HPLC测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量

HPLC测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量

HPLC测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量

摘要：盐酸小檗碱为黄色结晶性粉末，临床主要用于肠道感染及菌痢等。盐酸小檗碱对溶血性链球菌、金葡菌、霍乱弧菌、志贺痢疾杆菌、白喉杆菌等有抑制作用。本文采用高效液相测定了黄连上清片中盐酸小檗碱的含量，固定相为USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（5μm，4?6mm×250mm），乙腈-水（54∶46）（每100mL中加十二烷基硫酸钠0.34g与磷酸二氢钠0.17g，磷酸调pH3.0）为流动相；盐酸小檗碱在1.0～50mg范围内呈良好的线性关系。盐酸小檗碱的平均回收率为99.21%，RSD为0.95%；此方法简便、准确、重现性好，可用于黄连上清片中盐酸小檗碱的含量测定。

关键词：黄连上清片；盐酸小檗碱；高效液相

黄连上清片为糖衣片，主治清热通便，散风止痛。黄连上清片由黄连、栀子（姜制）、连翘、蔓荆子（炒）、防风、荆芥穗、白芷、黄芩、菊花、薄荷、酒大黄、黄柏（酒炒）、酒大黄等组成，常用于头晕目眩、咽喉肿痛、大便秘结、暴发火眼、口舌生疮、小便短赤。黄连，多年生草本植物，是一种常用中药，最早在《神农本草经》中便有记载。黄柏，为芸香科植物黄皮树或黄檗的干燥树皮，用于湿热泻痢，黄疸，带下，热淋，脚气，痿辟，骨蒸劳热，盗汗，遗精，疮

天正精细化学试剂厂）、磷酸二氢钠（浙江省海宁市上峰化工有限公司）、磷酸（宜兴奥瑞格医药科技有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件

色谱柱为USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（规格4.6mm ×250mm，5μm）；乙腈-水（54∶46）（每100mL中加十二烷基硫酸钠0.34 g与磷酸二氢钠0.17 g，磷酸调pH 3.0）为流动相；流速1.0mL?min-1；检测波长350nm；柱温：30℃[1-5]。

2.2 供试品溶液的制备

精密量取黄连上清片适量置50mL量瓶中，加流动相适量，超声处理5分钟，放置至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取盐酸小檗碱对照品适量，用甲醇配置成每1mL 溶液中含盐酸小檗碱5.5mg。

2.4 阴性干扰试验

在处方中去黄连、黄柏，取栀子（姜制）、连翘、蔓荆子（炒）、防风、荆芥穗、白芷、黄芩、菊花、薄荷、酒大黄、酒大黄等原辅料，按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂，制成阴性对照溶液，用以上选定的测定条件进行吸收

曲线绘制，观察在与盐酸小檗碱相同的保留时间处是否存在吸收峰，结果表明：选定的条件测定盐酸小檗碱无干扰，具有较强的专属性。

2.5 标准曲线的制备

制备浓度为1.0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0mg?mL-1的盐酸小檗碱对照品溶液，分别吸取上述对照品溶液10μL注入HPLC，记录色谱图，以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明，盐酸小檗碱对照品在1.0～50.0mg范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

依照2.3项下方法制备对照品溶液，精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液10μL重复进样5次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.83%。结果表明，本方法具有良好的精密度。

2.7 重现性试验

分别称取同批黄连上清片样品6份，依照2.2项下方法制备供试品溶液，按上述含量测定项下方法，分别精密吸取上述供试品10μL注入HPLC，测定含量，并计算样品的RSD 值为0.95%。结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.8 稳定性试验

取黄连上清片样品，依照2.2相下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，精密吸取上述溶液10μL，分别在0，4，

8，10小时注入高效液相色谱仪，进样测定，供试品盐酸小檗碱峰面积积分值的RSD为0.65%，说明盐酸小檗碱至少在10小时内稳定。

2.9 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的盐酸小檗碱对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.21%，RSD 为0.95%。

3 讨论

本实验分别考察甲醇-水-冰醋酸（15∶85∶0.1），乙腈-1%冰醋酸溶液（22∶78），乙腈-水（54∶46）（每100mL中加十二烷基硫酸钠0.34g与磷酸二氢钠0.17g，磷酸调

pH3.0）不同比例的流动相，结果以乙腈-水（54∶46）（每100mL中加十二烷基硫酸钠0.34g与磷酸二氢钠0.17g，磷酸调pH3.0）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-水（54∶46）（每100mL中加十二烷基硫酸钠0.34g与磷酸二氢钠0.17g，磷酸调pH3.0）为流动相为流动相。本文对黄连上清片中的盐酸小檗碱进行含量测定的试验方法，结果表明该法不受其它成分的干扰，分离度好，精密度、重现性佳，回收率高，可用于黄连上清片中盐酸小檗碱的含量测定。

参考文献

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