甘草有效成分提取

甘草有效成分（甘草酸，甘草次酸，甘草苷）的提取
一、甘草酸的提取：
试剂：甘草粗粉，浓H2SO4，95%乙醇，80%乙醇，浓氨水，冰醋酸。

取甘草粗粉40g,加水煮沸2次(15倍,1.25h;12倍，1h),脱脂棉过滤，合并滤液，浓缩，冷却，搅拌下加入浓硫酸至不再析出甘草酸粘性沉淀为止（约PH=1）。

放置，倾出上清液，棕色粘性沉淀用水洗涤数次，60℃以下干燥，粉碎，即得甘草酸粗品，称重。

将甘草酸粗品称重后加3.5—4倍量95%乙醇浸泡0.5—1h，抽滤，滤渣加3倍量80%乙醇回流1—2h，滤液冷却后加浓氨水（边加边搅拌）调至弱碱性（PH=8），减压回收乙醇至糖浆状，趁热加入等体积冰醋酸浸泡洗涤，放冷，析出结晶，过滤，即得甘草酸单铵盐粗品。

称重后，用70—80%乙醇重结晶，即得甘草酸单铵盐纯品，称重，得率。

二、甘草次酸的提取：
试剂：5%H
2SO
4
，氯仿，乙醇。

取甘草酸单铵盐，加5%H
2SO
4
，加热10h,抽滤，水洗至中性，干燥，即得白
色甘草次酸粗品，加热氯仿溶解，趁热过滤，所得滤液放冷，通过AL
2O
3
柱，用
氯仿洗脱，得甘草次酸粗品，加乙醇重结晶，得甘草次酸结晶。

三、甘草苷的提取：
试剂：70％乙醇，甲醇。

取干燥药材粗粉约lOg，精密称定，加10倍量70％乙醇，回流提取2次，每次3h回流提取，纱布过滤，将提取液倒入已恒重的蒸发皿中，水浴浓缩至干，再减压干燥至恒重，得浸膏。

精密称取甘草浸膏量的l／20置于25mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理30min，冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用045um的微孔滤膜过滤，即制得供试品溶液。

四、药典同时提取甘草酸和甘草苷：
试剂：70％乙醇，
取本品粉末（过三号筛）0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

五、含量测定：照高效液相色谱法(附录Ⅵ D)测定。

1.色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为
流动相A，以0.05%磷酸为流动相B，按下表进行梯度洗脱；柱
温35℃；检测波长为237nm。

理论板数按甘草苷峰计算应均不
低于5000。

时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）
0～8 19 81
8～35 19→50 81→50
35～36 50→100 50→0
36～40 100→19 0→81
2.对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加 70%乙醇制成每1ml各含0.02mg、0.2mg的溶液，即得。

3.测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，
测定，即得。

本品按干燥品计算，含甘草苷（C
21H
22
O
9
）不得少于0.50%；甘草酸(C
42
H
62
O
16
)
以甘草酸铵计不得少于2.0％。

技术文章
Ecosil C18色谱柱用于2010版中国药典方法甘草中甘草苷、甘草酸铵的含量测定谱图
Ecosil C18色谱柱用于2010版中国药典方法甘草中甘草苷、甘草酸铵的含量测定谱图
关键词：Ecosil C18，2010版中国药典，甘草酸铵，甘草苷，含量测定，谱图
2010年中国药典标准：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm。

理论塔板数按甘草苷峰计算应不低于5000。

供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇分别制成每1ml含甘草苷20μg、甘草酸铵0.2mg的溶液，即得(甘草酸重量一甘草酸铵重量/1.0207)。

对照品溶液液相色谱图
组分名称保留时间
（min）峰面积
（mAU*s）
塔板数(N)分离度（Rs）拖尾因子
甘草苷13.207280.2813813- 1.06甘草酸铵31.786562.1726999253.440.94
供试品溶液液相色谱图
组分名称保留时间
（min）峰面积
（mAU*s）
塔板数(N)分离度（Rs）拖尾因子
甘草苷13.188280.6103513522- 1.05
甘草酸铵31.801395.8321525851252.810.92
谱图来源：中国广州分析测试中心罗辉泰
色谱条件：仪器配置：Agilent 1100
色谱柱：Ecosil C18 4.6mm*250mm，5μm进样器：自动进样器（G1313A）流动相：A：0.05% 磷酸；B：乙腈，梯度洗脱泵：四元泵带真空脱气机（G1354A）流速：1.0 mL/min 柱温：35℃柱温箱：（G1316A）
检测：237nm 进样量：10μL检测器：紫外检测器（G1314A）色谱柱号：EC182546软件：Agilent Chemstation
（请注明是否与药典方法一致是□否□）
所用样品都用0.45um有机滤膜减压过滤。