021延胡索检验标准操作规程2014

万邦德（湖南）天然药物有限公司
目的：制定延胡索的检验标准操作规程，保证检验结果的准确性。

范围：适用于延胡索的检验。

职责：QC主任、QC检验员
QC检验员：负责来样的检验，原始记录的填写完整、清晰准确、对检验结果数据负责；并及时出具检验报告书。

QC主任：合理分配检验工作，对来样检验的及时、结果准确负责；对QC检验员出具的检验记录和检验报告的结果审核负责。

内容：
1. 检验依据：TSD-QS-7-021-00
2. 检验操作程序
2.1性状
延胡索本品呈不规则的扁球形，直径0.5～1.5cm。

表面黄色或黄褐色，有不规则网状皱纹。

顶端有略凹陷的茎痕，底部常有疙瘩状突起。

质硬而脆，断面黄色，角质样，有蜡样光泽。

气微，味苦。

延胡索净药材或饮片本品呈不规则的段或片。

外表皮黄色或黄褐色，有不规则细皱纹。

切面黄色，角质样，具蜡样光泽。

气微，味苦。

醋延胡索本品形如延胡索或片，表面和切面黄褐色，质较硬。

微具醋香气。

2.2鉴别
（1）显微鉴别
仪器和器皿显微镜、万能粉碎机、载玻片盖玻片目镜测微尺
试剂与试液
水合氯醛试液：取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。

甘油乙醇试液：取甘油、稀乙醇各一份，混合，即得。

稀乙醇：取乙醇529ml，加水稀释至1000ml，即得。

操作步骤本品粉末绿黄色。

糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色。

下皮厚壁细胞绿黄色，细胞多角形、类方形或长条形，壁稍弯曲，木化，有的成连珠状增厚，纹孔细密。

螺纹导管直径16～32μm。

标准限度延胡索、延胡索净药材或饮片、醋延胡索应符合以上显微鉴别要求。

（2）薄层鉴别
仪器和器皿电子天平、万能粉碎机、超声仪、烘箱、三用紫外仪、水浴锅
刻度吸管、烧杯、展开缸、微量进样针（5μl）、硅胶G薄层板、玻璃漏斗（60mm）、定性滤纸、碘缸、分液漏斗、量筒、容量瓶、pH试纸、蒸发皿
试剂和试液浓氨试液、甲醇、乙醚、甲苯、丙酮
对照品延胡索对照药材、延胡索乙素对照品
操作步骤取本品粉末lg，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水l0ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次l0ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取延胡索对照药材lg，同法制成对照药材溶液。

再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（WP-Q-8·0-019）试验，吸取上述三种溶液各2～3μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(9：2)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

标准限度延胡索、延胡索净药材或饮片、醋延胡索均应符合薄层鉴别要求。

2.3 检查
（1）金胺O
1. 薄层鉴别
仪器和器皿万能粉碎机、电子天平、烘箱、超声仪
移液管（2ml、10ml、20ml）、容量瓶、微量进样针（10μl）、硅胶G薄层板、玻璃漏斗（60mm）、定性滤纸、展开缸、烧杯（25ml）、具塞锥形瓶
试剂和试液70%乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、氨水、甲醇
对照试剂金胺O对照试剂
操作步骤取本品粉末2g，加70%乙醇20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇20ml制成每1ml中含0.1mg的溶液，即得。

照薄层色谱法（SOP-QC-8-022）试验，取供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水（4：5 ：1 ：1 ）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，立即在可见光下检视。

供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。

2. 照高效液相色谱法（SOP-QC-8-020）测定。

仪器和器皿电子天平、高效液相色谱仪、超声仪、万能粉碎机、减压过滤器、水浴锅
棕色量瓶（5ml、50ml）、移液管（25ml、50ml）、滴管、具塞锥形瓶、烧杯（200ml、1000ml）、量筒（250ml、1000ml）、玻璃漏斗（60mm）、定性滤纸、刻度吸管（5ml）、有机系微孔滤膜（0.45μm）、平底烧瓶、量筒
试剂和试液乙腈、磷酸二氢钾、磷酸、三乙胺、甲醇、乙醇
对照试剂金胺O对照试剂
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调pH值为3.0)（35：65）为流动相；检测波长为432nm。

理论板数按金胺O对照试剂色谱中的主峰计算，应不低于2000。

对照品溶液的制备取金胺O试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取上述（1）项下的供试品溶液，即得。

测定法取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判定供试品色谱中，不得出现与对照试剂色谱主峰保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在320～450波长范围的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

备注：必要时，可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。

建议采用乙腈-0.05mol/L醋酸铵（35：65）流动相系统。

标准限度延胡索、延胡索净药材或饮片、醋延胡索均不得检出金胺O。

（2）水分照水分测定法（SOP-QC-8-015）第一法测定。

仪器与用具电子天平电热恒温鼓风干燥箱扁形称量瓶
操作步骤扁形称量瓶恒重取称量瓶置于烘箱内，将瓶盖取下置称量瓶旁，或将瓶盖
半开，在100～105℃干燥，一般2-3小时，将称量瓶盖好，移置干燥器中，冷却至室温（一般约需30～60分钟），精密称定重量；再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，直至恒重（连续两次干燥的重量差异在0.3mg 以下）。

取供试品2～5g ，平铺于恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm ，疏松样品不超过10mm ，精密称定，干燥，恒重，直至连续两次干燥的重量差异不超过5mg 为止。

计算：
式中 W 1为供试品的重量（g ）；
W 2为称量瓶恒重的重量（g ）；
W 3为（称量瓶+供试品）恒重的重量（g ）。

标准限度 延胡索、延胡索净药材或饮片、醋延胡索均不得过14.8%（法定标准：不得过15.0%）。

（3）总灰分 照灰分测定法（SOP-QC-8-017）测定。

仪器与用具 电子天平 箱氏电阻炉 坩埚
操作步骤 测定用的供试品须粉碎，使能通过二号筛，混合均匀后，取供试品2～3g （如 须测定酸不溶性灰分，可取供试品3～5g ），置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至0.01g ），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。

根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。

计算： 总灰分含量% =[（m 2－m 0）/（m 1－m 0）]×100%
式中：m 0为空坩锅重量（g ）；
m 1为灼烧前坩锅和供试品重量（g ）；
m 2为灼烧后的坩锅和灰分重量（g ）。

标准限度 延胡索、延胡索净药材或饮片、醋延胡索均不得过3.8%（法定标准：不得过4.0%）。

（4）浸出物 照醇溶性浸出物测定法（SOP-QC-8-019）项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂。

仪器和器皿 电子天平、水浴锅、万能粉碎机、烘箱
二号筛、具塞锥形瓶（250ml ）、移液管（25ml 、100ml ）、回流冷凝管、干燥过滤器、蒸发皿、定性滤纸、干燥器、烧杯
%100%1
321⨯-+=W W W W 水分
试剂和试液 稀乙醇
操作步骤 取本品，粉碎，使能通过二号筛，混合均匀后，取粉末约4g ，精密称定，照浸出物测定法项下的醇溶性浸出物测定法的热浸法测定，置250ml 的锥形瓶中，精密加稀乙醇100ml ，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。

放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml ，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。

除另有规定外，以干燥品计算本品中醇溶性浸出物的含量(%)。

计算
式中 V 0为加入溶剂的体积（ml ）； V 1为精密量取的滤液体积（ml ）；
W 0为供试品的重量（g ）； W 1为干燥至恒重的蒸发皿的重量（g ）； W 2为供试品与蒸发皿干燥至恒重的重量（g ）。

标准限度 延胡索、延胡索净药材或饮片、醋延胡索的浸出物不得少于13.2%（法定标准：不得少于13.0%）；
（4）二氧化硫残留量
仪器和器皿 电子天平、万能粉碎机、磁力搅拌器、电热套
两颈圆底烧瓶（1000ml ）、锥形瓶（250ml ）、竖式回流冷凝管、带刻度分液漏斗、五号筛、六号筛、称量瓶、量筒（10ml 、250ml 、500ml ）、刻度吸管（1ml ）、橡胶导气管、滴定管试剂和试液 水、盐酸、淀粉指示液、碘滴定液（0.01 mol /L ）、盐酸溶液(6mol/L) 碘滴定液浓度（0.01mol/L ）：取碘滴定液（0.05 mol/L ）稀释即可。

盐酸溶液(6mol/L)：1L*6mol/L*36.5g/mol÷0.375÷1.179=495.34ml 盐酸缓缓加入水中至1000ml 。

操作步骤
取本品细粉约10g ，精密称定，按二氧化硫残留量测定法（SOP-QC-8-042）测定，置两颈圆底烧瓶中，加水300~400ml （应加水至没过氮气导气管的下端），取6mol /L 盐酸溶液10ml 加入带刻度分液漏斗中。

锥形瓶内加入水125ml 和淀粉指示液1ml 作为吸收液，置于磁力搅拌器上不断搅拌。

打开冷凝管，将冷凝管的上端E 口处连接一橡胶导气管置于锥
浸出物%＝ V 0×（W 2－W 1）×100 ×100%
V 1× W 0×20
形瓶内液面以下。

连接氮气流入口D 。

开通氮气，调节适宜的气体流量（氮气流速约为0.2L /min ，至蒸馏瓶内有气泡均匀排出）。

打开带刻度分液漏斗的活塞，使盐酸溶液10ml 流入烧瓶中。

给两颈烧瓶内的溶液加热至沸，并保持微沸约3分钟后开始用碘滴定液（0.01mol /L ）滴定，吸收液置于磁力搅拌器上不断搅拌，至吸收液显蓝色或蓝紫色持续30秒钟不完全消褪，并将滴定结果用空白试验校正。

每1ml 的碘滴定液（0.01mol /L ）相当于0.6406mg 的SO 2。

本品的二氧化硫残留量应不得过140mg /kg 。

计算如下：
供试品中二氧化硫残留量（mg/kg ）=3-010
W 0.6406F )V -(V ⨯⨯⨯ 式中：V ——样品消耗碘滴定液（0.01mol/L ）的体积，ml ；
V 0——空白试验时消耗碘滴定液（0.01mol/L ）的体积，ml ；
F ——碘滴定液（0.01mol/L ）的校正因子；
W —— 称得样品的重量，g 。

标准限度 延胡索、延胡索净药材或饮片、醋延胡索的二氧化硫残留量均不得过140mg /kg （（法定标准：不得过150mg /kg ）。

2.4 含量测定 照高效液相色谱法（SOP-QC-8-020）测定。

仪器和器皿 电子天平、高效液相色谱仪、超声仪、万能粉碎机、减压过滤器、水浴锅 三号筛、棕色量瓶（5ml 、50ml ）、移液管（1ml 、20ml 、25ml ）、滴管、具塞锥形瓶、烧杯（200ml 、1000ml ）、量筒（250ml 、1000ml ）、玻璃漏斗（60mm ）、定性滤纸、有机系微孔滤膜（0.45μm ）、平底烧瓶、量筒
试剂和试液 甲醇、浓氨试液、三乙胺、水、0.1%磷酸溶液
对照品 延胡索乙素对照品
操作步骤
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH 值至6.0）(55：45)为流动相；检测波长为280nm 。

理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备 取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml 含46μg 的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约0.5g ，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入浓氨试液-甲醇(1：20)混合溶液50ml ，称定重量，冷浸1小时后加热回流1小时，放冷，
再称定重量，用浓氨试液甲醇(1：20)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。

精密量取续滤液25ml ，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml 量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

计算： 含量％＝%100B -1S W A X%
S W A ⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯）（对对样对样 式中：A 样——样品的峰面积； A 对——对照品的峰面积；
W ——样品的称样量，mg ； W 对——对照品的称样量，mg ；
S 样——样品的稀释倍数； S 对——对照品的稀释倍数；
B ——样品的水分，%； X%——对照品的含量。

标准限度 药材按干燥品计算，含延胡索乙素(C 21H 25NO 4)应不得少于0.052％（法定标准：
不得少于0.050%）；延胡索净药材或饮片、醋延胡索按干燥品计算，含延胡索乙素(C 21H 25NO 4)均应不得少于0.042％（法定标准：不得少于0.040%）。

3. 如为外购净药材或饮片应按净药材质量标准项目进行全检，如为自行加工净药材（药材已全检合格使用），净药材检验项目为：性状、水分、总灰分。

4. 结果判定：检品按上述操作，各项的检验结果与标准规定比较，如全部符合规定，则判为合格，否则，判为不合格。

检验结束后，检验记录、检验报告书归入批检验记录中保存。

5. 相关文件与记录：为该标准文件相关的操作记录、表格等。