水和饮料的细菌学检验

四、操作步骤
（一）细菌总数的测定 1. 取水样：先将自来水龙头用火焰灼烧 取水样：先将自来水龙头用火焰灼烧3 min灭菌，再打开水龙头放水 min ，用无菌 灭菌， 灭菌 再打开水龙头放水5 三角瓶接取水样，将瓶塞盖好。 三角瓶接取水样，将瓶塞盖好。 池水、河水或湖水应取离岸边较远（ 池水、河水或湖水应取离岸边较远（5 m） ） 距水面10- 15 cm的深层水样。先将灭菌的带 的深层水样。 距水面 的深层水样 塞玻璃瓶，瓶口向下浸入水中， 塞玻璃瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过 除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后， 来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后， 将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检测， 将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检测， 否则需放入冰箱中保存。 否则需放入冰箱中保存。
大肠菌群检测（滤膜法） （二）大肠菌群检测（滤膜法） 1. 滤膜清洗：将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中，煮沸 滤膜清洗：将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中， 三次，每次15 三次，每次 min，洗去残留溶剂。 ，洗去残留溶剂。 2. 滤器灭菌：滤膜、滤器经 ＭＰ ，灭菌 min。 滤器灭菌：滤膜、滤器经0.1ＭＰ ＭＰa，灭菌20 。 3. 过滤水样：将清洁水样各取 过滤水样：将清洁水样各取333 ml注入滤器中，加 注入滤器中， 注入滤器中 抽滤。滤完后再加等量的无菌水抽滤，以冲洗滤器壁。 盖，抽滤。滤完后再加等量的无菌水抽滤，以冲洗滤器壁。 4. 培养：取下滤膜，将无菌的一面贴在伊红美蓝平板 培养：取下滤膜， 培养基上， ℃倒置培养24 。 培养基上，37℃倒置培养 h。 5. 镜检：挑取紫黑色或紫红色、有金属光泽的菌落进 镜检：挑取紫黑色或紫红色、 行涂片、革兰氏染色、镜检。 行涂片、革兰氏染色、镜检。 6. 乳糖发酵：凡镜检为革兰氏染色阴性、无芽孢的杆 乳糖发酵：凡镜检为革兰氏染色阴性、 每个菌落接种一支乳糖发酵管， 菌 ，每个菌落接种一支乳糖发酵管， 37℃培养 ℃培养24 h，产 ， 酸、产气者为大肠菌群阳性。未产酸、产气者继续培养至 产气者为大肠菌群阳性。未产酸、 大肠菌群阳性 48 h，仍未产酸、产气者为大肠菌群阴性。 大肠菌群阴性。 ，仍未产酸、产气者为大肠菌群阴性
实验十二 水和饮料的细菌学检验
一.实验目的 实验目的
1. 学习水和饮料中细菌总数及大肠菌群 的测定原理、意义。 的测定原理、意义。 2. 掌握水和饮料中细菌总数及大肠菌群 的检测方法。 的检测方法。
二、实验原理
水也是微生物存在的天然环境， 水也是微生物存在的天然环境，水中的细 菌来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。 菌来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。 水中微生物种类及数量可说明水源被有机物污染 的程度。一般地面水比地下水含菌数量多， 的程度。一般地面水比地下水含菌数量多，并易 被病原菌污染。 被病原菌污染。 水和饮料的微生物学检查， 水和饮料的微生物学检查，常测定其细菌总 数和大肠杆菌菌群数， 数和大肠杆菌菌群数，判断水和饮料被污染的程 我国现行的生活饮用水的卫生标准为1 度。我国现行的生活饮用水的卫生标准为 m1水 水 中细菌总数不超过100个 中细菌总数不超过 个；每1升水中大肠菌群数 升水中大肠菌群数 不超过3个 超过此数， 不超过 个，超过此数，表示水源可能受粪便等 污染严重，水中可能有病原菌存在。 污染严重，水中可能有病原菌存在。 通常采用肉膏蛋白胨琼脂培养基测得样品 通常采用肉膏蛋白胨琼脂培养基测得样品 中细菌总数的近似值。 中细菌总数的近似值。
伊红、美兰作指示剂，在乳糖发酵产酸时两者结合成复合 伊红、美兰作指示剂， 使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色菌落。 物，使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色菌落。
乳糖蛋白胨培养基中乳糖起选择作用 乳糖起选择作用； 在乳糖蛋白胨培养基中乳糖起选择作用； 溴甲酚紫起产酸指示，还有抑制其他细菌作用。 溴甲酚紫起产酸指示，还有抑制其他细菌作用。
六．注意事项
1. 取样要有代表性，取样中一定要避免污 取样要有代表性， 染； 2. 倒培养基要注意温度，并要及时混匀； 倒培养基要注意温度，并要及时混匀； 3. 滤膜必须紧贴培养基，下面不能有气泡。 滤膜必须紧贴培养基，下面不能有气泡。
2. 以无菌操作将池水、河水、湖水、饮 以无菌操作将池水、河水、湖水、 料逐级稀释成10 稀释液。 料逐级稀释成 -2稀释液。 3. 用无菌吸管分别吸取水样及饮料的原 稀释液各1 于无菌平皿中 于无菌平皿中。 样、稀释液各 ml于无菌平皿中。 4. 分别倒约 ml融化并冷至 ℃左右 分别倒约15 融化并冷至 融化并冷至45℃ 肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即旋转混匀。 的肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即旋转混匀。 5. 凝固后倒置于37℃培养箱中培养 h 凝固后倒置于37℃培养箱中培养24 后计数菌落。 后计数菌落。
滤膜法测定示意图
五、实验结果
（一）实验结果 1. 报告水样、饮料细菌总数测定结果。 报告水样、饮料细菌总数测定结果。 2. 根据有大肠菌群的阳性管数查表计算。 根据有大肠菌群的阳性管数查表计算。 （二）思考题 1. 国家对自来水的细菌总数有一标准，各 国家对自来水的细菌总数有一标准， 地能否自行设计其测定条件（如培养温度、 地能否自行设计其测定条件（如培养温度、时 间等）来测定水样中细菌总数？为什么？ 间等）来测定水样中细菌总数？为什么？ 2. 伊红美兰培养基含有那几种主要成分？ 伊红美兰培养基含有那几种主要成分？ 在检查大肠菌群时，各起什么作用？ 在检查大肠菌群时，各起什么作用？ 3. 所测水样、饮料是否合乎饮用标准？ 所测水样、饮料是否合乎饮用标准？
三、主要器材
1. 培养基 肉膏蛋白胨琼脂培养基， 肉膏蛋白胨琼脂培养基，乳糖蛋白胨培 伊红美兰琼脂培养基， 养基 ，伊红美兰琼脂培养基，乳糖发酵 管。 2. 材料 无菌三角瓶，无菌平皿，无菌吸管， 无菌三角瓶，无菌平皿，无菌吸管，无 菌试管，无菌过滤器，无菌水等。 菌试管，无菌过滤器，无菌水等。
伊红美兰琼脂培养基
大肠菌群是指在37℃ 大肠菌群是指在 ℃24 h内能发酵乳糖 内能发酵乳糖 产酸、 产酸 、 产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽 孢杆菌的总称， 孢杆菌的总称 ， 主要由肠杆菌科中埃希氏 杆菌属、 柠檬酸杆菌属、 杆菌属 、 柠檬酸杆菌属 、 克雷伯氏菌属和 肠杆菌属四个属的细菌组成。 肠杆菌属四个属的细菌组成 。 主要来源于 人畜粪便，可作粪便污染的指示菌。 人畜粪便，可作粪便污染的指示菌。 水和饮料的大肠菌群数以100 ml样品 水和饮料的大肠菌群数以 样品 内含有大肠菌群最可能数（ 内含有大肠菌群最可能数 （ MPN） 表示 。 ） 表示。 水样中大肠菌群的数量是直接反映水源被 人畜排泄物污染程度的一项重要指标。 人畜排泄物污染程度的一项重要指标 。 大 肠菌群已作粪便污染的指示菌以评价水和 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ料的卫生质量。 饮料的卫生质量。