固体曲糖化酶活力的测定

固体曲糖化酶活力的测定

实验原理：

1.固体曲在酿造过程中将原料淀粉转化为可发酵糖类的

重要酶源。其中其主要作用的是糖化酶，它可将淀粉水

解为葡萄糖供微生物发酵，生成酒精及其它各种相应

的白酒成分。固体曲质量好，糖化活力高，原料淀粉利

用率高，出酒率也高。故糖化酶活力的高低是衡量固体

曲质量的重要指标。

2.固体曲糖化酶活力定义为：1g绝干固体曲，在30℃、PH=4.6

条件下，1h内水解可溶性淀粉为葡萄糖的毫克数。其测定

的方法可用修正的蓝-艾农法.

实验试剂：

1. 斐林试剂

2. 0.1%葡萄糖标准溶液（准确称取1g无水葡萄糖(预先烘干)，

用水溶解，加5ml浓盐酸，用水稀释至1000ml

3. 乙酸-乙酸钠缓冲溶液（PH=

4.6）

4. 0.01mol/L NaOH溶液称取4g NaOH ,用水溶解并稀释至1000ml

5. 2%可溶性淀粉溶液准确称取2g可溶性淀粉（预先于100～

105℃烘干），加少量水调匀，倾入80ml沸水中，继续煮沸至

透明，冷却后用水稀释至100ml.

实验步骤：

1. 5%固体曲沁出液的提取 称取5.6702g 固体曲（以绝干曲计），

置于250ml 烧杯中，加入90ml 水和10ml,PH=4.6的缓冲溶液，摇匀，于30℃水浴中保温沁取1h ，每隔15min 搅拌一次，有脱脂棉过滤，滤液为5%固体曲沁出液。

2. 固体曲糖化液的制备 吸取25ml 2%可溶性淀粉溶液，置于50ml 容量瓶中，于30℃水浴中预热10min.准确加入5ml 5%固体曲沁出液，摇匀，立即计时。于30℃水浴中准确保温1h 。迅速加入15ml 0.1mol/LNaOH 溶液，终止酶解反应。冷却至室温，用水定容至刻度。同时制作一空白液：准确吸取25ml 2%可溶性淀粉溶液，置于50ml 容量瓶中，先加入15ml 0.1mol/LNaOH 溶液，然后准确加入5ml 空白液，用水定容至刻度。

3. 测定 吸取斐林甲液、乙液各5ml ，置于锥形瓶中，准确加入

5ml 空白液，并用滴定管预先加入适量的0.1%葡萄糖标准溶液（使后滴定时消耗0.1%葡萄糖标液在1ml 以内，且在1min 时间以内），摇匀，于电炉上加热至沸腾，立即用0.1%葡萄糖标准溶液滴定至蓝色消失，此次滴定操作需在1min 内完成。记录所消耗0.1%葡萄糖标准溶液的体积。 准确吸取5ml 糖化液代替5ml 空白液，其余操作同上。

计算公式：

糖化酶活力=c(V 0-V)×10001

5100

550⨯⨯⨯m

式中V0---5ml 空白液消耗0.1%标准葡萄糖溶液的体积，ml V---5ml 糖化液消耗0.1%标准葡萄糖溶液的体积，ml

5

50

---5ml 糖化液换算成50ml 糖化液中的糖量，g 5100

---5ml 沁出液换算成100ml 沁出液的糖量，g

m---绝干固体曲样品质量，50g

实验记录：

糖化酶活力的测定

结果计算：

糖化酶活力1=0.005555×（7.87-7.68）×103-⨯

41022.4515100550-⨯=⨯⨯

糖化酶活力

2=0.005555×（8.61-8.59）×310-×51044.451

5100

550

-⨯=⨯⨯

糖化酶活力

3==0.005555×（9.58-9.47）×103-×41044.251

5100

550

-⨯=⨯⨯

结果讨论:

在此次实验中，进行初检时，可能滴定的误差较大，导致在复检时有相对的误差。