肝素钠及其制剂效价测定方法的改进

sodium injection by different methods
中国药典方法 批 号
(兔全血法)
USP 简化法 (羊血浆法)
相对偏差
060310 060315
97. 0 % 98. 0 %
93. 5 % 94. 7 %
- 3. 5 % - 3. 3 %
060421 060102 060205
取肝素钠标准品 (204 u/ mL) 适量 ,用煮沸放冷 的纯化水稀释至 100 u/ mL ,置 4 ℃冷藏备用 。临用 前用生理盐水精确稀释至 7 u/ mL 。 2. 3 供试品溶液的制备
称取肝素钠原料或量取肝素钠注射液适量 ,按
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取冷冻贮藏的绵羊血浆 ,置于不超过 37 ℃的水 浴融化 ,以脱脂棉过滤至清洁干燥的玻瓶中备用 。 取血浆 1 mL 置试管内 ,加入 0. 25 %氯化钙溶液 0. 8 mL ,混匀 ,在 (37 ±1) ℃水浴中保温 ,若在 5 min 内凝 结 ,则血浆可用于实验 。 2. 2 标准品溶液的制备
200μL 左右 。以此为中点 ,左右各以 10μL 为一级 , 051221) ,各测定 5 次 ,结果分别为 177. 6 ,173. 9 ,176. 9
同法操作 ,测定 V1/ 2为 190μL 。
u/ mL , RSD 分别为 0. 69 % ,0. 44 % ,0. 27 % ,均小于
2. 5 肝素钠及其制剂的效价测定
羊血浆 (批号 :0202) ,购自山东东营爱博公司 ; 肝素钠标准品 (批号 : 050929911 ,效价 204 u/ mL) ,中 国药品生物制品检定所; 肝素钠原料 (批号: 1850216010 ,1850402024 ,1840512041) ,常州千红生化 制药有限公司 ; 肝素钠原料 (批号 : 050929 ,051116 , 051124) ,南京健友生物化学制药有限公司 ; 肝素钠
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中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2008 年第 29 卷第 5 期
估计效价用生理盐水稀释至与标准溶液相当的效价 浓度 。 2. 4 血浆半凝固度剂量 ( V1/ 2) 的测定
取具塞试管 3 支 ,分别于各试管中加入梯度剂 量 (170 ,200 ,230μL) 的标准溶液 ,再按顺序准确加入
收稿日期 : 2008202204 作者简介 : 孟长虹 (19772) ,江苏淮安人 ,主管药师 。
原料 (批号 : 051219 ,051220 ,051221) ,山东东营天东 生物化学制药有限公司; 肝素钠注射液 (批号: 060310 ,060315 ,060421) ,常州千红生化制药有限公 司 ;肝素钠注射液 (批号 :060102 ,060205 ,060207) ,南 京新百制药有限公司 。 2 方 法 2. 1 羊血浆的制备
中国药典方法
羊血浆法 偏差
(兔全血法) / (u/ mg) / (u/ mg) / (u/ mg)
1850216010
196Hale Waihona Puke Baidu
189
-7
1850402024
196
202
6
1840512041
205
192
- 13
050929
190
191
1
表 3 两种效价测定方法测定 6 批肝素钠注射液的结果比较 Tab 3 Results of potency determination for six batches of heparin
凝结程度 ,按式 (1) 计算 。
> 0. 05 ,表明两种方法结果无显著性差异 。
表 1 同一批样品 10 次测定的结果比较
Tab 1 Results of potency determination for heparin sodium by different methods
方法
含量/ (u/ mg)
100. 4 % 104. 3 % 105. 7 %
94. 7 % 107. 2 % 104. 2 %
- 5. 7 % 2. 9 %
- 1. 5 %
060207
109. 4 %
107. 2 %
- 2. 2 %
051116
189
189
0
051124
188
192
4
051219
167
175
8
051220
175
Improvement in potency determination of heparin sodium and its preparations MENG Chang2hong , LU Yi2hong
( Jiangsu Institute for Drug Control , Nanjing 210008 , China)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
x ±s
羊血浆法 176 178 177 179 177 178 177 177 178 178 177. 7 ±0. 7
兔全血法 175 178 177 177 177 180 178 176 177 176 177. 2 ±1. 4
对 3 个厂家的 9 批肝素钠原料、6 批注射液用兔
供试品的效价单位
=
V std ×Cstd ×V V sam ×Wsam
(1)
式中 : Vstd. 标准品 1/ 2 凝固度的肝素加入体积 (μL) ;
Cstd. 标准品溶液的浓度 (u/ mL) ; Vsam. 供试品 1/ 2 凝固度时
的加入体积 (μL) ; Wsam. 供试品称取的重量 (mg) ; V . 测定样
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本文的方法较 USP30 版肝素钠项下效价测定方
法更为简便 ,易于操作 ,并简化了计算过程 。USP30 版中预试验将标准品及供试品用生理盐水稀释成一 系列的不同浓度的稀释液 ,找出使血浆在 1 h 内不 凝固的精确的最低肝素浓度 。本文预试验则是通过 加入梯度剂量的肝素钠标准品或供试品稀释液 ,找 出 V1/ 2 。正式试验中 USP30 版采取的是分别向两组 试管中加入同一浓度 、不同体积的标准品及供试品 稀释液 ,相邻管中的体积以约 5 %的级差递减 ,最大 体积为 0. 8 mL ,再分别向各管中加入羊血浆 1 mL 及 1 %氯化钙溶液 0. 2 mL 。本文的方法也是加入同一 浓度 、不同体积的标准品及供试品稀释液 ,以预试验 中测定的 V1/ 2为中点 (约 0. 2 mL) ,左右各以 10 μL 为一级 ,再按顺序加入血浆 1. 0 mL ,0. 25 %氯化钙溶
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肝素钠及其制剂效价测定方法的改进
孟长虹 , 陆益红
(江苏省药品检验所 , 江苏 南京 210008)
摘 要 :目的 建立用羊血浆法测定肝素钠及其制剂效价方法 ,并与现行药典的兔全血法比较 。方法 在梯度 剂量的标准溶液和供试品溶液中加入等量的羊血浆 ,经重钙化一定时间后观察凝固程度 ,测定供试品效价 。结果 羊血浆法与兔全血法测定结果比较 ,无显著性差异 ( P > 0. 05) ,羊血浆法精密度 、重现性良好 ( RSD < 1. 0 %) 。结论 羊血浆法准确 、可靠 ,较兔全血法操作更简便 ,适于肝素钠及其制剂的效价测定 。 关键词 : 肝素钠 ; 羊血浆 ; 效价测定 中图分类号 :R927 文献标识码 :A 文章编号 :100521678 (2008) 0520337203
171
-4
051221
177
175
-2
4 讨 论 本文遵循动物实验减少 、替代 、优化的“3R”原
则 ,参照 USP30 版及美国 3M 公司瑞克尔药厂肝素 钠项下效价测定方法 ,采用冷冻羊血浆法 。羊血浆 法是根据五级凝固标准找出半凝固体积从而计算肝
素钠的效价 。其操作简单 、快速 ,易于掌握 ,凝固终 点的判断比较容易识别 ,而且结果准确 ,重现性好 。 此外 ,商品化的羊血浆可直接购买 ,易保存且稳定 。
Abstract :Purpose To develop a method for the potency determination of heparin sodium with sheep plas2 ma and to compare it with the method of rabbit whole blood. Methods Prepared plasma was added to the grad2 ed amount of standard preparation and assay preparation. After the addition of the calcium chloride solution , determine the extent of clotting in each tube and calculate the potency. Results Compared with the results by the method of rabbit whole blood , the method of sheep plasma has no prominent difference ( P > 0. 05) and has good precision and reproducibility. Conclusion The method of sheep plasma is simple and accurate for the determination of heparin sodium and its preparations.
Key words : heparin sodium ; sheep plasma ; potency determination
肝素钠系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨基 葡聚糖的钠盐 ,属黏多糖类物质 ,具有延长血凝时间 的作 用 。现 行 中 国 药 典 收 载 的 为 肝 素 生 物 测 定 法[1] ,由于新鲜兔血采集较为困难 ,实验受人为影响 因素多 ,因此重现性较差 。国内曾有采用绵羊血浆 、 山羊血浆测定肝素钠的报道[224] 。本文对肝素钠及 其制剂的效价测定方法进行了改进 ,采用冷冻羊血 浆法测定效价 ,并与兔全血法进行了比较 。 1 材 料
品的总体积 (mL)
血浆 1. 0 mL ,0. 25 %氯化钙溶液 0. 8 mL ,立即加塞 , 3 结 果
倒置混合 3 次 ,置 (37 ±0. 5) ℃恒温水浴中保温 ,准 3. 1 精密度试验
确记录 1 min ,判断每管凝结程度 ,结果判定 V1/ 2在
取 3 批 供 试 品 溶 液 ( 批 号 : 051219 , 051220 ,
1. 0 % ,重复性好 。
取具塞试管若干支 ,分别于各试管中加入梯度 3. 2 羊血浆法和兔全血法测定结果的比较
剂量的标准溶液和供试品溶液 ,以 190μL 为中点 ,
肝素钠 (批号 :051219) 用羊血浆法和兔全血法
每隔 10μL 为一级 ,同 2. 3 项下方法操作 ,记录每管 多次测定效价 ,进行比较 ,结果见表 1 。经 t 检验 , P
全血法与羊血浆法作比对试验 ,结果见表 2 和表 3。
表 2 两种效价测定方法测定 9 批肝素钠的结果比较 Tab 2 Results of potency determination for nine batches of heparin
sodium by different methods
批号