土壤无机磷形态连续提取

磷形态分级试剂：1M NH4Cl、0.5M NH4F （pH8.2）、0.1M NaOH、0.3M Na3C6H5O7（柠檬酸钠）、1M NaHCO3、0.25M H2SO4、2M HCl、2M NaOH、0.8M H3BO3（硼酸）、饱和NaCl、连二亚硫酸钠（保险粉）

1、1M NH4Cl溶液:称取NH4Cl53.30g溶于约800mL水中，稀释至1L。

2、0.5M NH4F溶液（pH8.2）：称取NH4F18.50g溶于约800mL水中，稀释至950mL，用2M NaOH调节pH至8.2（用pH计测定），再稀释至1L。

3、0.1M NaOH溶液：称取NaOH 4.00g溶于800mL水中，冷却后稀释至1L。

4、0.3M 柠檬酸钠溶液：称取柠檬酸钠(Na3C6H5O7.2H2O) 88.2g溶于900mL热水中，冷却后稀释至1L。

5、1M NaHCO3溶液：称取84.00g NaHCO3溶于约800mL水中，稀释至1L。

6、0.25M H2SO4溶液：加浓硫酸15mL于约800mL水中，冷却后稀释至1L。

7、2M HCl溶液：量取168mL浓盐酸加入约600mL水中，稀释至1L。

8、2M NaOH溶液：称取NaOH 80.00g溶于800mL水中，冷却后稀释至1L。

9、0.8M硼酸溶液：称取硼酸（H3BO3）49.00g溶于约800mL热水中，冷却后稀释至1L。

10、饱和氯化钠溶液：称取NaCl 400g溶于1L水中，搅拌溶解至饱

和后过滤。

操作步骤：

1、（可溶性P和弱结合态P）：称取通过100目的风干土样0.500g，

置于50mL离心管中，加入1M NH4Cl 25mL,振荡30min，3000

转离心5min，将上清液全部倒入50mL方瓶中，取2mL提取液

加入比色管，滴加2滴指示剂，用2M HCl和2M NaOH调色至

待测液微黄，用钼锑钪法测定。

2、（Al-P）：在NH4Cl浸提过的土样中加入25mL0.5M NH4F

（pH8.2），振荡1h，3000转离心5min，上清液倒入白色50ml

方瓶中，取5mL提取液加入比色管，加入0.8M H3BO3溶液

7.5mL，滴加2滴指示剂，用2M HCl和2M NaOH调色至待测

液微黄，用钼锑钪法测定。

3、（Fe-P）：用饱和NaCl溶液清洗残渣两次（每次12.5mL），离

心后弃去清洗液。加入25mL 0.1M NaOH，振荡17h，3000转

离心5min，上清液倒入白色50ml方瓶中，用饱和NaCl溶液清

洗残渣两次（每次12.5mL），离心后一并倒入50mL白色方瓶

中。取10mL提取液加入比色管，滴加2滴指示剂，用2M HCl

和2M NaOH调色至待测液微黄（调色为黄色调整至无色），用

钼锑钪法测定。

4、（O-P）：向上一步提取过的土样残渣加入20mL 0.3M

Na3C6H5O7柠檬酸钠和2.5mL NaHCO3 85℃水浴加热15min，

加入Na2S2O4（连二亚硫酸钠）0.5g，快速搅拌后继续加热15min，

3000转离心5min，上清液倒入50ml定容离心管中，用饱和NaCl

溶液清洗残渣两次（每次12.5mL），离心后一并倒入50mL定

容离心管中定容，将定容离心管开盖暴露在空气中数小时使剩

余的Na2S2O4完全氧化（若不能氧化，可采取向提取液中通入

空气的办法）。取3mL提取液加入比色管，滴加2滴指示剂，

用2M HCl和2M NaOH调色至待测液微黄（调色为黄色调整至

无色），用钼锑钪法测定。若要校正过量柠檬酸对显色的影响，

可在加酸性钼锑钪之前加入3mL 5%钼酸铵溶液。

5、（Ca-P）：向上一步提取过的土样残渣加入25mL 0.25M H2SO4，

振荡1h，上清液倒入白色50ml方瓶中，用饱和NaCl溶液清洗

残渣两次（每次12.5mL），离心后一并倒入50mL白色方瓶中。

取20mL提取液加入比色管，滴加2滴指示剂，用2M HCl和

2M NaOH调色至待测液微黄（调色为无色调整至微黄），用钼

锑钪法测定。

6、制作磷比色标准系列溶液时要加入相同的提取剂。但由于加入

H3BO3溶液可完全消除浸提液中F-离子的干扰，因此在第2步

（Al-P）的测定中，磷标准系列溶液中，不必加入NH4F和H3BO3。

7、连二亚硫酸钠极不稳定，易氧化和分解，受潮或露置在空气中

会失效，要注意防潮密封贮存在阴凉处。

参考文献：

Investigation of Soil Legacy Phosphorus Transformation in Long-

Term Agricultural Fields Using Sequential Fractionation, P K‑edge XANES and Solution P NMR Spectroscopy

/10.1021/es504420n | Environ. Sci. Technol. 2015, 49, 168−176

Sequential Fractionation. Phosphorus was sequentially extracted using the Zhang and Kovar method for non-calcareous soils and divided into fractions of NH4Cl−P (soluble and loosely bound P), NH4F−P [aluminum phosphate (Al−P)], NaOH-P [iron phosphate (Fe−P)], citrate-bicarbonate-

dithionite P (CBD-P; reductant-soluble P) and H2SO4−P[calcium phosphate (Ca−P)]. The extracts were analyzed colorimetrically by the ascorbic acid method without digestion for molybdate reactive P (MRP) concentration or following persulfate digestion in an autoclave20 to determine solution TP concentration. Solution MRP was designated as inorganic P (Pi) in each fraction. Solution Po was calculated by TP minus Pi, although it may include complex Pi forms. For NH4Cl−P and H2SO4−P fractions, little Po was detected; thus, only Pi proportions are reported. Recovery of sequential fractionation was calculated by adding