杀菌剂毒力测定

1.4
17
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 B、湿度：真菌孢子一般要求在水滴 中才能萌发，但也有少数真菌孢子， 如白粉病菌的分生孢子，在相对湿度 很低的情况下也能萌发。
1.4
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一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 C：光照：光照对多数真菌孢子萌发 的影响不大，但对某些真菌孢子有刺 激或抑制作用，如光照可刺激水稻黑 粉病菌厚垣孢子的萌发，抑制小麦秆 锈病菌夏孢子的萌发。

4
一、杀菌剂毒力测定方法
1、孢子萌发法
(spore germination method) 快速。广泛用于保护剂的测 定 此法适用于抑制病菌能量合 成系统，而使孢子不能萌发 的杀菌剂。
5
一、杀菌剂毒力测定方法
玻璃器皿的处理 清洁：以洗液浸泡数十分钟,用自来水 冲洗, 用蒸馏水清洗,防尘干燥. 载玻片保存于70%的酒精溶液内.
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一、杀菌剂毒力测定方法
3
滤纸片附着法 定性滤纸灭菌（130℃，1h），7080%的酒精20-30分钟， 滴加孢子悬 浮液，无菌干燥，浸入药液中10分钟， 放入培养基上培养。
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一、杀菌剂毒力测定方法
4
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扩散法（抑菌圈法,detection of inhibition zone） 基本原理是在已接种的琼脂培养基上 加少量的抗菌物质，使其接触培养基 和病原菌，经一定时间的培养后，接 触部分的周围由于抗菌物质的扩散而 产生抑菌圈。 扩散法广泛用于医用和农用抗菌物质 的筛选和抗菌性物质有效成分的定量
杀菌剂生物测定
杀菌剂生物测定概念
利用病原菌或感菌生物体对杀菌剂的反应， 来确定杀菌剂效力(毒力,药效)的农药生物测定。
毒力 病原菌
药效 杀菌剂 病原菌+生物体
1
第三章 杀菌剂毒力测定
室内测定与田间试验有一定的差异
杀菌剂田间药效试验受寄主(作物)、
环境、以及发病阶段的影响较大。
2
第三章 杀菌剂毒力测定
2
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一、杀菌剂毒力测定方法
.2 接种病原菌 菌饼接种法：Φ 0.4cm的打孔器打出 菌饼，用接种针或镊子放入含毒培养 基的中央。
2
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一、杀菌剂毒力测定方法
.2 接种病原菌 划线接种法：用接种针沾取病菌孢子 液在培养基上划一直线进行接种，培 养一段时间后，测量菌丝伸向直线垂 直方向的长度。
3.
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Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
药剂处理 使药液与孢子悬浮液在小试管中等量 混合均匀。用微量加样器吸取上述混 合液滴到凹玻片上，然后架放于带有 浅层水的培养皿中，加盖保湿培养。 每处理不少于3次重复。
1.3孢子悬浮液的配制
孢子萌发法常用菌种
马铃薯晚疫病，水稻稻瘟病，小麦赤
霉病，甘薯黑疤病，水稻胡麻叶斑病， 玉米大斑病。
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一、杀菌剂毒力测定方法
1.3孢子悬浮液的配制
真菌在一定条件下才产生孢子，一般
来说，生殖生长的条件比较严格。 A、改变培养基成分：先在高浓度养 分的培养基上培养，再移到营养成分 较低的培养基中，可促进孢子的产生。
1.4
21
一、杀菌剂毒力测定方法
有些病菌在蒸馏水中萌发不好，可加
入某些促进物质。许多病菌孢子，按 10毫升孢子液加入0.1%葡萄糖溶液 0.01毫升，可使孢子萌发整齐。 玉米小斑病菌孢子，适当加入一点玉 米苗的新鲜汁液，在26℃下2h，孢子 萌发率高，整齐。
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一、杀菌剂毒力测定方法
调查方法 一般病菌培养20~24小时即可镜检。 一般在100~200倍下镜检，每处理随 机检查200个孢子。 孢子萌发标准：芽管大于孢子短半径 即算萌发。 或以孢子囊产生游动孢子为萌发标准， 如马铃薯晚疫病菌。
1.5
23
一、杀菌剂毒力测定方法
调查方法 对照萌发率至少大于80%，低于80% 应重做。
定量滴加药液（用水或有机溶剂均
可），形成均匀的药膜，再滴加孢子 液。 许多有机溶剂（丙酮、乙醚）表面张 力小，不易形成均匀的药膜，因此， 应采用凹玻片。防尘条件下干燥。
8
一、杀菌剂毒力测定方法
C、装置喷雾
利用精确喷雾装置将药液喷于载玻片
上，干燥后滴加孢子悬浮液。
9
一、杀菌剂毒力测定方法
2.
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Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
药剂的配制 水溶性药剂直接用水溶解，其它药剂 选用合适的有机溶剂（甲醇、丙酮、 二甲基亚砜等）溶解，再用0.1%的吐 温80水溶液稀释，设置5~7个浓度， 有机溶剂最终含量不超过2%
2
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一、杀菌剂毒力测定方法
生长速率法 病菌易培养，菌丝生长快，不易产生 孢子。 棉花炭疽、红麻炭疽、小麦赤霉等病 菌具有生长快速、整齐、平伏的特点， 有利于此法测定。
2
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一、杀菌剂毒力测定方法
.1 含毒培养基的制备 一般以1ml药液加入 9ml培养为宜,这 样的比例不会影响培养基凝固. 对挥发性强、受热易分解的药剂应注 意培养基的温度，最好当培养基冷却 到50℃左右时再加入药剂。
4.
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Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
调查 当空白对照孢子萌发率达到90%以上 时，每重复了随机观察3个以上视野， 调查孢子总数不少于200个，分别记 录萌发数和孢子总数。
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一、杀菌剂毒力测定方法
1.3孢子悬浮液的配制
D、病菌培养条件
高温、低温或高低温交替有时可促进
孢子的产生。一般半知菌在有光照的 条件下易产生孢子。但有的病菌在无 光下易产生孢子。
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一、杀菌剂毒力测定方法
1.3孢子悬浮液的配制
配制：一般将已培养好的菌种（斜面
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或三角瓶培养）加入无菌水，用接种 环在表面轻轻摩擦，使孢子悬浮于水 中，然后用双层纱布过滤，除去菌丝 体和培养基碎块。最好在1000r/min 的离心机上用无菌水洗涤三次。 一般规定孢子的浓度最好是5万/ml。 10*10观察时，每个视野约有35个。
11
一、杀菌剂毒力测定方法
1.3孢子悬浮液的配制
B、选用不同培养基：
植物质培养基或利用植物的组织或它
们的煎汁往往可促进真菌产生孢子。
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一、杀菌剂毒力测定方法
1.3孢子悬浮液的配制
C、培养基的理化性状
增加培养基的酸度，可促进某些真菌
产生孢子。固体培养基上比液体培养 基上容易产生孢子。
1.
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Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
孢子悬浮液配制 将培养好的病原真菌孢子用去离子水 从培养基或病组织上洗脱、过滤、离 心（1000r/min）5min，倒去上清液， 加入去离子水，再离心。最后用去离 子水将孢子重悬浮至每毫升105~107 个孢子，并加入0.5%葡萄糖溶液。
1.4
19
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 D：空气：孢子萌发多需要空气，所 以水滴表面的孢子比沉在水滴中的萌 发好。但玉米黑粉病菌孢子萌发需要 15%的CO2。
1.4
20
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 D：养分：有的不需外源养分，有的 则必须由外界提供养分。 植物组织煎汁常常是促进孢子萌发的 物质，其刺激作用是因为含有生长素 或挥发性物质。但有研究表明，萌发 促进物质可增加孢子对药剂的抵抗力。
5.
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Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
数据处理 计算校正的孢子萌发率，求出毒力回 归线，EC50，EC90及95%置信限。
6.
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一、杀菌剂毒力测定方法
生长速率法(mycelium growth rate test) 将不同浓度的药液与融化的培养基混 合，制成带毒培养基平面，在平面上 接种病原菌，以病原菌生长速度快慢 来判定药剂毒力大小。
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子浓度可用计数器测定
纽鲍尔（Neubauer）血球计数器。
边长为0.05mm的小方格，深度为
0.1mm
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一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 A、温度：各种真菌孢子萌发的最适 温度不同。适于低温的孢子，如小麦 黑穗病菌的厚垣孢子，温度超过 21~22℃ 就不能萌发。
1.1
6
一、杀菌剂毒力测定方法
液剂的附着 A、混合滴加 将供试药剂与孢子悬浮液混合滴加于 载玻片上。对水溶性药和稳定的悬浮 剂可得到正确的结果。对于非水溶性 药剂，因沉降快而不易获得正确结果。 简单迅速，适于大规模初筛。测得结 果一般偏高。
1.2
7
一、杀菌剂毒力测定方法
B、定量滴加药膜法
1.5
对照萌发率 处理萌发率 抑制萌发率 100 % 对照萌发率
24Leabharlann Baidu
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试验靶标 易产生孢子,便于镜检,如稻瘟病菌,梨 黑星病菌等.在培养基上培养,或将病 组织保湿培养,待产生孢子后备用。

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一、杀菌剂毒力测定方法
4
扩散法 管碟法： 在试验平面上放4个牛津杯（外径8mm， 内径6mm，高10mm）。用移液管将已 知浓度的标准液和不同浓度的待测液 移圆筒内，在适温下培养，让其形成 抑菌圈。测其直径。
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一、杀菌剂毒力测定方法
4
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扩散法：农用抗菌素效价测定 抗菌素效价的衡量单位分两类： A、稀释单位，将1mg抗菌素配成溶液， 在一定条件下进行稀释，对某一细菌 能抑制其生长的最高稀释度，即为1mg 抗菌素所含的单位。如1mg青霉素，在 一定条件下稀释3600倍能抑制白色念 球菌的繁殖，则1mg青霉素含有3600单 位。
一、杀菌剂毒力测定方法
4 扩散法 管碟法：国际公认的标准抗菌素效价测定 将直径9.0cm的培养皿保持水平，倒入约 20ml琼脂培养基，凝固后作为底层，然后 将马铃薯蔗糖琼脂培养基溶化，在50~60℃ 时，接种供试菌（细菌、霉菌孢子），取 其少量均匀倒入培养皿的底层培养基上， 做成试验平面（菌层）。
多菌灵对镰刀菌及由镰刀菌引起的赤
霉病、恶苗病的室内毒力测定和田间 药效比较一致。 但多菌灵在室内测定对由镰刀菌引起 的棉花枯萎病效果较好，而田间多菌 灵对棉花枯萎病效果较差。
3
第三章 杀菌剂毒力测定
三环唑（黑色素合成抑制剂）在室内测是 无效的。 嘧啶胺类杀菌剂（嘧菌胺）室内对灰霉病 孢子萌发没有抑制作用（300μL/ ml）， 但在植物上(1μL/ ml)，对灰霉病防效较好。 (该类药剂能抑制病菌甲硫氨酸的生物合成 和细胞壁降解酶的分泌，从而影响病菌侵 入寄主植物．)
2
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一、杀菌剂毒力测定方法
2
.3结果检查及其表示方法 十字交叉测2个直径，以其平均值代 表菌落大小。
处理菌落直径 菌饼直径 抑制生长率 1 100 % 对照菌落直径 菌饼直径
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一、杀菌剂毒力测定方法
3
滤纸片附着法(adsorption technique) 此法是将真菌孢子悬浮液用适当方法 附着在灭菌的滤纸片上，使其接触一 系列不同浓度的药剂，放在一定条件 下培养一定时间后，观察菌丝生长情 况。
一、杀菌剂毒力测定方法
4
扩散法：农用抗菌素效价测定 B、重量单位，将纯净的抗菌素直接 作为抗菌素效能的衡量单位，即1µg 相当于于1个单位。例如，纯净的1mg 链霉素含有1000个单位。
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一、杀菌剂毒力测定方法
4 扩散法： 滤纸片法：药剂加于一定大小的 圆形滤纸片上。 孔碟法：在培养基上打孔或留孔， 药液加于此孔内。 滴下法：利用注射器、毛细管、 移液管等将药液直接滴加于培养 基上。