeno car cino ma, but ther e w as no r ela tio n betw een c iga ret te smoking amo unt and K r as muta tio n. K r as mutation w as f ound in 4 o f 21 me tasta tic lymph no tes. The mor tality in po sitiv e K r as mutation w as sig nif icantly higher tha n tha t in ne gative K r as mutation ( P < 0. 05) .
Dif ferent iat ion of tumo r * Poo rly dif ferent ia ted
16 11 8
5 3 2
11 8 6
31. 25 27. 27 25. 00 > 0. 05
Moderately diff erentiat ed Weel differentiated H ist olog ic ty pe Squa mous cell carcino ma Adenocarcino ma Larg e cell carcinom a Tum or stag e ∃ + % &+ ∋ Ly mph no te* Metast asis Nom etast asis