【CN109991425A】肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法【专利】
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910235330.1
(22)申请日 2019.03.27
(71)申请人 迪瑞医疗科技股份有限公司
地址 130103 吉林省长春市高新区宜居路
3333号
(72)发明人 韩美玉 王立英 孙成艳 高威
何浩会
(74)专利代理机构 长春众邦菁华知识产权代理
有限公司 22214
代理人 刘微
(51)Int.Cl.
G01N 33/68(2006.01)
(54)发明名称肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法(57)摘要本发明公开了一种肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法，属于体外诊断试剂技术领域，解决现有技术灵敏度较低、反应时间较长、成本高等技术问题。试剂盒包括以下试剂：R1：含有链霉亲和素包被的磁微粒的缓冲液；R2：含有化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液。R3：含有偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液；本发明采用双抗体夹心法的原理，利用亲和素-偶联标记物体系，以及采用化学发光标记物进行化学发光，大大提高了试剂盒的检测灵敏度，减少反应时间，降低试剂成本，可用于血清/血浆中的肌红
蛋白含量的定量检测。权利要求书2页 说明书9页 附图1页CN 109991425 A 2019.07.09
C N 109991425
A
权 利 要 求 书1/2页CN 109991425 A
1.一种肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：
R1：含有链霉亲和素包被的磁微粒的缓冲液；
R2：含有化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液；
R3：含有偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液；其中，R1中链霉亲和素磁颗粒质量百分比为0.02％～1％；链霉亲和素包被的磁微粒的粒径是0.05～3μm，浓度为10mg/ ml；
R2中肌红蛋白单克隆抗体与化学发光标记物的摩尔比为1:1-1:20；化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的浓度为≥0.2μg/ml。
R3中肌红蛋白单克隆抗体与偶联标记物的摩尔比为1:1-1:20；偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的浓度为≥0.7μg/ml。
2.根据权利要求1所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：
R1：含有链霉亲和素包被的磁微粒的缓冲液；
R2：含有化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液；
R3：含有偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液；其中，R1中链霉亲和素磁颗粒质量百分比为0.072％；链霉亲和素包被的磁微粒的粒径是3μm；
R2中肌红蛋白单克隆抗体与化学发光标记物的摩尔比为1:3；化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的浓度为0.4μg/ml。
R3中肌红蛋白单克隆抗体与偶联标记物的摩尔比为1:5；偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的浓度为1.4μg/ml。
3.根据权利要求1或2所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，R1的制备方法为：取磁微粒，用20mM PB缓冲液清洗3次，然后稀释至10mg/ml，按照磁微粒与链霉亲和素所述的质量比添加链霉亲和素，37℃孵育18-24h后，置于磁分离架上分离磁珠，去上清，用20mM PB缓冲液清洗3次，加入封闭液，37℃孵育18-24h后，置于磁分离架上分离磁珠，去上清，用20mM PB缓冲液清洗3次，用20mM PB缓冲液稀释至10mg/ml，2-8℃保存备用，得到含有链霉亲和素包被的磁微粒的液体试剂；所述封闭液为含2～5％BSA的20mM PB缓冲液。
4.根据权利要求1或2所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，R2的制备方法为：取肌红蛋白单克隆抗体，用20mM PB缓冲液置换肌红蛋白单克隆抗体保存液，用20mM PB缓冲液稀释至1mg/ml，按照抗体与化学发光标记物的摩尔比添加化学发光标记物，37℃孵育2-4h进行标记，然后加入封闭液，37℃孵育2-4h，最后对蛋白进行纯化，得到含有化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的液体试剂；所述封闭液为含2～5％BSA的20mM PB缓冲液。
5.根据权利要求1或2所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，R3的制备方法为：取肌红蛋白单克隆抗体，用20mM PB缓冲液置换肌红蛋白单克隆抗体保存液，用20mM PB缓冲液稀释至1mg/ml，按照抗体与偶联标记物的摩尔比进行添加偶联标记物，37℃孵育2-4h进行标记，然后加入封闭液，37℃孵育2-4h，最后对蛋白进行纯化，得到含有偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的液体试剂；所述封闭液为含2～5％BSA的20mM PB缓冲液。
6.根据权利要求1-5任一项所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，
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