磁珠法总RNA提取试剂盒说明书

磁珠法总RNA提取试剂盒

MagBeads Total RNA Extraction Kit

【目录号】TRE-5010；TRE-5030；TRE-5100；

【运输条件】2~25℃；

【保存条件】磁珠悬浮液2~8℃；其它组分室温；

【试剂盒组成】

【注意事项】

1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；

2. 清洗液1使用前请按照瓶身标签描述加入异丙醇，稀释备用；

3. 清洗液2使用前请按照瓶身标签描述加入无水乙醇，稀释备用；

4. 建议使用新鲜或4℃存放少于3天样本进行提取，反复冻融导致核酸得量明显降低；

5. 请仔细阅读本说明书，并严格按照操作步骤完成操作。

磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案

【产品简介】

本试剂盒适用于从植物材料、动物组织、各种微生物、培养细胞等样本中提取总RNA。

试剂盒采用独特分离作用的纳米磁珠和缓冲液体系，磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对核酸具有极强的富集能力，当条件改变时可以可逆的释放所吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。

试剂盒经过磁珠与核酸结合、清洗、洗脱等步骤，最大限度的去除了蛋白质及其它杂质，所得RNA产物纯度优良，可直接应用于酶切、PCR、qPCR、文库构建、测序等各种下游分子生物学实验。

【试剂盒说明】

仪器自动版

英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪、核酸提取仪配套用磁棒套、EP管离心机、涡旋振荡仪、96孔方孔圆底板、EP管、无水乙醇、异丙醇以及氯仿、PBS溶液（1×）。

手动版

水浴锅或金属浴、EP管离心机、涡旋振荡仪、EP管、EP管配套用磁力架、无水乙醇、异丙醇、氯仿、PBS溶液（1×）。

【手动版操作步骤】

1. 样本前处理及裂解

1）贴壁培养细胞

倒弃培养液，用PBS溶液（1×）冲洗一次，按照每10cm2生长细胞中加入1mL的比例加

入裂解液，轻微晃动使裂解液均匀分布于细胞表面，将内含细胞的裂解液转移至EP管中，

涡旋振荡至无明显颗粒物，室温静置5min。

2）悬浮培养细胞

将悬浮培养细胞连同培养液一起转入EP管中，4℃、8,000g离心2min，吸弃上清液，注

意勿破坏细胞沉淀。按照每5~10×106个细胞中加入1mL的比例加入裂解液，涡旋振荡至

磁珠法总RNA提取试剂盒

无明显颗粒物，室温静置5min。

3）动物组织、植物组织

将新鲜或超低温保存的样本（≤100mg）液氮研磨至粉末状，尽量全部转移至EP管中。

向EP管中加入1mL裂解液，涡旋振荡至无明显颗粒物，室温静置5min；

2. 分离RNA层

向裂解完毕EP管加入200μL氯仿，盖紧EP管盖，用力震摇混合溶液至乳浊液，室温静

置5min。4℃、12,000g离心10min，从离心机中小心取出EP管，内部匀浆液分为三层，

小心吸取最上层无色溶液并转移至新的EP管中。

3. 核酸结合

向EP管中加入400μL异丙醇和20μL提前摇晃均匀的磁珠悬浮液，高速涡旋振荡5min。

4. 磁性分离

将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，如EP管内盖有磁珠残液，可保持EP管

在磁力架上，整体上下颠倒2~3次使磁珠被吸附完全。吸弃上清液，避免接触磁珠。

5. 清洗

1）向EP管中加入600μL清洗液1，用移液枪吹散磁珠，涡旋振荡2min，参照步骤4进行

磁性分离。

2）使用600μL清洗液2，参照步骤5(1)操作2次。

6. 除醇

将弃尽上清液后的EP管保持于磁力架上，打开EP管盖室温晾干约8min至无明显乙醇味。

7. 洗脱

向EP管中加入30~100μL洗脱液，涡旋振荡至磁珠全部分散于液相中，58℃温浴5min，

每隔2min涡旋振荡10s。

8. 核酸转移

洗脱完毕，将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另

一干净EP管中，提取过程完毕，此时可弃去磁珠。

【仪器自动版操作步骤】

本操作以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32份样本的提取工作。

1. 96孔板准备

参照下表用量向96孔板各孔位中分别加入相应试剂：

磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案

注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀；2）为提高效率建议使用排枪进行加液操作。

2. 样本前处理及裂解

按照【手动版操作步骤】中步骤1进行操作。

3. 分离RNA层

向裂解完毕EP管加入200μL氯仿，盖紧EP管盖，用力震摇混合溶液至乳浊液，室温静

置5min。4℃、12,000g离心10min，从离心机中小心取出EP管，内部匀浆液分为三层，

小心吸取最上层无色溶液（勿超过550μL）并转移至96孔板第2/8列对应孔位中。

4. 上机提取

将96孔板置于ETP-300型核酸提取仪中，插入磁棒套，打开仪器操作软件，运行“RNA

提取程序”。

“RNA提取程序”参数设置如下，如原程序不慎丢失，可自行设定：

5. 核酸转移

程序运行完毕后，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中，提取过程

完毕，此时可以弃去96孔板。

（1702修订版）

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