免疫学质量控制流程修订稿
免疫学质量控制流程
免疫学质量控制流程免疫学是研究机体对抗病原微生物和其他有害物质的免疫应答过程的学科。
在临床实验室中，进行免疫学实验需要进行严格的质量控制，以保证实验结果的准确性和可靠性。
免疫学质量控制流程包括实验前的样本准备、实验中的质控样本使用和实验后的结果分析等环节。
首先，实验前的样本准备是免疫学质量控制的第一步。
样本准备需要注意以下几个方面：样本采集时间、方法和容器等。
样本采集应在固定时间范围内进行，以避免时间差异对结果产生影响。
采集方法应遵循规范操作程序，以确保样本质量。
样本应存放在特定的容器中，以防止污染和交叉感染。
其次，在实验过程中，质控样本的使用是关键环节。
质控样本是已知浓度或者阳性/阴性的样本，用于确保实验方法和结果的准确性。
实验中应使用质控样本进行标记、操作和分析。
质控样本的选择和使用需要根据不同实验的要求进行，例如，使用已知浓度的质控样本来进行实验结果的校准和标准曲线的制备，使用阳性和阴性对照样本来验证实验方法的准确性和灵敏度。
最后，实验后的结果分析是免疫学质量控制的最后一步。
在实验结果分析中，需要对实验数据进行详细的检查和统计分析。
检查数据的准确性和一致性，排除实验误差的干扰。
根据实验方法和实验结果的预期，进行统计学分析，评估结果的可靠性和显著性。
如果实验结果未能达到预期的质控标准，则需要重复实验或者重新评估实验方法。
综上所述，免疫学质量控制流程包括实验前的样本准备、实验中的质控样本使用和实验后的结果分析。
这一流程确保了实验结果的准确性和可靠性，为免疫学研究和临床诊断提供了可靠的依据。
通过良好的质量控制，可以有效避免实验误差和结果偏差，提高实验结果的可比性和可重复性，进一步推动免疫学领域的科学研究和临床应用。
临床化学、免疫学质量控制流程
临床化学、免疫学质量控制流程目的建立规范标准的贝克曼全自动生化分析仪质控操作程序，以保证检验结果的准确性。
范围适用于生化室常规检测项目。
责任每日大生化班工作人员负责贝克曼全自动生化分析仪所有测定项目的室内质量控制工作，并对失控原因进行分析和处理，科主任对所有项目的质量控制工作进行监督。
相关程序1、质控物的准备购买质量好、有效期长（从使用开始，至少1年有效）的质控物。
用去离子水复溶后，用子弹头塑料管分装，每只0.6ml冰冻保存，两周内有效。
每天从冰箱冷冻室取出化学质控品放置于室温约20min，轻轻颠倒混匀数次，使质控品完全溶解备用。
2、质控物分析的个数、浓度水平及频率每批使用1个浓度水平，每24h进行一次检测，一般在检测标本前检测，在质控在控的情况下进行常规标本的检测。
贝克曼全自动生化分析仪的质控品使用情况，见附表。
3、质控操作程序3.1 增加新的质控物3.1.1 增加一个外来质控物（非原装）：进入LIS系统的质控品设置界面，点击新增，填入仪器和质控物名称、质控号、批号、有效期，质控水平，点击保存，输入靶值及标准差，点击保存。
3.2 运行质控：进入编程样品菜单界面，输入架子号、位置号、样本编号，选择要做质控的项目，点击下一个，将质控物放到相应位置上，点击Run，仪器开始检测质控。
3.3 质量目标的制定根据CLIA’88和卫生部临床检验中心室间质评要求，以被测项目总误差的1/4乘以该项目的靶值所得的绝对值为一个标准差，作为室内质控的质量目标要求。
3.4 质控结果的判断规则：采用1-3s/2-2S/4-1S/10-X规则。
4、查看质控结果4.1 查看单次的质控结果：进入LIS系统的检验数据界面，输入质控品的样本编号，可看到所有项目的质控结果，右键点击转为质控数据可看到各项目的Levy-Jennings图；根据质控规则判断是否失控。
对失控的质控项目要及时分析失控原因采取措施纠正，并填写失控报告。
4.2 看某段时期统计后的质控：进入LIS系统质控管理的质控月统计界面，选择仪器、开始日期、结束日期，点击统计可看到不同时期对质控结果进行累积后的分期统计情况。
免疫学检验的质量控制
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第一节 免疫学检验质量控制的概念
• 免疫检验要保证检验结果的准确、可靠、及时、 有效，并尽可能使各实验室间检验结果有可比性， 这是免疫学检验质量控制的基本目的。
• 只有明确免疫学检验质量控制的有关概念，才能 真正理解免疫检验的质量控制，有助于准确、有 效地完成质量控制工作。
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• 质控品（quality testing materisls）
又称质控物，是指含量已知并处于与实际标本相 同的基质当中特性明确的物质，这种物质通常与其 他杂质混在一起，故质控品必须按患者标本一样对 待进行检测。
1、室内质控品：用于临床实验室标本检测误差的控制
2、室间质评样本： 评价实验室常规测定的准确度
又称高斯分布，指当一质控物用同一方法在不 同的时间重复多次测定，当测定数据足够多时， 以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相应 测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高， 中为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲 线，亦即正态分布。
• 正态分布的基本统计学含义
可用均数（X ）、标准差（s）和概率来说明 ，均数是位于曲线的正中线所对应的值。
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• 重复性条件（repeatability conditions） 在短的间隔时间内,在同一实验室对相同的测定
项目使用同一仪器设备，由相同的操作者获得相互 独立的测定结果的条件。
• 批（run）
在相同条件下所获得的一组测定。
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• 正态分布(gaussian distribution)
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三、检测试剂的批间差异
不同厂家 不同批号
免疫学检验的质量控制
（一）定量免疫检验
• 定量免疫检验通常需要使用全自动免疫分析仪， 在测定时须用校准品对仪器进行校准。
• 室内质控则应选择特定试剂盒或方法的测定范围 内的高、中和低三种浓度的质控品， 以监测不同 浓度标本测定结果的变化。
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（二）半定量免疫检验
• 半定量实验在免疫检验中比较少用，此类实验主 要有酶免疫试验、荧光免疫试验等，测定结果通 常以抗体的滴度、效价等表示。
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• 临床免疫检验试剂盒保质期一般为6个月以上，有 些检验机构为了节约成本，分数次使用试剂盒，势 必会使酶标抗原处于溶解状态，影响试验结果。
• 试剂盒抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成
• 抗体浓度越高（浓度大于10mg/ml），越稳定，易 保存；浓度低时，应加0.1%~1.5%的牛血清白蛋白 作保护剂。
• 利用可靠的定值血清对购入的试剂盒进行性能
检测和批间差异评价，只有质量符合实验质量
要求的试剂盒方可用于临床实际检测工作。
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• 引起试剂盒批间变异原因是多方面的：
1、试剂盒的原材料是依靠生物工程技术生产的， 生产技 术要求难度大，工艺提纯方法不好掌握， 质量控制要求较 高，产品质量不易稳定，使每批原材料的纯度和活性都有所 差别；
• 半定量免疫检验质控要点在于在有阴性质控的前 提下，采用多个相应滴度或效价的抗体作为室内 质控品，与临床标本同时测定。
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（三）定性实验
• 定性免疫检验是免疫学检验的重点，其测定方法有很多， 常以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定
结果。
• 定性测定的室内质控要点是控制测定下限，设置临界 cutoff值（CO值）的低值弱阳性质控物是定性室内质控的
临床免疫学检验质量控制流程
1.目的：规范罗氏Cobas e601电化学发光免疫分析仪的操 作和使用，确保检验质量 2.适用范围：免疫室罗氏Cobas e601电化学发光免疫分析 仪上的检测项目 3.职责：免疫实验室工作人员均须孰知并遵守本流程
分析前的质量控制 1.1正确保存Cobas e601相关的各种试剂：按试剂 SOP文件要求保存Cobas e601检测试剂（专用冰 箱2~8℃保存），无结冰、无过期试剂。 1.2核对、验收检验标本 1.2.1核对标本信息：通过LIS系统的样本接收程 序能正确接收标本。
考试题
1. 结合本专业的检验平台，举例说明分析中的 质量控制流程。 2. 分析后的质量控制流程。
实验室认可参考书—— 《临床免疫学检验质量管理与标准操作程序》 里有比较详细描述
免疫学检验项目和方法繁多，有定量检测和定性检测，不 可能制定统一的质量控制流程。 举例说明： 罗氏Cobas e601电化学发光免疫分析仪平台质量控制流 程
罗氏Cobas e601电化学发光免疫分析仪平台 质量控制流程
分析后的质量控制
1. 报告审核人员具有一定的资质，经科室考核合格并授 权后方可审核和发放检验报告。
2. 认真审核检验结果
2.1再次核对病人信息、核对检测项目和申请单项目是否一致。 2.2认真分析和核对检验结果 2.3和近期历史数据横向比较：有无不符、不可能、可疑的情况 2.4和临床诊断分析比较有无不符、不可能、可疑的情况
1.2.2验收检验标本 1.2.2.1标本采集管是否满足检验项目要求：目前罗氏 Cobas e601的检测项目均使用红色普通管或黄色分离 胶促凝管，不接受肝素管及枸橼酸钠抗凝管。 1.2.2.2标本采集量是否满足检验项目的要求：无特殊 情况（如血液高度浓缩和高度稀释的情况），检测标 本的样本量不少于3ml。 1.2.2.3标本本身是否满足检验要求：经过冻融循环的 样本和含有红细胞、凝块或颗粒物质的样本必须在检 测运行前离心；是否有重度脂血、溶血及其他特殊情 况：除了个别项目外，轻中度脂血和溶血可以接受， 不接受重度溶血的标本，以免影响检测结果的准确度。 特殊情况下：如患者自身不愿或无法再重新留取标本， 可发放检验报告，但结果仅供参考。
临床免疫学检验质量控制流程
临床免疫学检验质量控制流程临床免疫学检验质量控制流程范本1：引言本文档旨在描述临床免疫学检验的质量控制流程，以确保检验结果的准确性和可靠性。
质量控制是临床实验室中不可或缺的一环，可有效监测仪器的性能、试剂的质量以及人员的操作技术。
2：检验设备与试剂准备2.1 检验设备准备- 确认设备的功能完好，并进行日常维护。
- 校准设备，确保其准确性和精确度。
- 检查设备操作手册，以了解正确的操作方法和要求。
2.2 试剂准备- 确认试剂的有效期，弃用过期试剂。
- 遵循试剂的储存和操作要求。
- 验证试剂的批准文档和认证标识。
3：样本采集与处理3.1 样本采集- 根据标准采集样本，并确保正确的标识。
- 采集足够的样本以进行重复检验，以确保结果的可重复性。
3.2 样本处理- 对样本进行必要的预处理，如离心分离血浆或血清。
- 严格遵守处理样本的规定和程序。
- 记录样本处理的细节和步骤，以便追溯。
4：质量控制样品4.1 选择合适的质量控制材料- 使用具有已知浓度和稳定性的质控品。
- 根据实验室的需求选择合适的质控材料。
4.2 质控样本的制备与运行- 准备质控样品，并记录其浓度和相关信息。
- 将质控样品与待测样品一同运行，以评估检验方法的准确性。
- 运行质控样本的频率应符合实验室的要求和规定。
5：数据分析与解释5.1 数据的收集与整理- 准确记录检验结果和相关信息。
- 建立适当的数据库或系统，以整理和保存数据。
5.2 数据的分析- 对数据进行统计学分析，包括平均值、标准差、灵敏度和特异性等。
- 比较与质控样品的偏差，以评估检验方法的准确性和可靠性。
6：异常结果的处理6.1 异常结果的识别- 设定异常结果的阈值。
- 监测检验结果，及时发现异常结果。
6.2 异常结果的处理- 确认异常结果是否属于真正的异常或实验误差。
- 在确认异常结果后，采取适当的纠正措施，重新检验样品。
7：质量控制记录与审查7.1 记录- 记录每次检验的结果、质控样品的运行情况和异常结果的处理过程。
免疫学质量控制流程
免疫学质量控制流程为确保免疫学实验结果的准确性和可靠性，质量控制是不可或缺的一环。
本文将介绍免疫学质量控制的流程，包括样本收集与处理、实验操作、仪器设备校准以及数据分析等方面。
一、样本收集与处理在免疫学研究中，样本的质量对于实验结果至关重要。
所以，在进行实验之前，应确保样本的正确收集和处理。
1. 样本收集样本的收集应严格按照规定的方法和步骤进行，以避免污染或变质。
在收集血液样本时，应使用干净的采血针，避免任何外界污染。
同时，注意采集足够的样本量，以保证实验的可靠性。
2. 样本储存与保存采集到的样本应及时储存和保存。
血液等液体样本应置于适当的容器中，并避免受到光照和温度的影响。
固体样本应储存在干燥、密封、无菌的条件下，以防止变质和污染。
二、实验操作实验操作是免疫学质量控制的关键环节之一。
在进行实验操作之前，实验人员应受过专业培训，并掌握正确的操作方法和技巧。
1. 实验室操作规范实验室应建立健全的操作规范，包括实验前的准备工作、实验过程中的操作要求、实验后的清洁和消毒等方面。
实验人员应严格按照规范操作，确保每一步骤的准确性和一致性。
2. 质控样品的使用在每一次实验中，都应使用质控样品进行验证。
质控样品应具有已知的浓度或活性，以便评估实验结果的准确性。
定期检测质控样品，确保实验室仪器和试剂的性能符合要求。
三、仪器设备校准仪器设备的准确性对于实验结果的可靠性至关重要。
定期对仪器设备进行校准和验证，以确保其性能符合要求。
1. 校准方法仪器设备的校准方法应遵循官方标准或厂家提供的操作手册。
校准应包括设备的精度、线性范围、准确性和重复性等方面。
校准过程应详细记录，并定期进行复查。
2. 故障排除与维护如果出现仪器设备故障或异常，应及时进行排除并记录。
定期维护和保养仪器设备，以延长其使用寿命并保持准确性。
四、数据分析数据分析是免疫学研究的重要环节，它直接关系到实验结果的解读和应用。
1. 数据处理在进行数据处理之前，应确保数据的准确性和完整性。
免疫学检验室内质量控制操作程序-检验科免疫室作业指导书
免疫学检验室内质量控制操作程序1.目的：保证ELISA检测结果准确可靠,充分发挥其方法学的优点。
2.该SOP变动程序：本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
3.方法3.1分析前质控3.1.1人员培训实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：检验项目的基本原理（ELISA原理）；临床意义；熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点；熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）；熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。
某些特殊项目检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。
3.1.2.室内质控血清的制备：质控血清每年列出计划报质控组采购，一般采用CutOff值附近的阳性值；⑵质控血清-20℃冻存备用；⑶使用前室温复融。
3.1.3试剂盒选择卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品。
试剂盒评价：根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；通过询问试剂包被物的组成，如原料来源（基因工程或合成多肽），片段的组合（按比例混合或化学合成），片段的长短等判断试剂的优劣；参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩。
根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。
3.1.4仪器质控为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。
⑴移液器：ELISA加样量小（5-100ｕl），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内；水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。
免疫学检验的质量控制
免疫学检验的质量控制引言免疫学检验是一种重要的临床检验方法，广泛应用于疾病的诊断、治疗与预防。
而保证免疫学检验的质量控制则是确保检验结果准确可靠的关键因素之一。
本文将从质量控制的概念、质量控制的重要性、常用的质量控制方法等方面进行介绍。
质量控制的概念质量控制是通过标准化程序和方法来维持和改进检验过程的可靠性和准确性。
它包括内部质量控制和外部质量控制两个方面。
•内部质量控制：是指在实验室内部进行的一系列活动，旨在确保检验结果的准确性和可靠性。
这包括对仪器、试剂、设备、人员等进行监控和管理，以及按照标准操作程序进行实验。
•外部质量控制：是指通过参与外部质量评价和比对活动，与其他实验室进行对比，以评估实验室的检验准确性和可靠性。
质量控制的重要性质量控制对于免疫学检验的准确性和可靠性至关重要。
具体有以下几个方面的重要性：1.病人诊断与治疗：免疫学检验结果直接影响着疾病的诊断和治疗方案的制定。
如果质量控制不到位，检验结果可能出现偏差，导致误诊或误治疗。
2.科学研究：科学研究需要可重复性和可比性的数据支持，而质量控制正是保证检验结果的可靠性和可比性的手段之一。
3.实验室的信誉和声誉：质量控制是评价一个实验室工作质量的重要指标，一个严格遵守质量控制要求的实验室将获得更高的信誉和声誉。
常用的质量控制方法1.内部质量控制方法–定期校准：需要使用标准品对仪器进行定期校准，以确保仪器的精确度和准确性。
–仪器质量控制：使用已知浓度的质控品，对仪器进行日常的质量控制监测。
可以设定不同的质控水平，如低、中、高三个水平，以评估仪器的良率和准确度。
–仪器维护和保养：定期维护和保养仪器，保证其正常工作和准确性。
2.外部质量控制方法–参与外部质量评价：通过参与外部质量评价方案，接受其他实验室的比对。
这可以评估实验室的准确性和可靠性，并及时发现和纠正存在的问题。
–建立质量保证指标：建立适当的质量保证指标，参照国内外标准，对实验室的检验项目进行质量评价。
免疫学检验技术—免疫学检验的质量控制
通常为含蛋白质的缓冲液，对测定结果无 明显影响。
标准品浓度在方法的测定范围即可。
标准品的 基本条件
在规定保存条件下具有良好的稳定性
无已知传染危险性，对已知的血液传 播病原体必须做灭活处理。
标准品浓度在方法的测定范围即可。
二、定量、半定量和定性免疫检验
（一）定量免疫检验
• 定量免疫检验通常需要使用全自动免疫分析仪，在测 定时须用校准品对仪器进行校准。
3、质控血清盘：用于特定的定性免疫测定试剂盒的评价
第二节 免疫检验质量控制的特殊性
• 免疫学检验方法的种类较多，其测定方法的灵敏 度和特异性要比生化方法高得多，因此进行质量 控制的手段不能照搬生化模式。
• 免疫检验质量控制包括定量、半定量和定性免疫 检验三种类型。
一、标准品
（一）标准品的概念和分类
（三）定性实验
• 定性免疫检验是免疫学检验的重点，其测定方法有很多，常 以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定结果。
• 定性测定的室内质控要点是控制测定下限，设置临界cutoff 值（CO值）的低值弱阳性质控物是定性室内质控的关键。
• 应选择靶抗原或抗体浓度接近试剂盒或方法的测定下限的质 控品进行室内质量控制，并与临床标本的测定同时进行，这 一点对于使用肉眼判定测定结果的方法尤为重要
• 标准品（standard） 指含量明确的处于一定基质中其特性明确的物质， 通常用于比较检测未知的物质或成分。
• 标准品质量的优劣 直接影响样品的测定结果。
• 根据标准品性质的差异，可分为三级：
一级标准品 二级标准品 三级标准品
为冻干品，内含 载体蛋白，数量 有限，可使用 10~20年。通常 为国际标准品， 由WHO指定的实 验室制备
免疫学快速检测方法质量控制流程
免疫学快速检测方法质量控制流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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免疫学检验的质量控制
免疫学检验的质量控制免疫学检验在临床医学中扮演着至关重要的角色，它可以用于诊断、治疗和预防疾病。
然而，为了保证检验结果的准确性和可靠性，质量控制是至关重要的。
本文将探讨免疫学检验的质量控制方法和其在临床实践中的应用。
质量控制是一种评估实验室检验过程是否正常的方法。
它包括内部质量控制和外部质量控制两个方面。
内部质量控制是由实验室自行实施的，旨在评估实验室仪器和操作是否符合要求。
它包括了日常质检、校准和仪器维护等活动。
外部质量控制则是由独立机构或医疗质量评估组织提供的，旨在评估实验室与其他实验室的比对结果。
通过这两方面的质量控制，可以保证免疫学检验的准确性和可重复性。
在免疫学检验中，内部质量控制的重要性不言而喻。
实验室需要通过定期校准仪器、管理试剂和储存样本等手段来确保实验环境的稳定性。
同时，实验室还应该建立一套合理且可行的质控方案，包括质控样本的选取和评估标准的制定。
质控样本应当具备与临床样本相似的特点，并经过严格的验证和复现性测试。
评估标准应根据相关参考范围、生物学变异和临床要求等因素来确定。
外部质量控制在免疫学检验中也起着不可或缺的作用。
它可以提供实验室与其他实验室的比对结果，评估实验室的准确性和一致性。
参与外部质量控制的实验室会定期收到相同样本的检验结果，并与其他实验室的结果进行比对。
通过这种方式，实验室可以及时发现并纠正可能存在的问题，提高检验结果的可靠性。
除了内部和外部质量控制，还有一种重要的质量控制手段是参考范围的建立和维护。
参考范围是根据健康人群的检验结果来确定的，它反映了正常人群在一定概率分布范围内的检验结果。
通过与参考范围的比对，医生可以判断检验结果是否超出正常范围，从而辅助临床诊断。
总结起来，免疫学检验的质量控制是确保检验结果准确性和可靠性的重要环节。
内部质量控制、外部质量控制和参考范围的建立和维护是质量控制的主要手段。
实验室应该建立合理的质控方案，并严格遵守相关操作规范。
通过质量控制措施的落实，可以提高免疫学检验的质量水平，为临床决策提供可靠的依据。
临床免疫学检验质量控制
抗HCV质控血清定值的调整及选用
定值 （调整前） 定值 （调整后） 1NCU/ml
适用试剂
国产试剂盒（万泰、新创、科华、 丽珠……）和DiaSorin的试剂 Ortho ，Murex等试剂 雅培i2000和Axsym检测系统和配 套试剂
1NCU/ml
2NCU/ml
2NCU/ml
4NCU/ml
现1NCU/ml≈0.5NCU/ml
定值 （调整前） 定值 （调整后）
0.2IU/ml 0.5IU/ml 0.5ng/ml 1ng/ml 2ng/ml 5ng/ml ≥1万ng/ml 1IU/ml 2IU/ml 4IU/ml 浓度较高 “钩状效应”
调整原因
用于一些灵敏度较高的试剂
HBsAg定值单位改变：2004年，WHO研制了第二代HBsAg标准物质， 并将定值单位从ng/ml改为IU/ml。现1IU/ml≈0.5ng/ml
抗HIV质控血清定值的调整及选用
定值 （调整前） 定值 （调整后） 1NCU/ml 1NCU/ml 2NCU/ml 4NCU/ml
现1NCU/ml≈0.5NCU/ml
适用试剂
国产试剂盒（万泰、新创、科华、 丽珠……） Bio-Rad等试剂 进口试剂及配套仪器 进口试剂及配套仪器
2NCU/ml 4NCU/ml 8NCU/ml
2、免疫测定用室内质控血清的调整
HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、 抗HCV 抗HIV 梅毒螺旋体抗体 临床基因扩增检验
提供不同含量的质控物是为了实验室根据不 同试剂的检测值选择合适的质控物，使质控物的 检测值（S/CO值）在1.5～4之间。
HBsAg质控血清定值的调整
ELISA测定的“灰区”
免疫学实验质量控制
2/19/2019
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分析前质量保证 检查病人 申请检验 病人 准备 标本 采集 标本 运送
分析中质量控制 标本 处理 建立操作规程 室内质控及分析 标本分析测定 人员素质 工作环境 实验用水 实验室管理
临床医师
仪器质量保证 方法选择与评价 试剂选择与评价 反馈信息
室内 复查
保留标本 随时复查
运送报告 病人投诉 室间质评 分析后质量评估
TP
×100%
13
2/19/2019
TP+FN
诊断特异性 概念 非患者（正常人与无关疾病的患者）中用此试验 得到阴性结果的百分率。 非患者所得阳性结果为假阳性，所得阴性结果为 真阴性。 诊断特异性计算方法 TN ×100% TN+FP 理想试验诊断特异性应为100%。
2/19/2019 14
2/19/2019
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为质控目的而分析测定的已知标本。分为三种： 1、第一参考物质 为一种均匀稳定的质控参考材料。其杂质含量已 知，稳定性良好，均一性经鉴定合格，用决定性方 法或几种不同类型高准确度的方法进行定值。 应用 第一参考物质常用以校对决定性方法，开 发、比较和校对参考方法以及为第二参考物质的定 值而使用。
诊断敏感性
概念 指在患者中用此试验得到阳性结果的百分率。 某种试验在患者和非患者中可能得出的结果 ————————————————————————————— 分组 阳性 阴性 合计 ————————————————————————————— 患者 TP（真阳性） FN（假阴性） TP+FN 非患者 FP（假阳性） TN（真阴性） FP+TN 合计 TP+FP FN+TN TP+FP+FN+TN ————————————————————————————— 在患者中得到的阳性结果为真阳性，得到的阴性结果为假 阴性。
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免疫学质量控制流程 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-免疫学质量控制流程【目的】保证ELISA检测结果准确可*, 充分发挥其方法学的优点。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【方法】【分析前质控】1. 人员培训实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：[1] 检验项目的基本原理（ELISA原理）；[2] 临床意义；[3] 熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点；[4] 熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）；[5] 熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。
[6] 某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。
【试剂盒选择】卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品。
【试剂盒评价】试剂评价需要有权威的血清考核盘（Panel）进行检测，价格昂贵，操作繁琐，一般实验室不易开展，可以通过以下信息，了解试剂质量。
1.根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；2.通过询问试剂包被物的组成，如原料来源（基因工程或合成多肽），片段的组合（按比例混合或化学合成），片段的长短等判断试剂的优劣；3.参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩。
4.根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。
【仪器质控】为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SO P），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。
1.移液器：ELISA加样量小（5-100ｕl），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内；2.水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；3.洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul ，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；4.酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。
酶标仪的主要性能指标有：测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性等等。
优良的酶标仪的读数一般可精确到，准确性为±1%，重复性达%。
酶标仪的可测范围视各酶标仪的性能而不同。
普通的酶标仪在~，新型号的酶标仪上限拓宽达，甚至更高。
超出可测上限的A值常以"*"或"over"或其它符号表示。
应注意可测范围与线性范围的不同，线性范围常小于可测范围，比如某一酶标仪的可测范围为~，而其线性范围仅~，这在定量ELISA中制作标准曲线时应予注意。
【酶标仪校正程序】1.滤光片波长精度检查：将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下，用UV-220 1型紫外-可见分光光度计（波长精度±）于可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。
一般酶标仪无585nm滤光片，可选用550nm或630nm滤光片。
450nm 滤光片的检定选用普鲁兰溶液（校正波长为630nm）。
2.通道差与孔间差检测：通道差检测是取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑，透明，无污染以酶标板架作载体，将其（内含200ul甲基橙溶液吸光度调至左右）置于8个通道的相应位置，蒸溜水调零，于490nm处连续测三次,观察其不同通道的检测器测量结果的一致性，可用极差值来表示。
孔间差的测量是选择同一厂家，同一批号酶标2板条（8条共96孔）分别加入200ul甲基橙溶液（吸光度调至左右）先后置于同一通道，蒸溜水调零,于490nm处检测，其误差大小用±衡量。
3. 零点飘移（稳定性观察）：取8只小孔杯分别置于8个通道的相应位置，均加入200ul蒸馏水并调零，于490nm处每隔30分钟测一次，观察各个通道4小时内吸光度的变化。
4.精密度评价：每个通道3只小杯分别加入200ul高中低3种不同浓度的甲基橙溶解，蒸馏水调零，于490nm作双份平行测定，每日测二次（上下午各一次），连续测定20天。
分别计算其批内精密度，日内批精密度,日间精密度和总精密度及相应的CV值。
5.线性测定：用电子天平精确称取甲基橙配制5个系列的溶液，于490nm 平行测8次，取其均值。
计算其回归方程，相关系数及标准估计误差s，并用±表示样品测量的误差范围.双波长测定评价：取一分甲基橙溶液，分别加入3种不同浓度的溶血液（测定波长为490nm，校正波长为585nm），先后于8个通道检测，每个通道测3次，比较各组之间是否具有统计学差异，以考察双波长消除干扰组分的效果。
【标本的采集和保存】1.标本采集时应尽量避免溶血，因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰立可读方法的结果，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本会增加非特异性显色造成假阳性。
2.长菌的标本同样的道理也易产生假阳性，因菌体中可能含有内源性HRP 也会产生假阳性反应。
3.抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是不使用用肝素抗凝剂。
4.标本在冰箱中保存时间过长易导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深，一般血清置4℃冰箱5天内完成测试。
如需保存一周以上则要-20℃冰冻保存，冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，融解时应上下颠倒充分混匀，同时避免气泡。
可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。
反复冻融会使抗体效价跌落，如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。
5. ELISA的灵敏度>1ng/ml水平上,标本间的污染要尽量避免，尤其不应与生化试验用同一管标本。
【分析中质控】ELISA实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样，温育，洗涤，显色，酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISA的高灵敏，强特异的优点。
因此,应建立实验项目的标准操作程序(SOP)。
1. 加样[1] 加样应用微量移液器（加样枪）按规定的量加入微孔板底部，避免加在孔壁上部，不可溅出，不可产生气泡。
[2] 每次加样应更换吸嘴，做到一人一吸头，以免发生交*污染;干吸头预先在血清中抽吸三次。
[3] 样本稀释，目的是为了减少非特异性反应，所以一定要先加稀释液后加样本，特别注意加样后要在微量振荡器上振荡30秒钟，同时注意防止液体溢出。
如后面操作步骤中加二种以上试剂时均需振荡混匀。
[4] 如用滴瓶滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去第一滴有气泡的试剂后加样。
2. 温育[1] 抗原抗体反应需要在一定温度下（37°C），经过一定的时间才能达到反应的平衡点[2] ELISA边缘效应是由温育形成的。
所以温育一般采用能使反应液温度迅速达到平衡的水浴法。
水要浸至板条的1/3处。
[3] 反应板不宜叠放，注意温育的温度和时间应按规定控制，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。
3. 洗涤[1] 手工洗涤一般采用浸泡方法：1）甩去孔内反应液； 2）用洗涤液过洗一遍（即注满孔后即甩去）；3）微孔重新注满洗液后浸泡2-3分钟，间歇摇动；4）甩去孔内液体，拍板，用纸吸干。
重复以上操作至少5次。
注意各种试剂盒的洗涤液尽量不要混用。
[2] 洗板机洗板一定要预先把板架放平，使洗板机上的每个放液和吸液纤孔都能一致地插入孔底，将孔内液体全部吸干，同时要设置一定的浸泡时间。
如出现机洗后拍板有较多残留液时应再用手工洗2次以上。
关机前要用蒸溜水冲洗管道，避免堵孔。
4. 显色[1] HRP催化底物的一步呈色反应，同样需要一定的时间和温度，[2] 一定要按照说明书规定的时间温度（一般为37°C，10-15分钟）恒定反应后终止[3] 或根据临界值质控血清吸光度值达左右使的时间而恒定反应时间.5. 酶标仪判读结果1.显色反应终止后应立刻比色（30分钟内）。
2.常见的显色系统有OPD和TMB二种，以后者最为常见，而TMB酸不易终止因此必须尽快比色以免影响结果。
OPD终止后显棕色，测定波长为490nm；TM B终止后显黄色，测定波长为450nm，二种底物的校正波长均用630nm。
3.使用双波长的优点可以消除反应板条上的划痕手印的干扰。
同时要注意反应板应用纸吸干后才能置酶标仪中比色，否则吸光度易出现负值或损坏滤光片。
【分析后质控】【报告方式】1.定性试验：国内外为便于统一计算，一律按S/COV方式报告，S为标本A 值，COV即Cut Off值（或COV）[1] 夹心法和间接法以S/COV≥1为阳性；竞争法与中和法以S/COV﹤1为阳性[2] COV的计算公式以试剂盒说明书的为准常见的有：A）COV=×N（当N不足时按计），此公式由P/N>换算而来，常用于夹心法。
B）COV=×N，从抑止率公式换算而来，常用于竞争，中和法。
C） COV=N+C（C为常数），用于间接法。
D) COV=C×P+N（C为常数），用于间接法。
此公式最客观，但对厂家要求很高，阴阳性对照测定值要基本恒定。
2.定量分析：严禁用定性试剂盒做定量分析。
[1] 用已知量的系列标准品，绘制标准曲线，结果以绝对量或单位表示。
E LISA的标准曲线每次都要和待测标本做在同一块板上。
[2] 现有的ELISA定量试剂盒标准曲线只有在较窄的浓度范围内成直线，要得到精确的结果实属不易。
【记录】[1] 所有实验的原始资料均应存档；所有的记录均应规范登记在册；原始登记表应记录试剂来源、批号；质控血清的来源及测定值并注明是否在控；签上实验者姓名及审核者姓名。
[2] 如试验结果对临床诊断有决定意义，其样本应保留，至少与病历保存期一致【定性试验】ELISA定性试验的临床意义在于是否检出病原体，与检出量无关，因此QC 要保证试验的灵敏度和特异性。
生化的质控图方法仅能观察灵敏度而无法监控特异性。
建议使用临界值血清界定法：将试剂盒所设的阴阳性对照作为内对照指示反应；另设临界值、高值质控血清，正常人血清作为外对照，与标本同时检测，临界值S/≥1，高值质控血清S/≥10，正常人血清A值在~之间。
阳性质控血清失控（临界值为灵敏度，高值为"HOOK"效应监控）应重做阴性标本；阴性对照失控应重做阳性标本。
以表格式记录每块板的外对照实验结果，作为QC 资料存档。
【定量试验】ELISA定量试验常见于肿瘤因子（如AFP，CEA，CA系列），激素类，免疫球蛋白类，这些物质在体内有一定的量（正常范围），超出这个量才呈病理情况，故需定量测定。