HPLC_MS_MS同时测定水产品中喹烯酮_喹乙醇和5种大环内酯类抗生素残留

HPLC MS/M S同时测定水产品中

喹烯酮、喹乙醇和5种大环内酯类抗生素残留

刘永涛*1,2,刘振红3,丁运敏2,4,艾晓辉1,2,杨 红1,2

(1 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,无锡214081;2 中国水产科学研究院长江水产研究所农业部淡水鱼类种质监督检验测试中心,荆州434000;3 潍坊市坊子区人民医院,维坊261200;4 华中农业大学水产学院,武汉4340070)

摘 要:建立了水产品中喹烯酮、喹乙醇和5种大环内酯类抗生素同时测定的

高效液相色谱串联质谱法。向样品中加入无水硫酸钠,以乙酸乙酯 乙腈的混合

溶液为提取剂,用正己烷净化。以乙腈 10mm o l/L甲酸铵溶液为流动相,流速

为0 3mL/m in,以H ypersilGOLD为色谱分离柱,用配有电喷雾离子源的三重

四极杆质谱进行定性定量分析。在1~1000ng/mL范围内,7种药物呈良好线

性关系。在鲫鱼、南美白对虾和甲鱼空白肌肉中添加水平为2~10 g/kg时,

该方法的回收率为67 52%~108 89%,相对标准偏差为4 2%~14%,方法检

测限为1 g/kg,定量限为2 g/kg。方法适用于同时测定水产品中喹烯酮、喹

乙醇和5种大环内酯类药物的残留量。

关键词:高效液相色谱 串联质谱法;喹烯酮;喹乙醇;大环内酯类;水产品;残

留

中图分类号:O657 63 文献标识码:A 文章编号:1000 0720(2010)08 044 04

喹烯酮和喹乙醇是喹口恶啉类化合物,用于饲料添加剂具有抗菌和促生长作用[1,2]。随着对喹乙醇研究的深入,结果表明,喹乙醇具有明显的蓄积毒性和DNA显性损伤等副作用[3~5]。替米考星、泰乐菌素、北里霉素、红霉素、螺旋霉素均属于大环内酯类抗生素,可用于治疗对革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌、霉形体、螺旋体等均有抑制作用[6]。而大环内酯类药物的使用对人类的危害也逐渐被认识[7,8],目前,关于水产品中喹烯酮、喹乙醇和大环内酯类检测方法报道较少且分析的药物种类比较单一[9~11],同时测定水产品中喹烯酮、喹乙醇和大环内酯类药物的高效液相色谱法尚未见报道。1 实验部分

1 1 仪器与试剂

高效液相色谱 串联质谱(Ther m o TSQ QUAN TUM ACESS MAX);20PR 520型自动高速冷冻离心机(日本日立)。

喹烯酮标准品(纯度 99%,北京中农发药业公司);喹乙醇标准品(纯度 95%),替米考星标准品(纯度 98%),泰乐菌素标准品(纯度 99%),北里霉素标准品(纯度 72%),螺旋霉素标准品(纯度 96%),均为D r Ehrenstorfer Gm b H;红霉素标准品(纯度 99%,Bo m e i);甲醇、乙腈、甲酸、甲酸铵、乙酸乙酯、正己烷(色谱纯,J T Baker)。

标准储备溶液、混合标准溶液和基质混合标准溶液的配制:分别称取0 01g(精确至0 0001g)的

*收稿日期:2009 11 24;修订日期:2010 02 10

基金项目:中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目资助作者简介:刘永涛(1979-),男,硕士;E m a i:l t h i ncat2005@si na co m

各标准品,用乙腈配制成100 g/mL标准储备液。分别取1mL标准储备液于10mL容量瓶中用乙腈定容至10mL,4!保存。空白样品基质溶液将混合标准溶液稀释制成1、5、10、50、100、200、500和1000ng/mL的基质标准溶液。

1 2 实验方法

1 2 1 样品处理 鱼、虾、甲鱼取肌肉部分,样品均质混匀,-18!冰箱中保存,备用。测定时,将匀浆冷冻保存的肌肉样品室温下自然解冻。取样品5 0g置于50mL离心管中,准确加入50 L 混合标准工作液,涡旋混合30s,避光放置10m in。加入10g Na2SO4(无水),用玻璃棒将样品和无水硫酸钠分散均匀,再加入30mL V(乙酸乙酯)∀V(乙腈)=1∀1混合溶剂,涡旋混合1m i n,超声提取10m i n。以4000r/m i n离心8m i n,取上清液于鸡心瓶中,残渣中加入15mL乙酸乙酯 乙腈混合溶液,重复提取1次,合并2次提取液于鸡心瓶中,置40!水浴旋转蒸发至干,加入1mL 15%乙腈水溶液涡旋溶解残留物,再加入2mL正己烷涡旋混合20s,转入5m具塞塑料离心管中, 4000r/m i n离心10m i n,弃去正己烷层,下层溶液经0 22 m滤头过滤置进样瓶中,HPLC M S/M S 测定。整个样品处理过程要求避光。

1 2 2 色谱和质谱分析条件 H ypersil GOLD C18色谱柱(100mm#2 1mm,3 m);柱温:30!流速:0 3m L/m i n;流动相:A为乙腈,B为10mm ol/L甲酸铵溶液;流动相梯度:0~2 0m in 10%A~30%A,2 0~3 0m in30%~60%A, 3 0~6 0m i n60%A~95%A,6 0~7 0m i n, 95%A~10%A,7 0~9 0m i n,10%A;进样量

20 L。离子化模式:加热大气压电喷雾离子源

(H ESI),正离子模式;检测方式采用选择反应监测(SR M)模式;喷雾电压:3000V;鞘气压力43arb;辅助气压力37arb;离子传输毛细管温度: 360!;碰撞气及压力:氩气,23 8Pa。母离子、定性离子对、定量离子对、碰撞能量和管透镜补偿电压见表1。

表1 喹烯酮、喹乙醇和5种大环内酯类分析物质谱条件

T ab 1 Para m e ters for m ass s p ectro m etric analysis of qu i noceton e,olaqu i ndox and five k i nds of macro li d e ant i b i ot i cs 分析物母离子(m/z)子离子(m/z)碰撞能量E/V管透镜补偿电压E/V

喹乙醇264 00143 15*/211 9932/1686/86

喹烯酮307 00143 06/273 02*22/1890/90

红霉素734 30158 01*/576 2829/17105/105

北里霉素772 30109 22/173 90*34/26137/137

螺旋霉素843 50142 00/174 00*32/34110/110

替米考星869 40174 05/696 33*42/38146/146

泰乐菌素916 40173 87*/772 5535/26144/144

*离子对为定量离子对

2 结果与讨论

2 1 线性范围、相关性、检测限和最低定量限

配制1~1000ng/mL的混合基质标准溶液,以各分析物的峰面积为纵坐标,质量浓度为横坐标绘制标准曲线。结果表明,7种药物均呈良好的线性关系,相关系数 0 997。以3倍信噪比(S/N 3)计算方法的最低检测限,以10倍信噪比(S/N 10)计算方法的最低定量限,结果表明,该方法的检测限和最定量限分别为0 5 g/kg和2 g/kg。

2 2 回收率测定

在鲫鱼、南美白对虾和甲鱼空白肌肉组织样品中分别添加3个浓度水平的混合标准溶液:使样品浓度分别为2、5、10 g/kg每个浓度做5个平行,每个平行设一个空白对照,按样品前处理过程处理后测定回收率,计算相对标准偏差。结果表明,方法的回收率为67 5%~108 9%,相对