HPLC高效液相色谱培训PPT
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4（6）个主要部分： 高压输液系统； 脱气装置； 梯度洗脱； 进样系统； 分离系统； 检测系统； 此外还配有自动进样及数据处理等辅助装置。
第二节 高效液相色谱仪器
第二节 高效液相色谱仪器
1．高压输液系统
由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动 相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系 统。
名 称 恒流或恒压 脉冲 更换流动相 梯度洗脱 再循环 价格 气动放大泵 恒压 无 不方便 需两台泵 不可 高 螺旋传动注射泵 恒流 无 不方便 需两台泵 不可 中等 单活塞往复泵 恒流 有 方便 可 可 较低 双活塞往复泵 恒流 小 方便 可 可 高 隔膜往复泵 恒流 有 方便 可 可 中等
第二节 高效液相色谱仪器 （动画）
第一节 概 述
(3)GC一般都在较高温度下进行的，而HPLC法则经常可在 室温条件下工作。
总之，HPLC是吸取了GC与经典液相色谱优点，并 用现代化手段加以改进，因此得到迅猛的发展。目前 HPLC已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意 义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、 植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。
第二节 高效液相色谱仪器
双活塞往复泵：
如下图a所示，双活塞往复泵有一个精心设计的偏 心凸轮，用同步电机或变速直流电机驱动偏心凸轮， 偏心凸轮再推动两活塞作往复运动。偏心凸轮短半径 端所对应的活塞向外伸，使该活塞的下单向阀打开吸 入流动相，与此同时，偏心凸轮的长半径端所对应的 另一活塞被推入，使其上单向阀打开，并将流动相送 至色谱柱。于是，两活塞交替伸缩，往复运动，获得 的排液特性如图b所示，即具有稳定的输出流量，这样 就能避免单活塞泵液流脉冲的问题。
恒压泵特点：能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系 统阻力而变化，故保留时间的重视性差。
它们各有优缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流 泵又称机械泵，它又分机械注射泵和机械往复泵两种，应 用最多的是机械往复泵。
第二节 高效液相色谱仪器
输液泵按工作方式分为气动泵和机械泵两大类。机械泵 中又有螺旋传动注射泵、单活塞往复泵、双活塞往复泵 和往复式隔膜泵。几种输液泵的基本性能见下表。
第一节 概 述
2．HPLC与GC
(1)GC分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们 仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％的那些 高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用 HPLC进行分离和分析。
(2)GC采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不 产生相互作用力，仅起运载作用。而HPLC中流动相可选 用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲 和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此，流动 相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离 条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。
对氨基酸分离，用经典色谱法，柱长约170cm，柱径 0.9cm，流动相速度为30cm3·h-1，需用20多小时才能分离出 20种氨基酸；而用HPLC，只需lh之内即可完成。
又如用25cm×0.46cm的Lichrosorb－ODS(5μ)的柱，采用 梯度洗脱，可在不到0.5h内分离出尿中104个组分.
第二节 高效液相色谱仪器
双活塞往复泵的输液 流量比单活塞泵小得多。
优点： 不必使用消除脉冲的 阻尼器，避免了阻尼器 的压力消耗。 缺点：
设备成本较高，流量 调节也比单活塞泵复杂。
第பைடு நூலகம்节 概 述
1．高效液相色谱法与经典液相色谱法
HPLC优点：高速、高效、高灵敏度、高自动化。
高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由 于经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱 配备了高压输液设备，流速最高可达 10cm3·min-1.
如分离苯的羟基化合物，7个组分只需1min就可完成。
它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压 输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成。
高压输液泵
核心部件。压力：150～350×105 Pa。 应符合密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围 宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。
第二节 高效液相色谱仪器
常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。 恒流泵特点：在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与 色谱柱引起阻力变化无关；
HPLC高效液相色谱 培训PPT
第一节 概 述
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代 末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术， 随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广 泛的化学分离分析的重要手段。
它是在经典液相色谱基础上，引入了气相 色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固 定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效 率高、灵敏度高、操作自动化的特点。为了更 好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面 进行比较：
色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶剂（即 流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力的大小 ，决定色谱过程的保留行为。
根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、 液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻 色谱等类型。
第二节 高效液相色谱仪器
第二节 高效液相色谱仪器
一、流程（process of HPLC）
HPLC主要缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。
第一节 概 述
3. 液相色谱分离原理及分类
和GC一样，LC分离系统也由固定相和流动相组成。其 固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面 涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各 种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据 各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交 换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。
首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱 柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流 经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离， 然后依先后顺序进入 检测器，记录仪将检测器送 出的信号记录下来，由此得 到液相色谱图。
第二节 高效液相色谱仪器
第二节 高效液相色谱仪器
二、主要部件（main assembly of HPLC）
第二节 高效液相色谱仪器
第二节 高效液相色谱仪器
1．高压输液系统
由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动 相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系 统。
名 称 恒流或恒压 脉冲 更换流动相 梯度洗脱 再循环 价格 气动放大泵 恒压 无 不方便 需两台泵 不可 高 螺旋传动注射泵 恒流 无 不方便 需两台泵 不可 中等 单活塞往复泵 恒流 有 方便 可 可 较低 双活塞往复泵 恒流 小 方便 可 可 高 隔膜往复泵 恒流 有 方便 可 可 中等
第二节 高效液相色谱仪器 （动画）
第一节 概 述
(3)GC一般都在较高温度下进行的，而HPLC法则经常可在 室温条件下工作。
总之，HPLC是吸取了GC与经典液相色谱优点，并 用现代化手段加以改进，因此得到迅猛的发展。目前 HPLC已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意 义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、 植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。
第二节 高效液相色谱仪器
双活塞往复泵：
如下图a所示，双活塞往复泵有一个精心设计的偏 心凸轮，用同步电机或变速直流电机驱动偏心凸轮， 偏心凸轮再推动两活塞作往复运动。偏心凸轮短半径 端所对应的活塞向外伸，使该活塞的下单向阀打开吸 入流动相，与此同时，偏心凸轮的长半径端所对应的 另一活塞被推入，使其上单向阀打开，并将流动相送 至色谱柱。于是，两活塞交替伸缩，往复运动，获得 的排液特性如图b所示，即具有稳定的输出流量，这样 就能避免单活塞泵液流脉冲的问题。
恒压泵特点：能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系 统阻力而变化，故保留时间的重视性差。
它们各有优缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流 泵又称机械泵，它又分机械注射泵和机械往复泵两种，应 用最多的是机械往复泵。
第二节 高效液相色谱仪器
输液泵按工作方式分为气动泵和机械泵两大类。机械泵 中又有螺旋传动注射泵、单活塞往复泵、双活塞往复泵 和往复式隔膜泵。几种输液泵的基本性能见下表。
第一节 概 述
2．HPLC与GC
(1)GC分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们 仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％的那些 高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用 HPLC进行分离和分析。
(2)GC采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不 产生相互作用力，仅起运载作用。而HPLC中流动相可选 用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲 和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此，流动 相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离 条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。
对氨基酸分离，用经典色谱法，柱长约170cm，柱径 0.9cm，流动相速度为30cm3·h-1，需用20多小时才能分离出 20种氨基酸；而用HPLC，只需lh之内即可完成。
又如用25cm×0.46cm的Lichrosorb－ODS(5μ)的柱，采用 梯度洗脱，可在不到0.5h内分离出尿中104个组分.
第二节 高效液相色谱仪器
双活塞往复泵的输液 流量比单活塞泵小得多。
优点： 不必使用消除脉冲的 阻尼器，避免了阻尼器 的压力消耗。 缺点：
设备成本较高，流量 调节也比单活塞泵复杂。
第பைடு நூலகம்节 概 述
1．高效液相色谱法与经典液相色谱法
HPLC优点：高速、高效、高灵敏度、高自动化。
高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由 于经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱 配备了高压输液设备，流速最高可达 10cm3·min-1.
如分离苯的羟基化合物，7个组分只需1min就可完成。
它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压 输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成。
高压输液泵
核心部件。压力：150～350×105 Pa。 应符合密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围 宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。
第二节 高效液相色谱仪器
常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。 恒流泵特点：在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与 色谱柱引起阻力变化无关；
HPLC高效液相色谱 培训PPT
第一节 概 述
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代 末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术， 随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广 泛的化学分离分析的重要手段。
它是在经典液相色谱基础上，引入了气相 色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固 定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效 率高、灵敏度高、操作自动化的特点。为了更 好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面 进行比较：
色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶剂（即 流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力的大小 ，决定色谱过程的保留行为。
根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、 液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻 色谱等类型。
第二节 高效液相色谱仪器
第二节 高效液相色谱仪器
一、流程（process of HPLC）
HPLC主要缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。
第一节 概 述
3. 液相色谱分离原理及分类
和GC一样，LC分离系统也由固定相和流动相组成。其 固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面 涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各 种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据 各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交 换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。
首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱 柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流 经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离， 然后依先后顺序进入 检测器，记录仪将检测器送 出的信号记录下来，由此得 到液相色谱图。
第二节 高效液相色谱仪器
第二节 高效液相色谱仪器
二、主要部件（main assembly of HPLC）