动物源性食品中磺胺类药物残留量LCMSMS分析方法

动物源性食品中磺胺类药物残留量LC-MS/MS分析方法动物源性食品中磺胺类药物残留量LC-MS/MS分析方法

一、背景

磺胺类药物（Sulfonamides，SAs）是指一类具有对氨基苯磺酰胺结构、用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学药物，是当前畜禽生产中常用的抗菌、抗原虫药物，具有抗菌谱广、价格低、化学性质稳定、使用方便等优点。但是摄入大量磺胺类药物会破坏正常免疫机能，破坏人的造血系统，造成溶血性贫血症、粒血细胞缺乏症等症状。并且人体长期摄入含磺胺类药物的动物性食品后，药物不断在人体内蓄积，当积累到一定程度后，就会对人体产生毒性作用，同样可引起肾损害，所以针对磺胺类药物的监控是一项刻不容缓的工作。

目前关于磺胺类药物的标准已出台《GB/T 20759-2006 畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》、《GB/T 21316-2007动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定高效液相色谱-质谱-质谱法》，方法中涉及肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣、牛奶中磺胺脒、甲氧苄啶、磺胺醋酰、磺胺嘧啶等几十种磺胺类药物的前处理方法及液质检测方法。本文中将详细介绍采用AB SCIEX API 4000™ LC-MS/MS检测磺胺类药物分析10种磺胺类药物，并且经实验证实AB SCIEX API 4000+™、4000 QTRAP®、API 5000™以及TRIPLE QUAD™ 5500、QTRAP® 5500同样适用与该方法。

二、化合物信息

表1. 化合物基本信息

化合物英文通用名分子量CAS 分子式

H10N4O2S 磺胺嘧啶Sulfadiazine 250.3 68-35-9 C

10

H11N3O2S 磺胺吡啶Sulfapyridine 249.3 144-83-2 C

11

H9N3O2S2磺胺噻唑Sulfathiazole 255.3 72-14-0 C

9

H12N4O2S 磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine 264.3 127-79-7 C

11

H14N4O2S 磺胺二甲嘧啶Sulfadimidine 278.3 57-68-1 C

12

H12N4O3S 磺胺甲氧哒嗪Sulfamethoxypyridazine 280.3 80-35-3 C

11

H14N4O4S 磺胺间二甲氧嘧啶Sulfadimethoxine 310.3 155-91-9 C

12

H9ClN4O2S 磺胺氯达嗪Sulfachlorpyridazine 284.7 80-32-0 C

10

H14N4O4S 磺胺邻二甲氧嘧啶Sulfadoxine 310.3 2447-57-6 C

12

H11N3O3S 磺胺甲基异恶唑sulfamethoxazole 253.3 723-46-6 C

10

H14N4O2S 磺胺苯吡唑Sulfaphonazole 314.4 526-08-9 C

15

三、前处理方法（GB/T 21311-2007）

3.1 提取

3.1.1 肌肉、内脏、鱼虾和肠衣

称取2 g（精确至0.01 g）试样置于玻璃研钵内，再称取约6 g（精确至0.01 g）C18填料加至试样上用玻璃杵轻轻研磨，使样品与填料混合均匀（色泽均一，状态分散），装于50 mL具螺旋盖聚四氟乙烯离心管中，加入25 mL乙腈-水溶液，涡旋振荡1 min，放入家用微波炉中在光波模式下微波辐照30 s，3000 r/min离心5 min，将乙腈层移入100 mL棕色分液漏斗中。离心后的沉淀物再加入25 mL乙腈摇匀，微波辅助提取30 s，3000 r/min离心5 min，合并已经提取液，待净化。

3.1.2 牛奶

称取2 g（精确至0.01 g）试样置于玻璃研钵内，加入6 g（精确至0.01 g）硅藻土，另加入6 g（精确至0.01 g）C18填料，用玻璃杵轻轻研磨30 s，使样品与填料混合均匀（色泽均一，状态分散），装于50 mL具螺旋盖聚四氟乙烯离心管中，加入25 mL乙腈-水溶液，涡旋振荡1 min，放入家用微波炉中在光波模式下微波辐照30 s，3000 r/min离心5 min，将乙腈层移入100 mL棕色分液漏斗中。离心后的沉淀物再加入25 mL乙腈摇匀，微波辅助提取30 s，3000 r/min离心5 min，合并已经提取液，待净化。

3.2 净化

提取液中加入25 mL乙腈饱和正己烷溶液，振摇5 min，将底层乙腈溶液移入150 mL棕色鸡心瓶中，加入10 mL正丙醇，用旋转蒸发仪于45℃水浴中加压蒸发至近干，氮气流吹干，准确加入1 mL乙腈-水溶液，超声30 s溶解残渣，将溶解液移入10 mL棕色离心管中，加入0.5 mL乙腈饱和正己烷，涡旋振荡2 min，于3000 r/min离心5 min，弃去正己烷溶液，取底层乙腈-水溶液过0.22 µm微孔滤膜后，供高效液相色谱-质谱/质谱测定。

四、实验方法

4.1 液相条件

色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18, 3.0×100mm, 3.5 µm；

柱温：40℃，流速：300 µL/min；

流动相：A：水（含1mM甲酸铵及0.1%甲酸），B：乙腈；

梯度洗脱，洗脱条件见表2：

表2. 液相色谱条件

时间（min）流速（µL/min）A（%）B（%）

0 300 90 10

2.5 300 10 90

4.8 300 10 90

4.9 300 90 10

10 300 90 10

4.2 质谱条件

离子源：Turbo V™ 离子源；

扫描模式：正离子；

采集模式：多反应监测MRM；

表3. 磺胺类药物代谢物MRM离子对

化合物名称母离子定量子离子定性子离子扫描模式

磺胺氯哒嗪285 156 108 正离子

磺胺嘧啶251 156 108 正离子

磺胺甲基异恶唑254 156 108 正离子

磺胺噻唑256 156 108 正离子

磺胺甲基嘧啶265 156 172 正离子