克伦特罗ELISA快速检测的几点操作体会
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成 。当然 ， 多道移 液枪适 合 整板样 品 的检测 ， 酶 加
然 ， 保 证 样 品充 分被 提 取 ． 适 当延 长 涡旋 时 为 可
间 、 心时 间及离 心转 数 。 离
３ 试 剂 的 准 备
标 物 、 物 、 止液 时可 整瓶加 入 。如 果只需 要对 底 终 少 量样 品检 测 时 ， 酶标 物 、 物 、 加 底 终止 液 动作 一 定要 迅速 、 准确 ， 避免 枪 头碰壁 或液 体溅 出 。
翻蝌广￣ ｏｏ ２ｉ 年第１ 期 ５
３ ５
检测分析
Ｄ ｍ ｏ ｎ ， ｓ ｉｉａ （ ， ｎ ｄｊ ｉ ａ Ａｄ ｔ ｙ
克伦特 罗 Ｅ ｌ 快速 检测 的几点 操作 体会 Ｌ
马 丽
克伦特 罗属 于 一 兴奋 剂类 药 物 ， 以提 高脂 可
平衡 后使 用 试剂 盒 中本次 实验 不需用 的部分应
抗 体 可 与 吸 附 在 固相 载体 上 的抗 原 或 抗 体 发 生 特异 性结 合
２ 试样 的准 备 ２１ 对 于尿 样 可直 接 用 于检 测 ． 者 样 品 比较 浑 ． 或 浊时， 可适 当离 心 。Leabharlann Baidu尿样 冷冻 时 。 将尿 样 回温 应
再测 。 ２２ 饲 料 样 品要 按 照 说 明 书 的 处 理 步 骤 进 行 当 ．
６１ ＬＳ ． Ｅ ＩＡ就是靠 洗涤 来达 到分离 游离 的和结合 的酶标 记物 的 目的 。通 过洗涤 以清 除残 留在 板孔 中没 能 与 固相 抗 原或 抗体 结 合 的物质 ． 以及 在反 应 过 程 中非 特 异 性地 吸 附 于 固相 载 体 的 干扰 物 质 。可 以说 在 Ｅ ＩＡ操 作 中 ， 涤是 最 主要 的关 ＬＳ 洗 键 技 术 ， 引起 操 作 者 的 高度 重 视 ． 应 操作 者 应 严 格 按要 求洗涤 ． 不得 马虎 。 ６２ 洗 板时尤 其是将 孔 内液体 甩干 时 ， ． 动作要 快 、 要 干 净利 落 ， 要把 整板 垂直 倒 置 ， 将液 体甩 出 ， 防 止各 孔液体 混流 ．最后在 吸水 纸上拍 干 ．不 可甩
３１ 不 同批 次 的试 剂 盒 不 能混 用 ． ． 因为 抗体 和微 孔 板具有 盒 与批 次 的特异 性
５ 保 温 孵 育
５１ 在 Ｅ ＩＡ 中一 般有 两次 抗原 抗 体反 应 ． ． ＬＳ 即加 酶结合 物和 加底 物后 。抗 原抗 体反应 的完 成需 要 有 一 定 的温 度 和时 间 ，这 一保 温 过程 称 为温 育 ． 保 温过 程按 照说 明书要 求 ． 一般 为常温 （０ ２ ｏ ２ ５Ｃ） 温育 ． 可根 据室温 适 当调节保 温 时间 ５２ 在孵 育 期 间 ， ． 如果 工作 台温 度过低 ， 应适 当铺
马
丽 ： 州 市饲 料 质 量监 督 检 验 站 。 沧
５３ 孵 育时 间的计 算越 规范 越好 ．保 持添加 标准 ．
检 测 分 析
３ ６
饲科广￣ ｏｏ ２ｌ年第１ 期 ５
Ｄｅｍａ ｎ ｄｎｙ ｔ ｉ／ａ Ａ ｌｉ ｅ ｎｏ ｎ ｏｓ ｒ ｔ ｓ
品 的一 致 性 ， 先添 加 标 准 品后再 添加 样 品 ． 有利 ７２ 在定 量 测定 中 ． 入底 物 后 的反 应 温度 和 时 ． 加
４ 加 样
１ 原 理
４１ 在 Ｅ ＩＡ 中一般 有 ４次 加样 步 聚 ． ． ＬＳ 即加标 本
Ｅ ＩＡ方法 的基本 原理是 酶分 子 与抗体 或抗 ＬＳ 体 分 子共 价结 合 ． 种结 合 不会 改变 抗 体 的免 疫 此
学特性 ． 也不 影 响酶 的生 物 学活 性 。此 种 酶标 记
肪型 动物 的瘦 肉率和加 速 动物生 长 。目前 由于 多 起克 伦 特罗 中毒 事 件且 出现 了死亡 案 例 ． 因此被 禁止 使用 克 伦特 罗 Ｅ ＩＡ快速 检测试 剂 盒与经 ＬＳ 典色 谱 法 相 比 ． 有 操 作 过 程 简 单 、 品处 理 快 具 样 捷 。 同 时分 析 多 个 样 品 ， 析 时 间短 、 本低 、 可 分 成 灵 敏度 高且对 环境 污染 小等 优点 。
或样 品 、 结合 物 、 物 、 止液 。加 样 时应 将 所 酶 底 终 加物 加 在板 孔 的底 部 ． 免 加 在 孔 壁 上部 。 注 避 并 意不 可溅 出 。 可 产 生 气 泡 ． 不 当有 气 泡 时 可 用 干
净 的枪 头小 心刺 破 ４２ 加 标准 及样 品 时一般 用微 量加样 器 ．按规 定 ．
及 时放 回冰箱 保存
３ 检 测 过程 中应 尽 量保 持 室温 ２ ～ ５ ． ４ ０ ２ ℃．避 免 在 通 风 口操 作 ， 度 过 低 、 热 或 蒸 发都 会 影 响 温 过 检 测 数 据 的 准 确性 同样 不 应 再 阳光 直 射 下 实 验， 防止 过热 或蒸发 带来 影 响。
的量 加 入 板 孔 中 。 次 加标 本 应 更 换 吸嘴 ． 免 每 以
发 生交 叉污 染
４３ 在加 酶标 物 、 物 、 止 液 时 ， 议尽 量 使 用 ． 底 终 建 多 道 移液 枪 ． 以缩短 反应 时间 。尤 其 是酶 标 物 和 底 物 液 用 定 量 多 道 加 液 器 ．使 加 液过 程 迅 速 完
垫 纸 巾或其他 材料
３２ 按试 剂盒 说 明书 的要 求 准备实 验 中需用 的试 ． 剂 。Ｅ Ａ 中用 的蒸 馏水 或去 离子水 ．包 括用 于 ＨＳ 洗 涤 的应 为新鲜 的 和高质 量 的 自配 的缓 冲液 应 用ｐ Ｈ计 测量较 正 。 ３３ 从冰 箱 中取 出的实验用 试剂 应待 温度 与室 温 ．
于检测 结果 的准 确性 。
６ 洗 板
间应 按规定 力求 准确 ７３ 定性 测 定 的显 色可 在 室温 进行 ． 间一 般不 ． 时
需 要 严格 控制 ． 有时 可根 据 阳性对 照 孔 和阴性 对 照孔 的显 色情 况 适 当缩 短或延 长 反应 时 间 ． 时 及 判断
８ 测定
然 ， 保 证 样 品充 分被 提 取 ． 适 当延 长 涡旋 时 为 可
间 、 心时 间及离 心转 数 。 离
３ 试 剂 的 准 备
标 物 、 物 、 止液 时可 整瓶加 入 。如 果只需 要对 底 终 少 量样 品检 测 时 ， 酶标 物 、 物 、 加 底 终止 液 动作 一 定要 迅速 、 准确 ， 避免 枪 头碰壁 或液 体溅 出 。
翻蝌广￣ ｏｏ ２ｉ 年第１ 期 ５
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检测分析
Ｄ ｍ ｏ ｎ ， ｓ ｉｉａ （ ， ｎ ｄｊ ｉ ａ Ａｄ ｔ ｙ
克伦特 罗 Ｅ ｌ 快速 检测 的几点 操作 体会 Ｌ
马 丽
克伦特 罗属 于 一 兴奋 剂类 药 物 ， 以提 高脂 可
平衡 后使 用 试剂 盒 中本次 实验 不需用 的部分应
抗 体 可 与 吸 附 在 固相 载体 上 的抗 原 或 抗 体 发 生 特异 性结 合
２ 试样 的准 备 ２１ 对 于尿 样 可直 接 用 于检 测 ． 者 样 品 比较 浑 ． 或 浊时， 可适 当离 心 。Leabharlann Baidu尿样 冷冻 时 。 将尿 样 回温 应
再测 。 ２２ 饲 料 样 品要 按 照 说 明 书 的 处 理 步 骤 进 行 当 ．
６１ ＬＳ ． Ｅ ＩＡ就是靠 洗涤 来达 到分离 游离 的和结合 的酶标 记物 的 目的 。通 过洗涤 以清 除残 留在 板孔 中没 能 与 固相 抗 原或 抗体 结 合 的物质 ． 以及 在反 应 过 程 中非 特 异 性地 吸 附 于 固相 载 体 的 干扰 物 质 。可 以说 在 Ｅ ＩＡ操 作 中 ， 涤是 最 主要 的关 ＬＳ 洗 键 技 术 ， 引起 操 作 者 的 高度 重 视 ． 应 操作 者 应 严 格 按要 求洗涤 ． 不得 马虎 。 ６２ 洗 板时尤 其是将 孔 内液体 甩干 时 ， ． 动作要 快 、 要 干 净利 落 ， 要把 整板 垂直 倒 置 ， 将液 体甩 出 ， 防 止各 孔液体 混流 ．最后在 吸水 纸上拍 干 ．不 可甩
３１ 不 同批 次 的试 剂 盒 不 能混 用 ． ． 因为 抗体 和微 孔 板具有 盒 与批 次 的特异 性
５ 保 温 孵 育
５１ 在 Ｅ ＩＡ 中一 般有 两次 抗原 抗 体反 应 ． ． ＬＳ 即加 酶结合 物和 加底 物后 。抗 原抗 体反应 的完 成需 要 有 一 定 的温 度 和时 间 ，这 一保 温 过程 称 为温 育 ． 保 温过 程按 照说 明书要 求 ． 一般 为常温 （０ ２ ｏ ２ ５Ｃ） 温育 ． 可根 据室温 适 当调节保 温 时间 ５２ 在孵 育 期 间 ， ． 如果 工作 台温 度过低 ， 应适 当铺
马
丽 ： 州 市饲 料 质 量监 督 检 验 站 。 沧
５３ 孵 育时 间的计 算越 规范 越好 ．保 持添加 标准 ．
检 测 分 析
３ ６
饲科广￣ ｏｏ ２ｌ年第１ 期 ５
Ｄｅｍａ ｎ ｄｎｙ ｔ ｉ／ａ Ａ ｌｉ ｅ ｎｏ ｎ ｏｓ ｒ ｔ ｓ
品 的一 致 性 ， 先添 加 标 准 品后再 添加 样 品 ． 有利 ７２ 在定 量 测定 中 ． 入底 物 后 的反 应 温度 和 时 ． 加
４ 加 样
１ 原 理
４１ 在 Ｅ ＩＡ 中一般 有 ４次 加样 步 聚 ． ． ＬＳ 即加标 本
Ｅ ＩＡ方法 的基本 原理是 酶分 子 与抗体 或抗 ＬＳ 体 分 子共 价结 合 ． 种结 合 不会 改变 抗 体 的免 疫 此
学特性 ． 也不 影 响酶 的生 物 学活 性 。此 种 酶标 记
肪型 动物 的瘦 肉率和加 速 动物生 长 。目前 由于 多 起克 伦 特罗 中毒 事 件且 出现 了死亡 案 例 ． 因此被 禁止 使用 克 伦特 罗 Ｅ ＩＡ快速 检测试 剂 盒与经 ＬＳ 典色 谱 法 相 比 ． 有 操 作 过 程 简 单 、 品处 理 快 具 样 捷 。 同 时分 析 多 个 样 品 ， 析 时 间短 、 本低 、 可 分 成 灵 敏度 高且对 环境 污染 小等 优点 。
或样 品 、 结合 物 、 物 、 止液 。加 样 时应 将 所 酶 底 终 加物 加 在板 孔 的底 部 ． 免 加 在 孔 壁 上部 。 注 避 并 意不 可溅 出 。 可 产 生 气 泡 ． 不 当有 气 泡 时 可 用 干
净 的枪 头小 心刺 破 ４２ 加 标准 及样 品 时一般 用微 量加样 器 ．按规 定 ．
及 时放 回冰箱 保存
３ 检 测 过程 中应 尽 量保 持 室温 ２ ～ ５ ． ４ ０ ２ ℃．避 免 在 通 风 口操 作 ， 度 过 低 、 热 或 蒸 发都 会 影 响 温 过 检 测 数 据 的 准 确性 同样 不 应 再 阳光 直 射 下 实 验， 防止 过热 或蒸发 带来 影 响。
的量 加 入 板 孔 中 。 次 加标 本 应 更 换 吸嘴 ． 免 每 以
发 生交 叉污 染
４３ 在加 酶标 物 、 物 、 止 液 时 ， 议尽 量 使 用 ． 底 终 建 多 道 移液 枪 ． 以缩短 反应 时间 。尤 其 是酶 标 物 和 底 物 液 用 定 量 多 道 加 液 器 ．使 加 液过 程 迅 速 完
垫 纸 巾或其他 材料
３２ 按试 剂盒 说 明书 的要 求 准备实 验 中需用 的试 ． 剂 。Ｅ Ａ 中用 的蒸 馏水 或去 离子水 ．包 括用 于 ＨＳ 洗 涤 的应 为新鲜 的 和高质 量 的 自配 的缓 冲液 应 用ｐ Ｈ计 测量较 正 。 ３３ 从冰 箱 中取 出的实验用 试剂 应待 温度 与室 温 ．
于检测 结果 的准 确性 。
６ 洗 板
间应 按规定 力求 准确 ７３ 定性 测 定 的显 色可 在 室温 进行 ． 间一 般不 ． 时
需 要 严格 控制 ． 有时 可根 据 阳性对 照 孔 和阴性 对 照孔 的显 色情 况 适 当缩 短或延 长 反应 时 间 ． 时 及 判断
８ 测定