实验一 糖类的颜色反应

第十六章实验技术

实验一糖类的颜色反应

一、实验目的

1．了解糖类某些颜色反应的原理。

2．学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。

二、实验原理

1.α-萘酚反应（Molisch反应）原理

糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。

2.间苯二酚反应（Seliwanoff反应）原理

在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮糖的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。在实验条件下蔗糖有可能水解而呈阳性反应。

三、器材

1.试管及试管架

2.滴管

3.水浴锅

四、试剂

1.莫氏（Molisch）试剂：5% α-萘酚的酒精溶液，称取α-萘酚5g，溶于95%酒精中，并用此酒精使总体积达100mL，贮于棕色瓶内。此试剂需新鲜配制。

2.塞氏（Seliwanoff）试剂：称取间苯二酚0.05g溶于30 mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100 mL，此试剂需新鲜配制。

3.1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于100mL蒸馏水中。

4.1%果糖溶液：称取果糖1g，溶于100mL蒸馏水中。

5.1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于100mL蒸馏水中。

6.1%淀粉溶液：称取可溶性淀粉1g与少量冷蒸馏水混合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅，最后以沸蒸馏水稀释至100mL。

7.0.1%糠醛溶液：称取糠醛0.1g，溶于100mL蒸馏水中。

8.浓硫酸500mL

五、操作

1.α-萘酚反应（Molisch反应）

取5支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%果糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、0.1%糠醛溶液各1.5mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。斜执试管，沿

管壁慢慢加入浓硫酸约1mL，慢慢立起试管，切勿摇动。浓硫酸在试液下形成两层。在二液分界处有紫红色环出现。观察、记录各管颜色。

2.间苯二酚反应（Seliwanoff反应）

取3支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%果糖溶液、1%蔗糖溶液各5mL。再向各管分别加入塞氏试剂2mL，混匀。将3支试管同时放入沸水浴中，注意观察、记录各管颜色的变化及变化时间。

六、思考题

1．可用何种颜色反应鉴别酮糖的存在？

2．α-萘酚反应的原理是什么？

实验二糖类的还原作用

一、实验目的

学习几种常用的鉴定糖类还原性的方法及其原理。

二、实验原理

许多糖类由于其分子中含有自由的或潜在的醛基或酮基，故在碱性溶液中能将铜、铋、汞、铁、银等金属离子还原，同时糖类本身被氧化成糖酸及其他产物。糖类这种性质常被利用于检测糖的还原性及还原糖的定量测定。

本实验进行糖类的还原作用所用的试剂为斐林试剂和本尼迪克特试剂。它们都是含Cu2+的碱性溶液，能使还原糖氧化而本身被还原成红色或黄色的Cu2O沉淀。生成Cu2O沉淀的颜色之所以不同是由于在不同条件下产生的沉淀颗粒大小不同引起的，颗粒越小呈黄色，越大则呈红色。如有保护性胶体存在时，常生成黄色沉淀。

三、器材

1．试管及试管架

2．竹试管夹

3．水浴锅

4．电炉

四、试剂

1．斐林（Fehling）试剂

菲林甲液（硫酸酮溶液）：称取34.5g硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶于500mL蒸馏水中。

菲林乙液（碱性酒石酸盐溶液）：称取125g氢氧化钠和137g洒石酸钾钠溶于500 mL 蒸馏水中。

为了避免变质，甲、乙二液分开保存。用前，将甲、乙二液等量混合即可。

2．本尼迪克特（Benedict）试剂

称取柠檬酸钠173g及碳酸钠（Na2CO3·H2O）100 g加入600mL蒸馏水中，加热使其溶解，冷却，稀释至850mL。

另称取17.3g硫酸铜溶解于100 mL热蒸馏水中，冷却，稀释至150mL。

最后，将硫酸铜溶液徐徐地加入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，混匀，如有沉淀，过滤后贮于试剂瓶中可长期使用。

3．1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于100mL蒸馏水中。

4．1%果糖溶液：称取果糖1g，溶于100mL蒸馏水中。

5．1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于100mL蒸馏水中。

6．1%麦芽糖溶液：称取麦芽糖1g，溶于100mL蒸馏水中。

7．1%淀粉溶液：称取可溶性淀粉1g与少量冷蒸馏水混合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅，最后以沸蒸馏水稀释至100mL。

五、操作

先取1支试管加入斐林试剂约1mL，再加入4 mL蒸馏水，加热煮沸，如有沉淀生成，说明此试剂已不能使用。经检验，试剂合格后，再进行下述实验。

取5支试管，分别加入菲林甲、乙液各1 mL，再向各试管分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％麦芽糖溶液、1％淀粉溶液各1mL。置沸水浴中加热数分钟，取出，冷却。观察各管溶液的变化。

另取6支试管，用本尼迪克特试剂（每管加2mL）重复上述实验。

比较两种方法的结果。

斐林氏与本尼迪克特试法：

试解释以上表格现象：

六、思考题

1．斐林氏、本尼迪克特试剂法检验糖的原理是什么？

2．你熟悉的糖中那些具有还原性？

实验三蛋白质的颜色反应

一、实验目的

熟悉一些常见蛋白质的颜色反应

二、实验原理

蛋白质分子中的某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。重要的颜色反应有：