实验二沉淀反应课件
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HCG作为抗原，可以用已知特异性抗体检测尿液中 的HCG以诊断早孕。
实验二沉淀反应
19
胶体金免疫法实验原理
胶体金是由氯化金与还原剂反应形成的一种胶 体颗粒，具有吸附蛋白质的特性(可以标记Ag或Ab)。
胶体金颗粒聚集到一定大小后即呈现出红色。
早早孕HCG胶体金试纸,采用了双抗体夹心 法的检测模式。
实验二沉淀反应
实验二沉淀反应
4
沉淀反应与凝集反应的比较
抗原性质
反应物
稀释对象不同
凝集反应
颗粒性抗原 凝集物
(振摇后不浑浊)
稀释Ab
(试管凝集)
沉淀反应
可溶性抗原 沉淀物
(振摇后浑浊)
稀释Ag
实验二沉淀反应
5
（二）沉淀反应的类型
根据Ag和Ab扩散的介质不同分为两大类： 1.在溶液中进行扩散—环状沉淀试验。
2.在琼脂中进行扩散—琼脂扩散试验： 单扩、双扩、火箭电泳、免疫电泳等。
C.加样； (未知Ag)
D.反应(湿盒37℃ 24h)；
E.结果分析。
实验二沉淀反应
（阴性对照）
(已知Ag) (未知Ag) (未知Ag)
16
E. 结果分析。
* 1:32与1:16相吻合 1:16与1:8相吻合 1:8与AFP(+)相吻合
标本中抗原为AFP抗原
标本中抗原滴度为1:32
* 1:32有沉淀线 1:64无沉淀线
20
HCG金标试纸
带条中含有均匀分布的胶 体金标记的鼠抗人HCG单抗
1.鼠抗人HCG单抗 (固定的检测线) 2.羊抗鼠IgG(固定的质控线)
标志线
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG结合形成免疫复合物； 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行, 到达质控线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
2.熟悉免疫电泳基本原理及应用。 3.了解火箭电泳基本原理及方法。 4.认识示教单扩、火箭电泳和免疫电泳的 染色片的图形。 5.了解胶体金免疫法检测HCG的原理、方法。
实验二沉淀反应
3
三、讲解内容
（一）沉淀反应的定义
指可溶性Ag与相应Ab在一定条件下发生特异 性结合，出现肉眼可见的沉淀物的反应。
可溶性Ag——沉淀原； 相应Ab——沉淀素。
实验二沉淀反应
6
1.环状沉淀试验（介绍）
用途：用于法医学鉴定和昆虫嗜血性鉴定。
实验二沉淀反应
7
2.双向琼脂扩散试验
原理：琼脂凝胶是一种半固体胶状物，里 面有无数小孔，Ag、Ab在孔中进行扩散，在比 例适合处形成沉淀线，即为阳性反应。
双孔型：Ag、Ab分子质量分析。
三角型： Ag性质分析
实验二沉淀反应
实验二沉淀反应
14
四、操作内容 1.甲胎蛋白(AFP)的检测（小组操作） （1）材料：
A.待测Ag： AFP可疑血清； B.阳性对照：AFP阳性血清； C.阴性对照：生理盐水（NS） D.已知抗体：兔抗人AFP。
实验二沉淀反应
15
（2）方法及步骤：
A.琼脂反应板制备；
B.打孔； (已知Ab)
(未知Ag)
实验二沉淀反应
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（5）注意事项：
A.打孔不要划破边缘； B.加样不宜过多，不要溢出； C.反应时间为24h； D.合理分配吸管，Ag、Ab吸管不能混淆。
实Biblioteka Baidu二沉淀反应
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2.胶体金免疫法检测尿液HCG
人绒毛膜促性腺激素 (human chorionic gonadotropin, HCG)
受精卵移行到子宫内着床后，形成胚胎，在胚胎的 发育过程中，胎盘合体滋养层细胞产生大量的HCG，是 一种具有促性腺发育的糖蛋白类激素,可通过孕妇血液 循环而排泄到尿中。
3.胶体金标记抗体在冻干状态下室温储存较 稳定,有效期长；
4.灵敏度高，10-25IU/L。
实验二沉淀反应
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完成实验报告
实验二 沉淀反应
操作内容： 1.双向琼脂扩散试验
(1)操作步骤 (2)绘制双向琼脂扩散试验结果图 (3)实验讨论
2.早早孕尿液HCG检测（胶体金免疫法） (1)操作步骤 (2)结果记录 (3)实验讨论
11
4.免疫电泳（示教）
1 2
先Ag电泳，后扩散。
注意：1、2孔为Ag样本孔。
实验二沉淀反应
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免疫电泳的用途：
A.用于某种蛋白缺乏的疾病的诊断； B.用于抗原纯度的定性分析。
实验二沉淀反应
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5.火箭电泳（示教）
火箭电泳＝单向琼脂扩散＋电场
用途：已知抗体测抗原，定量实验；
优点：耗时短，反应敏感性好。
实验二沉淀反应
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实验二沉淀反应
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梅花孔型： Ag/Ab效价的滴定
8
实验二沉淀反应
9
双向琼脂扩散试验
用途：抗原或抗体的检测，定性或可粗略定量。 缺点：需时长，灵敏度不高。
实验二沉淀反应
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3.单向琼脂扩散试验（示教）
Ag稀释度
1 :80
1 :40 1 :20
1 :10
用途：已知抗体测抗原，定量实验；
缺点：耗时长。
实验二沉淀反应
实验二 沉淀反应
实验二沉淀反应
1
一、实验内容
1.双向琼脂扩散试验(小组做) 2.单向琼脂扩散试验(示教) 3.免疫电泳(示教) 4.火箭电泳(示教) 5.尿液HCG检测(胶体金免疫法 ) (小组操作) 6.录像：免疫反击战
沉淀反应 免疫标记技术
实验二沉淀反应
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二、目的与要求
1.掌握单扩、双扩基本原理、方法、结果 分析及应用。
实验二沉淀反应
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带条中含有均匀的胶体 金标记的鼠抗人HCG单抗
2.羊抗鼠IgG（二抗）
1.鼠抗人HCG单抗
实验二沉淀反应
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胶体金免疫法与放射免疫测定法、 ELISA等方法相比,具有的优点：
1.胶体金法不需ELISA法中所要求的作用的 底物和显色剂，操作更简便；
2.胶体金法无污染，不危害操作者，也不污染 环境；
实验二沉淀反应
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胶体金免疫法实验原理
胶体金是由氯化金与还原剂反应形成的一种胶 体颗粒，具有吸附蛋白质的特性(可以标记Ag或Ab)。
胶体金颗粒聚集到一定大小后即呈现出红色。
早早孕HCG胶体金试纸,采用了双抗体夹心 法的检测模式。
实验二沉淀反应
实验二沉淀反应
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沉淀反应与凝集反应的比较
抗原性质
反应物
稀释对象不同
凝集反应
颗粒性抗原 凝集物
(振摇后不浑浊)
稀释Ab
(试管凝集)
沉淀反应
可溶性抗原 沉淀物
(振摇后浑浊)
稀释Ag
实验二沉淀反应
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（二）沉淀反应的类型
根据Ag和Ab扩散的介质不同分为两大类： 1.在溶液中进行扩散—环状沉淀试验。
2.在琼脂中进行扩散—琼脂扩散试验： 单扩、双扩、火箭电泳、免疫电泳等。
C.加样； (未知Ag)
D.反应(湿盒37℃ 24h)；
E.结果分析。
实验二沉淀反应
（阴性对照）
(已知Ag) (未知Ag) (未知Ag)
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E. 结果分析。
* 1:32与1:16相吻合 1:16与1:8相吻合 1:8与AFP(+)相吻合
标本中抗原为AFP抗原
标本中抗原滴度为1:32
* 1:32有沉淀线 1:64无沉淀线
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HCG金标试纸
带条中含有均匀分布的胶 体金标记的鼠抗人HCG单抗
1.鼠抗人HCG单抗 (固定的检测线) 2.羊抗鼠IgG(固定的质控线)
标志线
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG结合形成免疫复合物； 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行, 到达质控线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
2.熟悉免疫电泳基本原理及应用。 3.了解火箭电泳基本原理及方法。 4.认识示教单扩、火箭电泳和免疫电泳的 染色片的图形。 5.了解胶体金免疫法检测HCG的原理、方法。
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三、讲解内容
（一）沉淀反应的定义
指可溶性Ag与相应Ab在一定条件下发生特异 性结合，出现肉眼可见的沉淀物的反应。
可溶性Ag——沉淀原； 相应Ab——沉淀素。
实验二沉淀反应
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1.环状沉淀试验（介绍）
用途：用于法医学鉴定和昆虫嗜血性鉴定。
实验二沉淀反应
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2.双向琼脂扩散试验
原理：琼脂凝胶是一种半固体胶状物，里 面有无数小孔，Ag、Ab在孔中进行扩散，在比 例适合处形成沉淀线，即为阳性反应。
双孔型：Ag、Ab分子质量分析。
三角型： Ag性质分析
实验二沉淀反应
实验二沉淀反应
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四、操作内容 1.甲胎蛋白(AFP)的检测（小组操作） （1）材料：
A.待测Ag： AFP可疑血清； B.阳性对照：AFP阳性血清； C.阴性对照：生理盐水（NS） D.已知抗体：兔抗人AFP。
实验二沉淀反应
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（2）方法及步骤：
A.琼脂反应板制备；
B.打孔； (已知Ab)
(未知Ag)
实验二沉淀反应
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（5）注意事项：
A.打孔不要划破边缘； B.加样不宜过多，不要溢出； C.反应时间为24h； D.合理分配吸管，Ag、Ab吸管不能混淆。
实Biblioteka Baidu二沉淀反应
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2.胶体金免疫法检测尿液HCG
人绒毛膜促性腺激素 (human chorionic gonadotropin, HCG)
受精卵移行到子宫内着床后，形成胚胎，在胚胎的 发育过程中，胎盘合体滋养层细胞产生大量的HCG，是 一种具有促性腺发育的糖蛋白类激素,可通过孕妇血液 循环而排泄到尿中。
3.胶体金标记抗体在冻干状态下室温储存较 稳定,有效期长；
4.灵敏度高，10-25IU/L。
实验二沉淀反应
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完成实验报告
实验二 沉淀反应
操作内容： 1.双向琼脂扩散试验
(1)操作步骤 (2)绘制双向琼脂扩散试验结果图 (3)实验讨论
2.早早孕尿液HCG检测（胶体金免疫法） (1)操作步骤 (2)结果记录 (3)实验讨论
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4.免疫电泳（示教）
1 2
先Ag电泳，后扩散。
注意：1、2孔为Ag样本孔。
实验二沉淀反应
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免疫电泳的用途：
A.用于某种蛋白缺乏的疾病的诊断； B.用于抗原纯度的定性分析。
实验二沉淀反应
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5.火箭电泳（示教）
火箭电泳＝单向琼脂扩散＋电场
用途：已知抗体测抗原，定量实验；
优点：耗时短，反应敏感性好。
实验二沉淀反应
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实验二沉淀反应
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梅花孔型： Ag/Ab效价的滴定
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实验二沉淀反应
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双向琼脂扩散试验
用途：抗原或抗体的检测，定性或可粗略定量。 缺点：需时长，灵敏度不高。
实验二沉淀反应
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3.单向琼脂扩散试验（示教）
Ag稀释度
1 :80
1 :40 1 :20
1 :10
用途：已知抗体测抗原，定量实验；
缺点：耗时长。
实验二沉淀反应
实验二 沉淀反应
实验二沉淀反应
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一、实验内容
1.双向琼脂扩散试验(小组做) 2.单向琼脂扩散试验(示教) 3.免疫电泳(示教) 4.火箭电泳(示教) 5.尿液HCG检测(胶体金免疫法 ) (小组操作) 6.录像：免疫反击战
沉淀反应 免疫标记技术
实验二沉淀反应
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二、目的与要求
1.掌握单扩、双扩基本原理、方法、结果 分析及应用。
实验二沉淀反应
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带条中含有均匀的胶体 金标记的鼠抗人HCG单抗
2.羊抗鼠IgG（二抗）
1.鼠抗人HCG单抗
实验二沉淀反应
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胶体金免疫法与放射免疫测定法、 ELISA等方法相比,具有的优点：
1.胶体金法不需ELISA法中所要求的作用的 底物和显色剂，操作更简便；
2.胶体金法无污染，不危害操作者，也不污染 环境；